NS复合乳酸菌制剂对断奶仔猪免疫水平的影响

选择二元杂交(杜/长)20日龄断奶仔猪90头,平均断奶体重8.99 kg土1.60 kg,按体重和性别分成3个处理组,每处理3个重复.A组为对照组,饲喂玉米、豆粕基础日粮;B组为基础日粮添加NS复合乳酸菌组2 g/kg;C组为基础日粮添加抗生素组(2 g/kg金霉素、0.25 g/kg阿莫西林和0.125 g/kg的支...     

三株芽孢杆菌对沙门氏杆菌的体外拮抗作用研究

本实验以三株芽孢杆菌为材料，采用与沙门氏菌同时接种及先后接种的方法，对其与沙门氏菌的生物拮抗作用进行了研究。结果表明：X1、X2、X3三株芽孢杆菌与沙门氏菌接种后共培养时对沙门氏菌均呈现明显的抑制作用．12h后开始呈现一定的抑制作用，24h时作用最明显，至48h时也还有一定的抑制作用，其抑菌作用依次为：12h时XI〉X2〉X3，24h时X2〉X3〉X1，48h时X1〉X2，X3对沙门氏杆菌没有抑制作用。接种X1、X2、X3三株芽孢杆菌培养24h后接种沙门氏菌对沙门氏菌均呈现明显的抑制作用，8h后开始呈现一定的抑制作用，12h左右作用最明显，24h后效果却不太明显，其抑菌作用依次为：12h时X1〉X3〉X2。接种沙门氏菌培养12h后接种X1、X2、X3三株芽孢杆菌对沙门氏菌也呈现明显的抑制作用，6h后开始呈现一定的抑制作用，8h时作用最明显，至24h时也还有一定的抑制作用，其抑菌作用依次为：8h时X2〉X1〉X3。与对照组比较，统计分析表明：（1）同时接种共培养条件下，接种X1后6h～72h内差异极显著（P〈0．01）；接种X2后6h～24h和48h～72h内差异极显著（P〈0．01），24h～48h差异显著（P〈0．05）；接种X3后0h～72h内差异不显著（P〉0．05）。（2）接种X1、X2、X3培养后接种沙门氏菌条件下，接种X1后0h～72h内差异极显著（P〈0．01）；接种X2后0h～6h和24h～48h内差异显著（P〈0．05），6h～24h为差异极显著（P〈0．01）；接种X3后0h～72h内差异不显著（P〉0．05）。（3）接种沙门氏菌后接种X1、X2和X3条件下，接种X1后6h～8h和12h～36h内差异极显著（P〈0．01），8h～12h为差异显著（P〈0．05）；接种X2后6h～8h和12h～36h内差异极显著（P〈0.01）；接种X3后24h～36h内差异显著（P〈0．05）。     

火烈鸟巴氏杆菌病的诊断

2002年11月四川某动物园相继有包括火烈鸟、白鹇、白鹤等在内的珍稀鸟类出现大量发病死亡的现象。经对患病火烈鸟的病理学和微生物学检测,确诊本次疫情系巴氏杆菌感染所致。动物园立即采取相应治疗措施,很快控制了疫情。诊断过程如下：     

猪细小病毒(PPV)SC1株非结构蛋白NS1基因的克隆和序列分析

本文根据GenBank中PPV NADL-2株病毒基因组序列用Oligo6.0设计了一对引物,以抽提的PPV-SC1 RF-DNA为模板,通过PCR扩增出长约2.2kb的片段,将其插入克隆载体质粒pMD 18-T的EcoRV酶切位点处,构建了重组质粒pPNS1并测序.密码子偏向性分析结果表明PPV-SC1 NS1基因在同一氨基酸的不同密码子的选择上存在一定的偏向性,主要是以A结尾的密码子;用Bioedit和swiss TMPRED软件预测PPV-SC1 NS1的跨膜区,并没有得到有显著意义的跨膜区的存在;根据基于motif数据库的结构域预测,PPV-SC1 NS1的第393～415位氨基酸残基存在潜在的ATP/GTP结合位点,该蛋白还存在16个蛋白激酶磷酸化位点,21个酪蛋白激酶2磷酸化位点,3个cAMP-/cGMP依赖蛋白激酶磷酸化位点,PPV-SC1 NS1蛋白与POX-D5(痘病毒D5蛋白)具有一致的保守结构域,推测NS1可能与POX-D5有类似的功能.     

猪乙型脑炎病毒EⅢ与猪细小病毒VP2基因的串联表达及免疫原性

通过重叠PCR的方法将猪细小病毒(PPV)VP2基因和猪乙型脑炎病毒(JEV)EⅢ基因通过Linker连接,并克隆至真核表达载体pCI-neo,得到重组质粒pCI-VP2-EⅢ。将重组质粒pCI-VP2-EⅢ转染Vero细胞,其表达产物通过RT-PCR和间接免疫荧光试验的方法检测出目的基因的转录与表达。质粒pCI-VP2-EⅢ在无免疫佐剂参与的情况下,免疫6～8周龄的BALB/c小鼠,同时设空质粒接种组,猪细小病毒灭活苗和猪乙脑弱毒苗免疫组及磷酸盐缓冲液接种组作为参比对照。结果表明,pCI-VP2-EⅢ免疫组,在二免后1周产生JEV和PPV的特异性抗体,三免后达到高峰;对ConA有显著的反应性,且与对照组差异明显;通过流式细胞仪检测,CD3+T、CD4+T显著高于猪细小病毒灭活苗免疫组和对照组(P<0.05),略低于乙脑减毒苗免疫组,但CD8+T显著高于其他试验组(P<0.05),这表明pCI-VP2-EⅢ接种后可能主要是以CD8+T淋巴细胞介导的细胞免疫。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2主要抗原区域的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

本研究以高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HPPRRSV)重组NSP2蛋白为包被抗原,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。通过RT-PCR技术,从PRRSV SCMS08株中,成功扩增出NSP2的主要抗原区域。将其克隆到pET-32a(+),成功构建原核表达载体,并转化宿主菌(E.coli)Rosetta 2(DE3)。以镍柱纯化表达蛋白,SDS-PAGE检测证实重组蛋白获得了高效表达,Western blot检测表明所表达蛋白能够被抗组氨酸标签单克隆抗体和PRRSV阳性血清识别。以此蛋白包被酶标板,初步建立了PRRSV NSP2-ELISA诊断方法。优化的NSP2-ELISA的最佳抗原包被浓度为1.7μg·mL-1,血清的最佳稀释度为1∶40。用该方法检测185份血清样品,与IDEXX公司ELISA试剂盒检测结果符合率为90.8%。建立的间接ELISA方法敏感性高、特异性强,可用于猪繁殖与呼吸综合征的常规诊断及流行病学调查。     

伪狂犬病病毒Fa株gE基因在大肠杆菌中的表达及gE-ELISA鉴别诊断方法的建立

试验以pPGEDNA为模板，用1对分别含有EcoR I和BamH I酶切位点的伪狂犬病病毒gE基因特异性引物，扩增出约1．7kb的含完整gE基因的DNA片段；目的片段经EcoR I和BamH I双酶切后，插入原核表达载体pBV220得到重组表达质粒pBVgE，并转化大肠杆菌DH5a；对温敏诱导表达所获产物进行SDS—PAGE、Western—Blot和琼脂双扩散检测。结果表明，gE糖蛋白得到了高效表达，表达产物约占总蛋白的17％。为了鉴别伪狂犬病疫苗免疫猪和自然感染猪，用表达纯化的gE蛋白为抗原，建立了GE—ELISA方法。选定的反应条件包括GE抗原包被浓度为6.6mg／L，血清最适稀释度为1：40。测试结果：与PRV、HCV、PRRSV、JEV、SA215阳性血清呈阴性反应，而与PRV标准阳性血清呈阳性反应。这一结果表明该法特异性强、敏感性高、重复性好，可用于猪伪狂犬病的临床诊断，尤其疫苗免疫猪和自然感染猪的鉴别。     

耕牛“猝死症”的诊断

耕牛“猝死症”的诊断王红宁郭万柱柳革胡廷秀吕道俊梁丹汤启君何玉华＊（四川农业大学动物科技学院，雅安６２５０１４）近几年来，我国许多省市的某些地区出现一种发病急、死亡快、致死率极高的疾病，其病因各地报道不一，暂时统称“猝死症”。１９９５年我们对四川达县...     

猪细小病毒VP2基因核酸疫苗的构建及免疫原性

将PPV VP2基因酶切后克隆到真核表达载体pcDNA-3.1(+)中,构建pcDNA-VP2,经脂质体法转染IBRS-2细胞后,Western blotting检测pcDNA-VP2能正常表达.采用 pcDNA-VP2肌注Balb/c小鼠,作间接ELISA抗体检测试验,并采用淋巴细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞仪(FACS)法对小鼠的细胞免疫进行检测.结果表明,pcDNA-VP2能诱导小鼠产生细胞免疫和体液免疫应答.PCR扩增检测结果显示,未能从免疫小鼠各组织的基因组中扩增出VP2基因片段.     

双抗体夹心ELISA检测伪狂犬病病毒的研究

建立了检测伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ。试验方法的最佳工作条件为,抗体包被量为５μｇ／孔,酶标抗体的浓度为１２００。对人工感染兔和自然感染猪的组织脏器检测,结果发现扁桃体、脑和肺的检出率最高,其次为心、肝、脾、肾等组织。