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猪瘟伪狂犬病重组病毒SA215(A)株的构建及生物学特性研究 总被引:3,自引:0,他引:3
采用磷酸钙转染系统,将伪狂犬病三基因缺失疫苗SA215株DNA与PP63LacZE2 DNA共转染Vero细胞,获得SA215(A)1、SA215(A)2和SA215(A)3等12个重组病毒株。以光生物素标记的HCV E2基因为探针进行初步鉴定后,挑选SA215(A)1株作BamHI酶切和southern转印杂交鉴定,结果表明构建是成功的,将其命名为SA215(A)。直接荧光抗体检测、SDS-PAGE电泳和western免疫印迹检测结果表明HCV E2基因在重组病毒内获得表达,产生大小约51 ku的囊膜糖蛋白。对SA215(A)株进行部分生物学特性研究,培养特性观察试验表明该毒株可适应Vero、BHK21和鸡胚成纤维细胞等多种细胞,但对不同细胞系表现有一定的差异。SA215(A)株10^5 PFU/mL接种21日龄健康仔猪(伪狂犬病和猪瘟检测阴性),接种后28d用10^6 PFU的PRV Fa强毒株滴鼻攻毒,42d用猪瘟SM株血毒1mL(10^5 MLD/mL)肌肉注射攻击,结果表明接种猪能抵御2次病毒攻击,表明SA215(A)株具有良好免疫原性,是一株优秀的猪瘟、伪狂犬病二价疫苗候选株。 相似文献
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根据Gen Bank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的N基因,针对其保守序列,设计并合成1对引物,可特异性扩增长度为590 bp目的条带,成功建立了检测TGEV的RT-PCR方法。以等量同一浓度的同一TGEV阳性病毒液进行重复性试验,其3次扩增特异性条带大小均为590 bp。以猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV),猪瘟病毒(CSFV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(RV)进行特异性试验,其结果显示仅TGEV扩增得到预期特异性目的条带。以TGEV阳性病毒液提取的c DNA用紫外分析仪确定核酸质量浓度为1 g/L后,用dd H2O按10倍稀释,稀释度为10-1~10-5,其均能扩增出590 bp特异性条带。在猪传染性胃肠炎高发季节的2013年9月至2014年1月对四川成都、德阳、绵阳、遂宁、南充各地猪场送检的疑似猪传染性胃肠炎感染病猪的临床样品15份,进行检测,其猪传染性胃肠炎阳性率为100%。并且对四川成都、德阳、绵阳、遂宁、南充各地猪场保育舍随机采集的1~10周龄仔猪临床样品500份,进行检测,其1~2周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为17%,病死率为100%,3~4周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为14%,病死率为78.6%,5~6周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为9%,病死率为44.4%,7~8周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为4%,病死率为25%,9~10周龄仔猪传染性胃肠炎阳性率为1%,病死率为0%。从地区来看,在这500份样品中,成都、德阳、绵阳、遂宁、南充地区此病的阳性率分别为15%,6%,10%,6%,8%。以上结果显示所建立的TGEV RT-PCR检测方法,重复性好,特异性强,敏感性高,可用于该病的临床诊断。 相似文献
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256.
新型伪狂现病毒基因缺失株的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
以伪狂犬病病毒Fa株为起我建;的pp63LacZ转移载体质粒与PRV Fa DA经磷酸钙转染,在MDBK细胞内同源重组获得PRV Fa gE/gi^-/LacZ基因缺失株。以PDTK3-6,5-6TK缺失质粒与上述基因缺失株在TK^-143细胞内同源重复且,获得PRV-SA215等三基因缺失株。经核酸杂交证实构建是成功的。生物学特性观察显示,该基因缺失株对多种动物安全,具有良好的免疫原性,有望成为 相似文献
257.
伪狂犬病基因缺失疫苗株(SA215)某些生物学特性研究 总被引:3,自引:0,他引:3
本试验测定了伪狂犬病gE-/gI-/ TK-/ LacZ+基因缺失疫苗株(SA215)的致细胞病变效应、安全性、免疫原性和免疫期等生物学特性。试验结果显示,该疫苗株能在Vero细胞上适应生长,并形成典型的蚀斑。其对1日龄仔猪、怀孕母猪、牛、羊以及家兔安全,无不良接种反应,接种动物不向体外散毒。SA215疫苗接种猪能抵御高剂量(107PFU)Fa株强毒感染,攻毒后试验猪的发热期、增重受阻天数、散毒滴度均低于Bartha株疫苗接种猪,远远低于对照组猪。SA215接种猪能维持长时间的高水平中和抗体滴度,免疫期可达半年以上。试验结果表明,SA215株是一株安全、免疫原性好、免疫期长的疫苗株。 相似文献
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为了构建含有EGFP的猪ProTα基因的真核表达载体,用RT-PCR从猪肾脏中扩增ProTα基因,连接到T载体,测序鉴定后,连接到pEGFP-N3真核表达载体,构建真核表达载体pEGFP-ProTα。通过脂质体法转染Vero细胞,进行荧光检测。结果表明,构建的pEGFP-ProTα真核表达质粒,转染Vero细胞后,经荧光观察EGFP-ProTα融合蛋白有向细胞核聚集的现象。结论:本研究成功构建了真核表达载体pEGFP-ProTα,并在Vero细胞中表达,为研究猪ProTα的功能奠定了基础。 相似文献
260.
<正>1发病情况2007年11月5日,一养殖户刘某带鸡前来就诊。19日龄的肉鸡,存栏3100只左右。17日龄开始出现呆立、呼吸道症状、死亡的现象。经某门市兽医技术员诊断为 相似文献