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241.
242.
联合表达PCV2 ORF2和PPV VP2基因病毒样颗粒获得及免疫原性 总被引:1,自引:0,他引:1
将包含有完整阅读框架,长1 740、705 bp的PPV VP2基因、PCV2 ORF2基因分别插入真核表达栽体pPI-2.EGFP,构建了重组质粒pPI-2.EGFP.VP2.ORF2.观察由脂质体介导转染重组质粒后的Vero细胞,结果最早在转染后20 h左右出现荧光,36 h达到高峰;对转染细胞进行电镜检测,结果观察到病毒样颗粒存在.为证实所获病毒样颗粒是否为重组颗粒,将纯化后的病毒样颗粒免疫仔猪,检测其血中T淋巴细胞的动态变化以及血清抗体水平.结果免疫仔猪的CD3+、CD4+T淋巴细胞在外周血淋巴细胞中的比率均有一定程度的升高;CD8+T淋巴细胞在免疫后7~14 d有所下降,之后再升高.抗体检测结果表明,免疫动物血清中有较高水平的PPV、PCV2特异性抗体.结果表明重组质粒pPI-2.EGFP.VP2.ORF2获得成功表达并形成重组病毒样颗粒,且该颗粒具有良好的免疫原性. 相似文献
243.
<正>1发病情况2007年11月5日,一养殖户刘某带鸡前来就诊。19日龄的肉鸡,存栏3100只左右。17日龄开始出现呆立、呼吸道症状、死亡的现象。经某门市兽医技术员诊断为 相似文献
244.
伪狂犬病病毒Fa株gp63(gⅠ)基因转移载体质粒的构建 总被引:6,自引:2,他引:4
用限制性核酸内切酶Sall酶切已缺失gⅠ(gE)和部分gp63(gⅠ)的重组质粒PPB7-1DNA后。回收大小约6.0kb片段,经T4DNA连接酶接后转化入大肠杆菌DH5α株,得到含gp63片段的转移载体质粒PP63,再以SV40早期启动子控制的大肠杆菌β-半乳糖苷酶(LacZ)基因作为报告基因,将其手稿P63中gp63基因起始密码子ATG下游的StuⅠ位点,在选择培养基中筛选出表达β-半乳糖苷酶的转化子,构建了以gp63为同源序列含LacZ报告基因的转移载体质粒,命名为PP63LacZ。在该转移载体质粒中,LacZ基因的两端分别与0.3kb和0.5kb的PRV gp63同源序列相连,经酶切、核酸分子杂交技术鉴定,结果表明该转移载体质粒的构建是成功的。 相似文献
245.
参照GenBank登录的猪白细胞介素-15(IL-15)基因序列自行设计1对特异性引物,运用RT PCR技术从由刀豆蛋白A(ConA)诱导培养的荣昌猪外周血淋巴细胞扩增出猪IL-15基因的完整CDS序列,全长489 bp。同源比对结果表明,荣昌猪IL-15基因与已公布的2个猪种IL-15基因核苷酸同源性均为99.4%,与哺乳动物的同源性较高,与鸡的同源性较低。密码子偏爱性分析显示,荣昌猪IL-15基因在密码子使用上存在一定的偏爱性;分子进化分析结果表明其与人及哺乳动物IL-15基因的进化关系较近,而与禽类鸡的IL-15基因进化距离较远;结构域预测分析显示其与人的IL-15存在很大的相似性,可能在功能上有相似性。 相似文献
246.
将内江猪的外周血淋巴细胞在刀豆素(ConA)的刺激下培养24 h后,提取总RNA,应用一步法RT-PCR扩增γ干扰素(IFN-γ)cDNA,克隆到PMD18-T载体,命名为pMD-N-IFN-γ,测序结果证明克隆的cDNA全长603 bp,其ORF为501 bp,编码166个氨基酸,与Genbank公布的IFN-γ比对,核苷酸同源性在99.4%以上,从而证实成功地克隆了内江猪IFN-γ基因。以pMD-N-IFN-γ质粒为模板亚克隆完整ORF区,连接到真核表达质粒pcDNA3.1(+)的EcoRI、XhoI两位点之间,经单双酶切鉴定,成功的构建了IFN-γ真核表达载体pcDNA3.1(+)-N-IFN-γs。 相似文献
247.
根据GenBank的核酸序列,设计6对引物自TGEV SCY株中分别扩增了长为1.5 kb、2.0 kb、1.1 kb、1.4 kb、1.4 kb、1.3 kb的6个片段,经克隆测序拼接后获得8 495 bp的TGEV部分序列.根据与其他TGEV和冠状病毒的序列和结构特征比较表明,该段序列克隆了除TGEV聚合酶基因以外的S、M、N、E、NSP3a、NSP3b、ORF7共7个基因的核酸序列;根据S、M、N基因的序列构建了系统进化树,分析表明TGEV-SCY株与TS、HN2002、TO14、pudue等毒株亲缘关系较近;密码子偏爱性分析结果认为TGEV在对密码子的使用上存在轻微的偏向性,个别氨基酸偏向于选择以A和T结尾的密码子. 相似文献
248.
仔猪腹泻粪样中猪呼肠孤病毒的分离鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
通过在病毒培养液中添加胰酶的方法,笔者从仔猪腹泻粪样中分离并鉴定了1株能在Vero细胞上稳定产生CPE,即以细胞颗粒增多、肿胀、漂落为特征的猪呼肠孤病毒SC-A株。在感染细胞中,病毒胞浆包涵体及特征性微管样结构明显,病毒粒子多呈典型的晶格状排列,直径约70 nm。克隆测序结果表明:SC-A S2全基因(DQ396805)大小为1 331 bp,其开放阅读框编码1个由418个氨基酸残基组成、相对分子量约为47.14 ku的σ2蛋白;与标准株T1L、T2J、T3D的核苷酸序列相似性分别为86.9%、76.7%、85.4%,推导氨基酸序列相似性分别为94.6%、93.3%、98.3%。在以σ2氨基酸序列构建的进化树中,标准株及野外分离株可被划分为A、B、C 3个大的进化分支;除T3C31外,其余3型野外分离株及SC-A株和所有血清1型病毒株均位于进化分支C中。 相似文献
249.
猪繁殖与呼吸综合征病毒SCQ株的仔猪回归试验及病毒在体内的分布研究 总被引:7,自引:0,他引:7
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种新的传染性疾病。该病自发现以来已经给各主要养猪国家带来了巨大的经济损列。1998年我们从重庆地区发病猪场的母猪血清中分离到PRRSV—SCQ毒株,经鉴定属美洲型毒株。因为用分离株进行病理机制研究方面的报道则更少。本试验以PRRSV重庆分离株人工感染易感仔猪,以复制出PRRS病症,研究病理变化特征和确定病毒抗原在仔猪体内的定植情况,为临床诊断和有效预防该病提供理论参考,也为进一步确证分离到的SCQ毒株属PRRSV提供佐证。 相似文献
250.
本研究对从四川19个县市送检的178份牛、猪、羊“猝死症”病料进行了细菌学、病毒学、毒物学检验,对发病区域土壤与饲料含硒量也进行了检测。结果表明:细菌感染是四川牛、猪、羊“猝死症”的主要病因。在分离的病原菌中:魏氏梭菌占57.9%;溶血梭菌占10%;溶组织梭菌占10%;巴氏杆菌占32%。病毒学检验结果为阴性。对送检的胃内容物及抗凝全血进行氢氰酸、氟乙酰胺、DDT及六六六检测后,仅1份胃内容物的氟乙酰胺阳性,1份胃内容物氢氰酸阳性。发病区域的饲料及土壤中含硒量属正常范畴。用17种抗菌素药敏试验证实某些地区的菌株对抗菌药物有一定的敏感性,有的地区菌株对抗菌药物不敏感。用分离鉴定的当地菌株制备的灭活苗在疫区进行免疫试验,有效地控制了本病的发生。 相似文献