猪细小病毒分子生物学研究进展

本文就猪细小病毒基因组结构、转录和翻译、蛋白质的结构和功能及其在诊断方面的应用等多年来的研究作了综述，以期为防制猪细小病毒提供参考。     

伪狂犬病基因缺失疫苗SA215株gD基因的序列分析及其功能

SA215是伪狂犬病病毒3基因缺失疫苗株(PRV TK-/gE-/gI-/LacZ),试验以其主要功能基因gD基因为对象,通过对病毒吸附细胞的差异和免疫仔猪后血清中抗体效价变化的测定,认为gD基因编码蛋白可介导病毒进入细胞和诱导机体产生中和抗体。经从gD基因的基因型到表现型全面分析SA215株的免疫原性,发现gD基因变异没有影响到其功能的实现,推定SA215株应具有良好的免疫原性。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白间接ELISA方法的建立

用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳(N)蛋白作为包被抗原,建立了PRRSV抗体检测的间接ELISA方法,并优化确定了ELISA最佳工作条件:重组抗原包被浓度为13.3 μg/mL,37℃1h或4℃过夜;5％脱脂乳37℃封闭2h;血清1:40稀释,37℃作用90 min;酶标二抗1∶4000稀释,37...     

猪圆环病毒2型-伪狂犬重组病毒活疫苗SA215(C)株的构建

根据GenBank发表的猪圆环病毒2型（PCV2）序列设计一对特异性引物,采用PCR方法,扩增PCV2ORF2基因,将ORF2基因插入到含有EGFP报告基因的转移载体质粒pPI-2.EGFP,获得重组中间转移质粒pPI-2.EGFP-ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移载体pPI-2.EGFP-ORF2与伪狂犬病毒SA215株基因组共转染真核ST细胞,通过空斑纯化得到表达PCV2 ORF2基因和绿色荧光蛋白基因的重组伪狂犬病毒SA215（C）。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的ORF2基因蛋白和绿色荧光蛋白。并且重组病毒及亲本株在同一细胞上的增殖滴度基本相同,表明EGFP和PCV2 ORF2基因的插入不影响PRV SA215的增殖。该重组病毒可作为猪圆环病毒2型和伪狂犬病毒的候选疫苗毒株。     

伪狂犬病病毒3基因缺失株(SA215)的遗传稳定性研究

测定了伪狂犬病病毒Fa株3基因缺失株(SA215)在鸡胚成纤维细胞上连续传代15代次,在非免疫仔猪体内连续传代5代次后,病毒毒价及对易感动物的安全性变化。并以核酸杂交、核酸酶切和gE-ELISA检测技术分别研究了缺失株(SA215)传代后不同代次病毒的外源插入基因(LacZ)、缺失基因(TK、gE、gI)遗传变异情况。结果表明缺失株(SA215)毒价及对易感动物安全性未发生变化,外源插入基因得到稳定遗传,缺失基因未见回复突变,证明缺失株(SA215)具有良好遗传稳定性。     

猪伪狂犬病病毒四川株的分离鉴定及UL43基因序列分析

从四川某猪场发病仔猪体内分离到1株病毒,该毒株能在Vero、MDBK、PK15、ST、MDCK、BHK21、Marc145、鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖并产生细胞病变。通过蚀斑克隆对其进行纯化,克隆毒株在Vero细胞上为3.0×107TC ID50/0.1mL。该病毒在Vero细胞上连传15代,其TCID50变化很小。病毒对5-溴脱氧尿核苷、氯仿敏感。用该病毒接种家兔和仔猪均出现典型的伪狂犬病症状,gE-ELISA检测接种分离毒的仔猪血清,伪狂犬病毒(PRV)抗体阳性。电镜观察可见直径110～140 nm的典型疱疹病毒粒子。上述结果表明分离株为PRV,并命名为SE株。根据已发表的UL43序列设计1对引物,以分离毒株基因组DNA为模板进行PCR扩增,对目的产物进行克隆及测序分析,结果与GenBank收录的其他PRV毒株(Becker、Ea)的UL43核苷酸序列同源性为98.8%,氨基酸同源性分别为95.2%、97.3%。     

四川省PPV与PCV2的病原流行病学调查

从四川省21个规模化猪场采集样品273份,利用PCR方法检测并分析了猪细小病毒和猪圆环病毒的感染及混合感染情况,结果共检出PPV病原阳性样品47份（占17．22％）;PPV阳性猪场8个（占38．1％）;种猪的感染率较高,仔猪感染率相对较低;检出PCV2病原阳性样品143份（占52．38％）,PCV2阳性猪场18个（占85．7％）;PCV2感染随猪年龄的增长而升高;检出PPV和PCV2混合感染样品29份（占10．62％）;同时存在PPV和PCV2的猪场6个（占28．7％）,混合感染主要集中在母猪和保育仔猪阶段。仅有3个猪场未检出PPV和PCV2病原,占14．3％。该结果说明PPV与PCV2及其混合感染在四川省流行广泛,对养殖业构成了较严重的危害。     

猪伪狂犬病病毒gD核酸疫苗构建及IL-15基因佐剂对其免疫增强试验

运用PCR技术扩增出伪狂犬病病毒糖蛋白gD基因,将该基因定向克隆于真核表达载体pcDNA3.1+、pCI-neo中,命名重组质粒为pcD-gD、pCI-gD.以小鼠为动物模型,对构建的基因疫苗进行免疫原性的初步评价.为了证明细胞因子是否能增强基因疫苗的免疫效力,本试验用IL-15的表达质粒联合pcD-gD、pCI-gD免疫.结果表明,重组质粒组主要提高细胞免疫水平,特别是联合组中的CD8~+相对其他组别较高.重组质粒在体液免疫方面没有表现出优势,抗体滴度达不到阳性对照组的水平,但是整个抗体水平相对稳定,提示DNA疫苗诱导的抗体维持时间较长.     

狂犬病Flury HEP株的复制及其某些生物学性质的观察

狂犬病ＦｌｕｒｙＨＥＰ株弱毒在ＢＨＫ（２１）细胞上连续传代，培养物经中和试验、间接荧光抗体染色、电镜观察、动物试验、病毒增殖和抗体消长曲线的测定，证明该弱毒株可在ＢＨＫ（２１）细胞上良好地复制。传至二代以后毒价可达到１０（－５）／０．０３ｍｌ。该毒经兔、犬、山羊、牛试验显示了其安全性。免疫后７天即可见到抗体阳转。免疫犬后，血清中和抗体在二年半时间内维持在一个较高的水平。