猪环曲病毒N基因的克隆及生物信息学分析

为研究猪环曲病毒(PToV)N蛋白的生物信息学特征,运用RT-PCR技术扩增猪环曲病毒N基因,测序并对其进行生物信息学分析。结果成功获得了492bp的PToV N基因(GenBank登录号为KM036209)。经生物信息学分析,此序列编码163个氨基酸,理论等电点(pI)为12.14,理论分子质量为18 695.5u,不稳定系数为77.47;不同密码子对同一氨基酸选择上呈现一定的偏嗜性;最大疏水指数为1.589,最小疏水指数为-3.533;无信号肽和跨膜区;抗原表位主要位于N末端和C末端。预测其可能包含4个N-糖基化作用位点,2个蛋白激酶C磷酸化作用位点、1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化作用位点、1个N-豆蔻酰化位点。进化树分析结果显示,KM036209与韩国株和上海株亲缘关系很接近,与荷兰及西班牙株不属于同一分支。     

荣昌猪白细胞介素-2和白细胞介素-4基因的克隆与序列分析

将荣昌猪外周血淋巴细胞在刀豆素A(ConA)的刺激下培养24~70 h后,提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-4(IL-4)cDNA,克隆到pMD18-T载体并测序。结果表明:克隆的IL-2 cDNA全长为522个碱基,ORF为465个碱基,编码154个氨基酸,与GenBank公布的猪IL-2比对同源性均为99.8%;克隆的IL-4 cDNA全长411个碱基,ORF为402个碱基,编码133个氨基酸,与GenBank公布的猪IL-4比对同源性均在98.0%以上,从而证实成功克隆了荣昌猪IL-2和IL-4基因cDNA。     

猪II型圆环病毒四川分离株鉴定及其ORF2基因序列分析

猪圆环病毒（Porcinecircovirus,PCV）,属于圆环病毒科（Circoviridae）,圆环病毒属（Circovirus）,血清型为PCV—1和PCV－2。PCV—1首先由Tis2cher于1974年从PK-15猪肾传代细胞系中分离获得,PCV－2首先由Clark报道了是断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原,     

猪繁殖与呼吸综合征病毒SCQ株的分离鉴定

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病毒属动脉炎病毒科动脉炎病毒属，是引起母猪繁殖障碍的重要病原之一。本研究以出现繁殖障碍的母猪并通过ELISA检测为抗体阳性者的血清为材料，于2000年首次从重庆地区分离出PRRS病毒。母猪血清接种Marc-145单层细胞，经盲传至第四代时出现典型的细胞痛变效应（CPE）；细胞培养物经电镜观察，发现其中有球形的病毒粒子，粒子大小为40～80nm，核心直径为20-40nm；病毒TCID50为10—4．46／0．05mL；用抗PRRSV特异性抗体能特异地中和病毒，中和指数为100，并将该地方分离株命名为PRRSV—SCQ株。根据Genbank中PRRSV北美洲株ATCC VR-2332的序列设计一对特异性引物，以PRRS V—SCQ RNA为模板，通过RT—PCR扩增其GP5基因片段．并将该片段插入克隆载体pMD18一T的EcoRV住点；测序结果表明该GP5基因序列与PRRSV—VR2332、LV株的GP5基因核苷酸序列同源性分别为99．34％和62．14％，GP5蛋白氨基酸推导序列的同源性分别为97．51％和54．37％，揭示SCQ地方分离株与VR2332株在基因型上更为接近，应属于美洲型。     

猪伪狂犬病的净化条件

●伪狂犬病基因缺失疫苗:　　1.　自然弱毒疫苗(缺失部分gE基因)　　2.　基因工程缺失疫苗(双缺失:TK、gE)　　●鉴别诊断技术:　　gE-ELISA　区分疫苗免疫动物和野毒感染动物。疫苗免疫接种是防制和控制乃至根除伪狂犬病的根本措施。早期的猪伪狂犬疫苗大多为弱毒苗和灭活苗,弱 毒苗和灭活苗在预防控制伪狂犬病方面 虽然能起一定的作用,但是弱毒苗不能防 止病毒在动物体内的复制和排出,即存在 着毒力返强和散毒的危险;而灭活苗虽然 安全性较好,但其免疫效率却较低,免疫时用量较大、有时还可能导致注射部位肿胀,出现过敏反应。因此…     

携带猪乙型脑炎DNA疫苗减毒沙门菌的构建及其免疫原性

将乙型脑炎病毒E蛋白主要抗原片段基因串联,构建真核表达载体pCI-EAB.将重组质粒pCI-EAB转染Vero细胞,表达产物通过RT-PCR和间接免疫荧光试验可检测出目的基因的转录与表达.质粒pCI-EAB电转化入减毒猪霍乱沙门菌,观察重组菌的安全性、体内外的稳定性与免疫原性.动物试验表明,重组菌是相对安全和稳定的;重组菌S.C500/pCI-EAB体外培养时,D600值在0.8左右质粒是比较稳定的;以1×108CFU剂量的重组菌S.C500/pCI-EAB口服免疫小鼠,在二免后1周和三免后1周,重组菌抗体水平与S.C500/pCI-neo空载体组差异显著(P＜0.01);脾脏淋巴细胞增殖情况显示,重组菌对ConA有显著的反应性,且与对照组差异明显,同时CD3+、CD4+和CD8+T细胞的数量也显著高于对照组(P＜0.01).上述结果初步表明,以减毒沙门菌为载体的猪乙型脑炎DNA疫苗具有良好的安全性、稳定性和免疫原性,为猪乙型脑炎口服活菌疫苗的研制奠定了基础.     

非典型猪瘟的发生及防制对策

非典型猪瘟或温和型猪瘟的临床症状均不典型,病理剖检无特征性,发病随时间和地点的不同,其症状及发病特点亦不同。     

江西省林业科学院秋冬季鸟类调查及多样性分析

2007年9月30日至2007年12月17日,利用样线法和样点法,调查了江西省林业科学院(以下简称江西省林科院)秋冬季鸟类物种多样性和丰富度.结果表明,江西省林科院内秋冬季共有鸟类10目30科60种,其中有国家Ⅱ级重点保护鸟类4种,有省级重点保护11种,列入中日候鸟保护协定和中澳候鸟保护协定的鸟类分别有16种和3种,属三有名录的鸟类48种.多样性指数分析显示,林地生境中鸟类资源最为丰富,其次为农田和居民区,池塘鸟类多样性最低.秋冬季鸟类的优势种为丝光椋鸟、白头鹎、黄腹山雀和鸟鸫,此外,珠颈斑鸠、小和大山雀等也有较大类群.     

含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒的构建

将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2．EGFP中，构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2．EGFP．VP2。采用磷酸钙转染系统，将pPI-2．EGFP．VP2 DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察、Dot-blot核酸杂交筛选得到几株重组病毒，将其中一株（命名为SA215-B）DNA用BamHI酶切和Southern转印杂交进一步验证重组病毒构建成功，并通过SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测表明PPV VP2基因在重组病毒内获得表达，产生大小约93ku的融合蛋白，同时融合蛋白中的PPV VP2结构蛋白仍然保持了原有的反应原性，表明成功构建了含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒。     

猪伪狂犬病的预防控制

<正>1伪狂犬病的危害1.1伪狂犬病危害的严重性伪狂犬病(Pseuderabies)又称Aujeszky氏病,是由猪疱疹病毒I(Suid herpesvirus I)所引起的猪、牛、羊等多种家畜、家禽及野生动