狂犬病病毒荧光定量RT-PCR快速检测试剂盒的评价及应用

基于目前在我国人群和动物中流行的狂犬病病毒（RV）均属于基因Ⅰ型,在本室所建立的基因Ⅰ型RV荧光定量RT-PCR方法的基础上,组装了可以便捷使用的RV快速检测试剂盒。对4 577份临床样品的检测结果表明,该试剂盒的检测灵敏度达4.68个TCID50,与《狂犬病防治技术规范》规定的套式RT-PCR灵敏度相当,而且稳定性良好,可以冷冻保存8个月以上。所研制的荧光定量RT-PCR快速检测试剂盒具有操作简便、快速、特异性强、灵敏度高、重复性好、稳定性强等优点,既适合单个临床样品的确诊,又适合RV流行病学监测的大规模筛查。     

广东省九个鸡场减蛋情况调查

广东省九个鸡场减蛋情况调查王秉红，孙彦伟，武若飞，侯玉金，丘宴明（广东省兽医防疫检疫站５１０２３０）１９９２年１１月至１９９３年２月，我省不少种鸡场、蛋鸡场的鸡群相继出现严重减蛋现象，损失很大。作者对广州、佛山、深圳、韶关、湛江等地的９个鸡场调查，并...     

鸭链球菌的分离鉴定及其16S rRNA基因序列分析

从一种表现为脚软、拉稀、死亡增多的新发鸭病病例中分离到1株细菌,命名为GDYJ2011。通过生长特性、染色特性及VITEK-32微生物鉴定系统生化试验鉴定为链球菌,进一步进行16SrRNA基因序列的测定与分析,鉴定为巴氏链球菌。进行人工发病试验,成功的复制出本病,该菌还表现出较强的致病力。结合药敏试验与临床治疗效果,提出了本病的防控措施。     

中国类禽型H1N1亚型猪流感病毒的发现和遗传分析

采用禽流感病毒通用引物,对2006年发现的1株H1N1亚型的类禽型猪流感病毒的全基因组进行了测序,并进行了遗传学分析。序列分析表明它的8个片段与欧洲的类禽型猪流感病毒A/swine/Ile et Vilaine/1455/99(H1N1)病毒和A/swine/Cotes d'Armor/1488/99(H1N1)病毒的相应基因具有高度的同源性,同源性可达97%~99%,表明类禽型猪流感病毒已在中国出现。其血凝素基因的190E→D和225G→E的突变使得其结合NeuAc-a2,6Gal受体的能力高于NeuAca2,3Gal受体。欧洲的类禽型猪流感病毒可以直接感染人,并且可导致人的肺炎和死亡。中国类禽型猪流感病毒的发现及其的NeuAca2,6Gal受体结合特性使其成为一个潜在可感染人的病毒。     

广东地区近2年禽流感H9亚型HA基因的序列分析

通过对2013-2014年从广东地区养鸡场、活禽交易市场获得的12株禽流感H9亚型病毒的HA基因的序列分析,发现当前流行的病毒主要属于H9.4.2.5分支。潜在的氨基酸糖基化位点有7～8个,变异主要表现在HA蛋白的145-147 aa和313-315 aa处增加了2个位点。受体结合位点发生变化,第198位aa由G变为L,具有可感染人的分子特征。以上基因变化提示当前毒株具有了致病力增强的分子基础,且其与疫苗株有较大的差异,提示现有的疫苗不能提供较有效的保护。     

我国部分地区犬狂犬病免疫覆盖率的连续调查

本研究对我国部分城市或地区犬狂犬病的免疫覆盖率进行了连续3年以上的调查,结果显示,所调查的发达城市犬狂犬病免疫覆盖率总体水平有所提高,如深圳和北京已达到或接近70%的有效覆盖率;南方较发达城市的免疫覆盖率为20%~30%,但距离狂犬病免疫覆盖标准（≥70%）相差甚远;农村地区和狂犬病流行的北方城市,狂犬病免疫覆盖率仍很低,甚至不足5%。以上结果反映出,在未实行强制免疫的情况下,我国狂犬病的免疫覆盖率和经济发展水平呈正相关,欠发达城市和农村地区的犬仍未接受有效免疫,无法阻断狂犬病在动物之间传播,不利于我国狂犬病的控制。     

H5亚型禽流感病毒间接免疫荧光快速诊断方法的建立

本研究以当前严重威胁我国养禽业的高致病性禽流感H5亚型病毒为研究对象，病毒在犬肾细胞（MDCK）上培养增殖，经蔗糖梯度离心对病毒进行纯化，免疫清洁级的新西兰公兔，高免血清经辛酸-硫酸铵法和葡聚糖G50柱纯化，制得第一抗体。以FITC标记的山羊抗兔IgG为第二抗体，通过反应条件的优化，建立了间接免疫荧光快速诊断方法。本法的最佳检测组织为心肌和胰腺，检测时间只需3小时，本法可检出人工感染后36小时尚未表现出临床症状鸡只中的病毒，对禽流感H7亚型、H9亚型病、新城疫、传染性支气管炎和传染性喉气管炎禽出败等病料进行特异性检验结果均为阴性。运用本方法对69个禽场的临床病料进行了检测，检测结果与鸡胚分离法进行比对，9个阳性场（广东省2004年9个原疫点的病料）的9份病料中，检出8份阳性；而鸡胚分离法阴性样品，本法检测结果与之完全相符。本法用于禽流感H5亚型病毒的快速诊断具有快速、简便、敏感、特异、费用低廉和不存在交叉污染等优点，在当前流行的H5亚型高致病性禽流感快速诊断中具有良好的应用前景。     

伪狂犬病毒荧光定量PCR检测方法的建立

根据猪伪狂犬病毒gD基因的序列,设计和合成了一对特异的可用于检测伪狂犬病毒的PeR引物和一条Taqman荧光探针,采用LightCycle 480荧光定量PCR仪,建立了一种可实时定量检测猪伪狂犬病毒的荧光定量PCR技术。该方法的线性范围为1．0×10^1-1．0×10^10拷贝,灵敏度可达2拷贝,比常规PCR高100倍。该方法检测时间短,速度快,仪器的运行时间仅为1h,特异性明显高于常规PCR。对15株猪伪狂犬病毒进行了检测,结果均为阳性;与猪细小病毒和鸭瘟病毒无非特异性反应。与病毒分离培养和常规PeR相比较,该方法具有快速、灵敏、特异、定量、重复性好的优点,可望用于,临床上伪狂犬病的检测和病毒分布的研究等。     

广东省仔猪病毒性腹泻横断面研究

[目的]估计广东省规模化猪场仔猪病毒性腹泻(PVD)的群体流行率,分析PVD发生的风险因素。[方法]2013年12月—2014年3月,对广东省197个规模化猪场进行调查和横断面分析研究。[结果]调查发现:广东省规模化猪场的PVD场流行率为48.55%(95%CI:42.27%~56.21%)。PVD流行与猪场规模(OR=1.340,P=0.020)、外来人员进入生产区(OR=4.740,P=0.007)、距县级以上公路距离(OR=0.389,P=0.008)、病死猪无害化处理与否(OR=0.244,P=0.035)有关联。多元logistic回归分析发现:参观者进入生产区(OR=5.003,95%CI:1.555~16.096,P=0.007)是发生PVD的风险因素;免疫猪流行性腹泻和传染性胃肠炎(PED+TGE)二联灭活疫苗(OR=2.012,95%CI:1.035~3.912,P=0.039)、未进行病死猪无害化处理(OR=0.306,95%CI:0.080~1.175,P=0.084)、距县级以上公路距离过近(OR=0.530,95%CI:0.080~1.175,P=0.090)可能是混杂因素。[结论]本研究弄清了广东省规模化猪场PVD的场流行率,确定了参观者进入生产区是发生PVD的风险因素,提示生物安全措施对PVD控制的重要性。