CRISPR/Cpf1双切刻系统的构建与活性检测

Cpf1是2类V型CRISPR-Cas系统的单个RNA引导的核酸内切酶,具有切割DNA的核酸酶活性。该系统由Cpf1核酸酶和CRISPR RNA(crRNA)组成,对于如何提高CRISPR/Cpf1系统的基因编辑效率主要集中在增强crRNA的稳定性、设计对PAM要求更简单的Cpf1变体或者鉴定新型Cpf1核酸内切酶。然而,其是否适用于构建双切刻系统还有待验证。因此,本研究旨在设计3种AsCpf1突变体以及成对的crRNA,进行瞬时转染,利用双荧光素酶报告基因检测评估AsCpf1双切刻系统的编辑效率;同时探究人工改造的crRNA能否提高AsCpf1双切刻系统的编辑效率;以及设计6对具有拓展PAMs序列的crRNA靶向位点,评估HkCpf1双切刻系统在哺乳动物基因组中的编辑效率。结果显示：3种AsCpf1突变体均能不同程度地提高报告基因的相对活性,并具有切割DNA单链的能力。在AsCpf1 crRNA发生突变和延伸后,它们仍然具有引导AsCpf1双切刻系统切割DNA单链的能力。HkCpf1不仅可以用做构建双切刻系统还具有较高的切割活性,并且可以识别5’-YTN和5’-TYYN PAMs序列...     

ADSL基因启动子区遗传变异与鸡肉冻藏新鲜度的相关性分析

试验旨在探究鸡腺苷琥珀酸裂解酶（adenylosuccinate lyase,ADSL）基因启动子区多态性及其与鸡肉冻藏新鲜度的相关性。以161只青脚麻鸡为研究对象,通过DNA混池测序法检测ADSL基因启动子区遗传变异。采用等位基因特异性PCR完成个体基因型分析,并分析了各基因型与鸡胸肌肉色、体重及胸肌冷冻60 d后新鲜度K值和pH的相关性。结果显示,在ADSL基因启动子区ATG上游1 670 bp处发现1个SNP位点（c.-1670 C>A）,其AA基因型个体肌肉冷冻60 d后新鲜度K值（23.61%）极显著低于CA（33.00%）和CC（33.56%）基因型（P<0.01）,即冻藏60 d后AA基因型个体肌肉较CA和CC基因型新鲜,CA和CC基因型间新鲜度K值差异不显著（P>0.05）;各基因型间鸡体重、胸肌肉色及胸肌冷冻60 d后pH均无显著差异（P>0.05）。生物信息学预测发现,c.-1670 C>A导致ADSL基因启动子区转录因子结合位点的显著改变,该突变位点可能造成ADSL基因的表达差异。综上,ADSL基因启动子区c.-1670 C>A与青脚麻鸡胸肌冷冻60 d后新鲜度K值具有显著相关性,该位点可作为青脚麻鸡肉品新鲜度的候选分子遗传标记。     

黑鱼湖菹草的治理建议

黑鱼湖原名大庆水库,始建于1976年,1978年正式投产运行。共有鱼类9科34属43种,水生高等植物3门15科17属28种。常见的种类有,挺水植物（如芦苇、香蒲、稗子等）,沉水植物（如菹草、大茨葆、马来眼子菜等）。水生高等植物以菹草生物量最大（35千克／平方米）,生长分布区域达水库面积的80％左右,覆盖面积可达50％左右。     

沼液拌料喂猪技术及效益

人畜粪便和有机质进入沼气池后,在密闭的沼气池中进行厌氧发酵,发酵后所生成的具有水溶性的剩余物就是沼液,经过厌氧发酵的沼液中无寄生虫卯和有害的病原微生物,且其中镉、铅、汞等有害元素含量均低于国家规定的生活饮用水标准,是一种无毒无害的营养物质,沼液中含有丰富的蛋白质、矿物质和猪生长所必需的氨基酸、维生素等,其营养成分全面,     

口蹄疫病毒抗体SA-ELISA快速检测方法的建立

旨在解决如何对现有方法进行优化创新以建立口蹄疫抗体检测新方法的问题,本研究在基于原有液相阻断ELISA的基础上进行方法优化,实现口蹄疫病毒抗体的快速、灵敏检测。本研究通过对抗口蹄疫IgG抗体标记生物素技术与HRP标记链霉亲和素(HRP-SA)相结合建立新的液相阻断ELISA检测方法(SA-LPBE),在猪,牛、羊血清样品中具有较高的符合率。结合实际情况,判定优化后牛、羊血清抗体效价≥128,猪血清效价≥64时,判定为阳性,与商用检测试剂盒结果一致。并且经符合率分析,与原试剂盒具有92.3%的符合率,其批内变异系数<5%,批间变异系数<10%。该方法改变了原有的需要制备兔抗豚鼠抗血清再标记HRP技术路线,根本上提高了酶促反应的效率,保证了方法原有敏感性的同时提高了方法的特异性;利用生物素标记抗体与HRP-SA反应迅速、标记原料稳定、检测背景值等优点实现了将液相阻断ELISA试剂盒操作时间由2 d缩短为3 h,解决了原有方法操作繁琐、用时过长、操作疲劳、不稳定、易出错等问题。建立的SA-LPBE可应用于FMDV抗体检测,为FMD流行和临床检测提供了技术方法。     

荷斯坦供体牛连续超排试验

为探讨荷斯坦奶牛连续超数排卵的效果,对8头供体以30d为间隔连续超排3次,3次超排有效率分别为：100(8/8)、100(8/8)和100(8/8),3次头均荻胚数分别为：10.63±3.18枚、10.13±1.78枚和10.38±1.58枚,3次头均可用胚数分别为：7.13±1.29枚、6.38±0.92枚和5.88±1.17枚。3次超排的头均荻胚数间和头均可用胚数间差异不显著。结果表明,荷斯坦奶牛能够以30d为间隔进行连续超排。     

猪支原体肺炎疫苗的临床免疫意义

猪支原体肺炎呈世界性分布,严重危害养猪业的发展,多数养殖户朋友对猪支原体肺炎的理解停留在“咳”、“喘”两个方面,加之单纯的猪支原体肺炎往往不会导致猪只死亡,引不起大家的重视,笔者结合临床经验跟读者分享一下猪支原体肺炎疫苗的临床免疫意义。     

药物饲料添加剂喹胺醇对仔猪的增重效果试验

对２月龄仔猪在饲料中添加不同剂量喹胺醇和喹乙醇,饲喂３２天,证明喹胺酸和喹乙醇,饲喂３２天,证明喹胺醇具有促进仔猪增生的作用,其中１５０ｍｇ／ｋｇ添加量增重效果最佳,并有预防仔猪腹泻的作用,喹胺醇促进仔鳍增重和预防腹泻的效果均优于喹乙醇。     

小鹅瘟的诊断与防治

近年来丹东市的养鹅业迅速发展．全市共饲养种鹅、商品鹅达几十万只，有十余家炕坊式孵化场。但由于缺乏科学的饲养管理，2003年5月到8月底发生数起小鹅瘟，使养鹅业遭受很大损失。为此．我站组织垒市养殖户进行业务培训，开展专题讲座，对疫病采取综合防控措施，病情得到了有效控制。