伪狂犬病病毒闽A株gE基因去信号肽片段的克隆与序列测定

根据已经发表的伪狂犬病病毒（PRV）Rice株的gE基因序列,设计并合成了1对引物,通过PCR方法扩增到了PRV闽A株糖蛋白gE基因除信号肽以外的全部编码区段,并克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌XL1-blue菌株,重组质粒pMD18-T-FL经酶切和PCR鉴定证实后,进行了序列测定。结果表明,重组质粒pMD18-T-FL含有PRV闽A株糖蛋白gE基因除信号除信号肽以外的全部编码区段,长1674bp。序列比较分析表明,此区段与PRV Rice株相应区段的核苷酸序列同源性为97．5％,氨基酸序列同源性为94．8％。     

华南地区猪输血传播病毒流行病学调查与分析

为了解华南地区规模化猪场猪输血传播病毒(TTV)感染状况,采用PCR方法对2005-2007年间来自广东、江西、湖南、福建和广西五省44个规模化猪场193份病料进行检测.结果显示,TTV1型阳性率为41.5％,TTV2型阳性率为21.8％,TTV1型和TTV2型共同感染阳性率为13.0％.TTV1型阳性猪场占72.7％...     

间接ELISA检测鸡病毒性关节炎抗体方法的建立及其应用

用蔗糖密度梯度离心法提纯鸡病毒性关节炎病毒(AVAV)作包被抗原,建立了间接ELISA的最佳工作程序,其中抗原包被浓度为0.61μg/孔,被检血清为1:50.酶结合物1:1600;其灵敏度为琼脂凝胶沉淀试验(AGP)的238.5倍.在受检的529份鸡血清中,该法检出率(85.1%)显著高于AGP(46.0%).间接ELISA对S1133疫苗及AVAV—J株接种鸡抗体消长情况的观察结果表明,S1133疫苗常量接种后所产生的免疫力足以抵抗强毒株AVAV—J的攻击,AVAV—J毒株的良好免疫原性.使其有可能成为研制国产疫苗的候选毒株.     

猪附红细胞体病流行病学调查及诊治

通过对广东、海南、江西等地110个猪场送检的2450份血液的检测，结果发现猪附红细胞体病阳性场为102个，阳性率为92．7％，结合生产实际对猪附红细胞体病的流行病学和诊治方法进行阐述。     

我国部分地区猪圆环病毒2型和猪细环病毒混合感染的调查

为了解猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪细环病毒(TTV)混合感染情况,用PCR方法对来自湖南、江西、广东、福建和广西五省区的193份猪组织样品进行PCV-2、TTV-1和TTV-2进行检测。结果显示,PCV-2感染率为61.1%(118/193),PCV-2和TTV-1混合感染率为32.1%(62/193),PCV-2和TTV-2混合感染率为16.9%(32/193),3种病原混合感染率为9.8%(19/193),2006年PCV-2和TTV的混合感染率最高。由此可见,目前猪群中存在PCV-2和猪TTV的混合感染,PCV-2和TTV-1型混合感染率高于和TTV-2型的混合感染率,且存在一定比例的三重感染情况。     

伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的克隆与序列测定

用PCR方法以伪狂犬病病毒闽A株的基因组DNA为模板扩增到了gE基因表位抗原决定域的编码区段。PCR产物连接到pMD18-T载体后，转化大肠杆菌XL1－blue菌株，重组质粒经测序并与GenBank中已登录的gE基因序列比较，确证含有PRV闽A株gE基因的表位抗原编码区，此区段与PRV Rice株相应区段的DNA序列同源性为97．3％，氨基酸序列同源性为94．7％。     

伪狂犬病毒闽A株基因文库的构建及物理图谱的分析

以质粒pBR322作载体,用鸟枪法克隆出了PRV闽A株除BamHI-1,BamHI-2外的所有酶切片段,构建了PRV闽4株基因文库,并以克隆出的BamHⅠ片段用光生物素标记作探针,应用分子杂交法确定PRV闽A株绝大部分限制内切酶位点的位置.     

猪O型口蹄疫病毒强弱毒株VP_1基因的克隆与序列分析

本研究根据口蹄疫病毒 (FMDV)VP1基因的序列 ,设计并合成了 1对用于扩增整个VP1基因的引物 (5P、P6 )。从细胞培养液或组织中提取总RNA ,通过PT_PCR扩增 ,从F2 9株、O3I3株和T5 0 9株中均获得了 1条约 740bp的DNA电泳带。将PCR产物双酶切后电泳回收 ,插入到相应双酶切的pUC18质粒中 ,获得了重组质粒。通过PCR鉴定 ,证明重组质粒pUCVP1/F2 9、pUCVP1/O313、pUCVP1/T5 0 9均插入了VP1基因。对上述 3个重组质粒进行测序后分析 ,F2 9强毒株与O3I3、T5 0 9弱毒株相比 ,其核苷酸序列同源性分别为 98.75 %和 99.0 6 % ;因F2 9株核苷酸发生 3个碱基缺失与 1个碱基替换 ,故推导的氨基酸序列同源性分别仅为 44 .13%和 41.32 % ;而T5 0 9株与O3I3株相比 ,其核苷酸、氨基酸序列同源性分别为 99.37%和 95 .31%。通过序列分析发现 ,本研究的 3个毒株与国内大多数毒株 (包括 1997年台湾暴发FMDV所分离的毒株 ,除O/A/ 5 8株外 )均属于同一基因型 ,核苷酸序列同源性为 85 %～ 94% ;而与国外毒株相比 ,属不同的基因型 ,核苷酸序列同源性仅为 81%～ 82 %。其推导的氨基酸序列 ,除F2 9株与O/HK/ 93株及 1997年台湾暴发FMDV分离的少数毒株的氨基酸序列同源性仅为 45 %～ 6 3%外 ,本研究的 3个毒株与国内分离的大多数毒株的VP1