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以外周血液的总DNA为模板,运用PCR方法克隆了汉族人、秦川黄牛和甘肃土种绵羊的Prnp基因,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明,获得的3种哺乳动物的Prnp基因均位于1个单一的外显子内,与GenBank中登录的相应序列具有高度同源性,达99.0%。牛与绵羊Prnp基因同源性为97.3%,推导氨基酸序列同源性为96.5%。人Prnp基因与黄牛和绵羊Prnp基因的同源性分别为86.7%和87.1%,其氨基酸序列的同源性均为90.0%。3种Prnp基因均有富含G—C的重复区,编码的PrP蛋白均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚结合位点组成。基因型分析表明,秦川黄牛和甘肃土种绵羊可能存在感染海绵状脑病的风险。 相似文献
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制备PrP(prion protein)多克隆抗体,验证原核表达的人PrP的抗原性,为PrP空间构象的转变机制等深层次的研究以及人PrP单克隆抗体的制备提供重要的试验材料.以融合的人成熟PrP蛋白(mature prion protein,mPrP)为抗原,以pET30a(+)空载体的E.coli BL21 (DE3)的菌体蛋白作为对照免疫原,免疫小鼠.ELISA和Western blot分别检测多克隆抗体的效价和特异性.结果5只动物中3只均产生了较高效价的抗血清,确定人 PrP多克隆抗体效价为1∶4 096,能与人mPrP特异性结合.证明获得的人mPrP具有良好的免疫原性. 相似文献
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利用PCR技术,从含有牛朊蛋白(Prion protein,PrP)基因Prnp的开放阅读框的克隆质粒BoPrnp—T中扩增出约420bp的目的基因(PrP猢基因)。将PrP^27-30基因和载体pPIC9K分别用限制性核酸内切酶EcoRⅠ和NotⅠ进行双酶切,T4DNA连接酶作用后,转化至E.coli JM109中,构建重组表达载体pPIC9K-boPrP^27-30。pPIC9K-boPrP^27-30经限制性核酸内切酶SalⅠ线性化后电转至毕赤酵母GS115中,经G418筛选后得到高拷贝的重组菌株GS115/pPIC9K-boPrP^27-30。GS115/pPIC9K-boPrP^27-30经1.0%甲醇诱导后,表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明牛PrP^27-30基因在毕赤酵母细胞中获得表达,表达产物的分子量约为27Ku,能够被单克隆抗体SAF-70识别。 相似文献
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牛、羊、人叠朊基因的克隆与分析 总被引:3,自引:0,他引:3
为了解我国哺乳动物叠朊基因Prnd的生物信息,本实验采用PCR方法克隆了秦川黄牛、甘肃土种绵羊和汉族人的Prnd,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明,获得的三种哺乳动物的Prnd均位于1个单一的外显子内,与GenBank登录的相应序列具有高度同源性。秦川黄牛与甘肃土种绵羊Prnd的同源性为96.8%,推导氨基酸序列同源性为93.3%。汉族人Prnd与秦川黄牛和甘肃土种绵羊Prod的同源性均为80%,推导的氨基酸序列同源性均为76.3%。氨基酸一级结构分析显示3种Prod编码的叠朊均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚结合区组成。二级结构预测表明,3种Prod编码的叠朊均由3个α-螺旋和2个β-片层组成。本研究获得的这3种主要哺乳动物的Prnd信息为一进步研究叠朊的结构与功能奠定了基础。 相似文献
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氯元素作为烤烟生长发育所需的微量元素,由于烟草的“忌氯”性,长期以来,人们研究的重点更多的放在了氯元素对考研的毒害研究方面,从而忽视了元素在烤烟生产方面的积极作用。本研究通过盆栽试验,以部分氯化钾代替硫酸钾作氯源,研究不同的氯化钾用量对烤烟理化特性的影响。结果表明:施加氯肥能促进烤烟生长发育,增加烤烟的生物量。当施氯量为2.80 g/株(即替代30%)时,最有利于烤烟横向生长,当施氯量为3.74 g/株(即替代40%)时,烤烟的株高、最大叶面积及生物量在所有处理中相对较好。随着施氯量的增加,烤烟含梗率和纤维素含量下降,在一定范围内,烤烟含水率和阴燃时间随施氯量的增加而提高。与不施氯肥相比,施加氯肥,能促进烤烟对全氮,烤后烟叶中全氮、全钾、烟碱、氯离子、总糖及还原糖的吸收,但对于磷的吸收在前期呈下降的趋势,到旺长期和成熟期,烟叶吸磷能力随着氯肥的增加而增加;当施氯量在1.85~2.80 g/株(即替代20%~30%)范围时烤烟各项化学指标处在较好的值内。成熟期烟叶的氮/碱、糖/碱、钾/氯值随着施氯量的增加大致呈降低的趋势,施氯量在1.85~2.80 g/株时,各项比值在一个较适宜的范围内... 相似文献
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以蓖麻秸秆粉末为吸附剂,采用批量平衡法,研究固液比、pH、重金属离子初始质量浓度对蓖麻秸秆粉末吸附Pb,Hg,Cd和Ni离子的影响,探讨蓖麻秸秆粉末对4种重金属离子的等温吸附和吸附动力学特征。结果表明:Langmuir、Freundlich和Temkin模型能更好地描述蓖麻秸秆粉末对Pb的吸附,Langmuir和Temkin模型能更好地描述蓖麻秸秆粉末对Hg和Cd的吸附,Langmuir模型能更好地描述蓖麻秸秆粉末对Ni的吸附;蓖麻秸秆粉末对4种重金属离子的最大吸附量分别是209.60、129.41、62.78和25.86mg/g;准一级动力学、准二级动力学和叶洛维奇方程能很好地描述蓖麻秸秆粉末对Pb,Hg,Cd和Ni离子的吸附过程。蓖麻秸秆粉末可用于处理多种重金属离子污染的废水。 相似文献