家蚕丝素-RGD融合蛋白的盐析纯化工艺探讨

利用基因重组技术合成了具有良好细胞粘附活性的重组家蚕丝素-RGD融合蛋白质(Silk-RGD),探讨了其盐析的工艺条件。研究发现,在融合蛋白等电点pH8附近,当硫酸铵在溶液中的饱和度较低(10%)时,其蛋白质沉淀量随着温度的升高而增加;当硫酸铵的饱和度升至20%时,蛋白质沉淀量不再随着温度的变化而变化,但与低饱和度硫酸铵时相比,沉淀量明显增加;当硫酸铵的饱和度升至30%或以上时,沉淀中杂蛋白含量明显增多,不利于目的蛋白的纯化。Silk-RGD融合蛋白相对合理而且易操作的盐析纯化条件为:pH8,硫酸铵在溶液中的饱和度为20%,室温(约20℃)。利用该工艺条件,可以低成本、高效率地生产Silk-RGD融合蛋白,从而满足新型材料规模化开发的需要。     

深度氟中毒家蚕幼虫中肠吸收磷的研究

与健康的５龄家蚕幼虫不同，添食Ｐｉ的深度氟中毒家蚕幼虫的血淋巴和中肠内的总Ｐｉ，无机＋易变Ｐｉ，酸溶性磷和类脂磷的浓度不随时间改变而变化．这可能是高氟饲料阻碍中肠对Ｐｉ吸收和传输的结果     

用桑枝皮提取果胶及制备的纳米纤维素晶须在丝素复合膜中的应用

为高效利用蚕桑资源,以桑叶生产中废弃的桑枝皮为原料,提取果胶并制备纳米级纤维素晶须。研究表明,用0.10mol/L盐酸提取桑枝皮中的果胶,得率最高可达30.1%±1.2%,红外光谱图显示其主要成分为糖醛酸,且不同浓度盐酸处理可提取不同酯化度的果胶;经碱煮后的桑枝皮中的半纤维素和木质素被去除,主要成分为纤维素,再经硫酸水解制备获得长约400 nm、直径约20 nm的纤维素晶须。将桑枝皮纳米纤维素晶须与废弃蚕丝的溶液相混合制备丝素蛋白复合膜,因桑枝皮纤维素晶须与丝素蛋白间具有良好的相容性,故复合膜的强度和弹性模量显著提高,其拉伸强度和杨氏模量分别为35.79MPa和2.10 GPa。初步认为,利用桑枝皮提取果胶和制备纳米纤维素晶须,可以作为提高蚕桑资源利用率与增加桑园产值的途径之一。     

具有交联结构的丝素蛋白质凝胶的理化特性

用二缩水甘油基乙醚作为交联剂制备的丝素蛋白质凝胶（ Ｃ Ｆ Ｇ） 具有良好的强度和柔韧性。根据制作条件可达压缩强度＞ １００ｇ／ ｍ ｍ ２ ,压缩变形率＞ ６０ ％ 。 Ｃ Ｆ Ｇ 在中性溶液中很少有丝素蛋白质溶出,但能被胰蛋白酶分解。     

家蚕茧解舒机理的研究

丝胶的胶着性与胶凝有密切的关系。在一定的条件下,丝胶分子相互藉氢键的结合而发生凝集,形成束状的网络结构,分子结构由无规卷曲转化为β构象,失去流动性而发生胶凝作用,随着胶凝作用的进行胶着力增强并固化。高温多湿环境中蚕儿吐丝时由于水分发散难,长时间处于多湿环境中,丝胶分子由无现卷曲转化为β构象,丝胶发生胶凝作用,干燥固化而被覆于茧丝表面。丝胶的强度、胶着力相对增加,茧丝剥离抵抗强,蚕茧解舒就变劣。因此,相对优良的营茧环境是控制丝胶分子不发生构象转化、胶凝作用,生产优质蚕茧的有效途径。     

载入骨形态发生蛋白的羟基磷灰石/丝素蛋白复合支架的细胞相容性研究

骨形态发生蛋白-2(BMP-2)能够促进成骨细胞分化和骨组织的再生。将制备的羟基磷灰石/丝素蛋白(HA/SF)复合支架在50μg/mL BMP-2溶液中浸渍4 h后,获得了载入BMP-2的HA/SF复合支架。体外检测在原核表达系统中表达、纯化的BMP-2有促进细胞增殖的生物活性;BMP-2从HA/SF复合支架中的释放可持续9 d,并保持其生物活性,其中BMP-2在第1天的释放率即达到了43%;细胞实验结果显示,与空白HA/SF复合支架相比,载入BMP-2的HA/SF复合支架可以促进人骨肉瘤细胞(MG-63)的增殖与分化;RT-PCR检测BMP-2的加入使细胞内骨钙素基因mRNA转录水平明显提高,即骨钙素基因的表达增强。研究结果提示:HA/SF复合支架可吸附BMP-2并使其缓慢释放,从而促进细胞的增殖与分化,具有良好的细胞相容性,是一种较理想的骨组织缺损修复材料。