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目的克隆边缘无浆体MSP5基因,构建重组质粒,并进行表达与鉴定。方法根据GenBank公布的边缘无浆体MSP 5基因序列(AY714547)设计一对引物,无菌颈静脉采集边缘无浆体阳性的牛血,用PCR方法从4血的DNA模板中扩增MSP 5基因582bp的片断。将该片段克隆到原核表达载体pGEX-KG中,构建原核表达载体KG-MSP5,转化BL21,经IPTG的诱导表达蛋白。利用BugBuster GST Bind Purification Kit将其纯化,经Western blotting进行分析。结果重组质粒KG-MSP5,转化BL21,在IPTG的诱导下表达大小约46 kPa蛋白。western blotting分析表明其具有很好的免疫原性。结论本研究为边缘无浆体的血清学诊断试剂盒的研制奠定了基础。 相似文献
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苏云金芽胞杆菌晶体毒素对体外培养的日本血吸虫童虫的作用 总被引:2,自引:2,他引:2
将感染日本血吸虫的钉螺常规逸蚴,经注射器推压机械断尾获得的童虫,加入内含10%兔血清的RPMI-1640培养液后,置于单克隆培养板内,以苏云金芽胞杆菌(菌株YBT-1955)制得的伴胞晶体毒素,以不同的浓度加入以上各孔中于37℃,5%CO2培养箱内培养。培养12h后发现童虫活动力减弱,有些已经死亡;24h后,随着加入伴胞晶体毒素浓度的增加,童虫死亡率也相应增加,呈正相关(r=0.897)。经毒素蛋白含量为40mg/L处理的童虫,24h后死亡率为100%,LD50为15.95μg(1mL)。 相似文献
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将培养好的感染性猪蛔虫卵以每只5×103个虫卵感染小鼠,于次日以不同方式(灌胃、肌肉注射、静脉注射和腹腔注射)注入苏云金芽胞杆菌伴胞晶体蛋白(insecticidal crystal proteins,Icps),对照组静脉注射BSA(小牛血清白蛋白),每只0.5mL,连续3d。小鼠于第6天剖杀,肝脏分离幼虫,计算减虫率。取肝脏,以4%多聚甲醛固定48h,制作石蜡切片,应用免疫组织化学SABC法定位蛔虫幼虫体内的Icps。研究结果显示,静脉注射晶体蛋白毒素效果最好,减虫率达到72.7%;肌肉注射、灌胃、腹腔注射效果次之,分别为19.1%、14.6%、14.36%。免疫组织化学研究显示,Icps结合到虫体的体表及肠道。 相似文献
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为了进行弓形虫微线体蛋白MIC3基因的细胞免疫研究。[方法]将弓形虫微线体蛋白MIC3的真核表达质粒pcMIC3以肌肉注射的方式间隔2周3次免疫Balb/c小鼠,同时设空载体pcDNA3.1和PBS对照组。在末次免疫后2周分别以MTT比色法和CTL法测定试验小鼠脾淋巴细胞的增殖应答和细胞毒性T细胞(CTL)毒活性。[结果]与pcDNA3.1和PBS对照组相比,pcMIC3组小鼠的脾淋巴细胞的增殖应答和CTL毒活性均极显著增强(P<0.01)。[结论]该研究为弓形虫DNA疫苗的进一步研制奠定了基础。 相似文献
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规模化养猪即集约化养猪给养猪业带来了一个新的概念。他显著地提高了养猪劳动效益,为猪只的生产繁殖创造了一个良好的环境条件,并且可以有效控制一些传染病的发生。但另一方面由于密集饲养,畜舍常年温暖潮湿,为某些疾病,特别是寄生虫病的发生和传播创造了有利条件。寄生虫病会引起猪只的消瘦、死亡。母猪空怀、死胎、流产,猪只生长速度和饲料报酬明显降低,严重影响规模化养猪场的经济效益。 相似文献