猪蛔虫rAs37基因的克隆及原核表达

根据编码rAs37的已知基因序列设计并合成1对引物,应用PCR技术从猪蛔虫感染性虫卵的cDNA中扩增编码rAs37的部分基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入E.coli DH5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定.然后阳性重组质粒转化入E.coli BL21-CodonPlus, IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定.结果显示,扩增的rAs37基因与GenBank中相应基因序列(AB078971)的同源性达100%,表达的rAs37融合蛋白表观相对分子质量约为60 000,且可被兔抗猪蛔虫免疫血清识别.说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立猪蛔虫早期诊断方法和研制猪蛔虫的亚单位疫苗奠定了基础.     

弓形虫ROP2基因的克隆及原核表达

应用PCR技术从刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）RH株的基因组DNA中扩增编码棒状体蛋白ROP2（rh—potryprotein2）的部分基因，构建pGEX—KG—ROP2重组表达质粒，经酶切、PCR及DNA测序鉴定后，将阳性质粒转入E．coli BL21CodonPlus中，在IPTG诱导下表达，表达产物用SDS—PAGE和Western—blot分析鉴定。结果表明，扩增的ROP2基因与GenBank上发表的相应基因序列的同源性达99.9％，该基因可以在大肠杆菌中高效表达，表达的ROP2融合蛋白表观相对分子质量约为64000，可被兔抗弓形虫免疫血清识别。     

规模化猪场寄生虫病的控制

寄生虫病仍然是严重影响规模化养猪发展的重要原因之一．本文对近年来规模化猪场的寄生虫感染特点、治疗药物、用药原则、用药方案以及用药时的注意事项进行了综述。     

γ-干扰素对弓形虫MIC3的基因免疫效果研究

将编码弓形虫微线蛋白3(MIC3)的真核表达质粒pcMIC3和编码γ-干扰素(IFN-γ)的真核表达质粒pcIFN-γ各100μg混合肌肉注射,间隔2周、3次免疫Balb/c小鼠,同时设相同剂量的pcMIC3、pcDNA和PBS免疫对照组。分别以酶联免疫吸附试验(ELISA)、四氮甲唑蓝(MTT)比色法和乳酸脱氢酶释放法(LDH)检测试验小鼠血清的特异性抗体、脾淋巴细胞的增殖应答和细胞毒性T细胞(CTL)活性,并观察腹腔接种弓形虫RH株速殖子后质粒的免疫保护效果。结果表明:与其它试验组相比,pcMIC3 pcIFN-γ组试验小鼠在免疫8周后的ELISA抗体水平、脾淋巴细胞的增殖应答和CTL活性显著或极显著提高,免疫小鼠45 d时的生存率为100%,能有效抵抗小剂量弓形虫强毒株的攻击。     

经典猪瘟和非洲猪瘟的鉴别诊断

经典猪瘟和非洲猪瘟是由不同病毒引起猪只的高度接触性传染病,对养猪业危害极大。经典猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒引起猪发病的流行病学特征和临床症状有许多相似,也有许多不同点。在临床上对经典猪瘟和非洲猪瘟进行鉴别诊断,应多注意其不同点,以便早期确诊疫病和采取合理的防控和扑灭措施,减少猪场损失。     

用几种梯度密度珀珂(Percoll)纯分离枯氏住肉孢子虫缓殖子

将含有枯氏住肉孢子虫缓殖子的心肌碎末混悬液,叠加在含有四种不同梯度密度的珀珂(Percll)溶液之上(从底部至上层舶州密度分别为1.10,1.07,1.037和1.02g/ml)的离心管中,然后放在与转轴成45°的离心机内,离心力为1024g(3200转/分),于15℃离心20分钟。然后,从离心管底部获得非常纯净的住肉孢子虫缓殖子。     

利用套式PCR检测牛羊乏质体

为同时检测和鉴定牛边缘乏质体、中央乏质体及绵羊乏质体,根据这3种病原体的msp4基因核苷酸序列,自行设计、合成了针对3种乏质体的2对通用引物,及分别针对三者的特异引物,通过PCR条件优化,建立了检测乏质体及分别鉴定3种乏质体的套式PCR方法,并与OIE推荐的msp5半套式PCR比较.结果显示:该方法对牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、羊莫氏巴贝斯虫、山羊泰勒虫、温氏附红细胞体、东方巴贝斯虫、刚地弓形虫、伊氏锥虫均未扩增出特异性片段.套式PCR检测乏质体DNA量为0.2 pg(相当于6个感染红细胞).检测l 119份来自6个不同地区的奶牛、肉牛、水牛及羊的临床样品,阳性106份,经鉴定边缘乏质体46份,中央乏质体15份,绵羊乏质体35份,混合感染中央乏质体和绵羊乏质体4份,混合感染边缘乏质体和绵羊乏质体3份,混合感染边缘乏质体和中央乏质体3份.首次在分子生物学水平证明中央乏质体存在于中国.同时,证明牛可以混合感染边缘乏质体和中央乏质体或绵羊乏质体,以及混合感染中央乏质体和绵羊乏质体.上述848份样品用OIE推荐的msp5半套式PCR同时检测,两者符合率为98.5％(835/848).检测结果表明,msp4套式PCR特异、敏感,可用于边缘乏质体、中央乏质体、绵羊乏质体的检测和鉴定.     

寄生于中国水牛Bubalus Vbubalis的巴贝斯虫一新种(梨形虫目:巴贝斯科)

经作者等深入研究，发现湖北省水牛巴贝斯虫病病原不是牛巴贝斯虫Ｂａｂｅｓｉａｂｏｖｉｓ与双芽巴贝斯虫Ｂ．ｂｉｇｅｍｉｎａ，而是一新种——东方巴贝斯虫Ｂａｂｅｓｉａｏｒｉｅｎｔａｌｉｓｓｐ．ｎｏｖ．。病牛红细胞中的虫体呈梨形（单梨形多于双梨形）、椭圆形、指环形、边虫形及杆状。以梨形虫体居多，病的初期其长度均小于红细胞半径，其平均大小为２．２×１．３μｍ，双梨形虫体尖端相连多排列成钝角或一字形，位于红细胞偏中央处。病的后期（出现虫血症后５～６ｄ）及体外培养７２ｈ，有少部份（１～２％）虫体直径大于红细胞半径。新种的传播者为镰形扇头蜱Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓｈａｅｍａｐｈｙｓａｌｏｉｄｅｓｈａｅｍａｐｈｙｓａｌｏｉｄｅｓ经卵传递（由第二代成蜱传给健康牛）。在成蜱的血淋巴中的虫样体（裂殖子）呈圆锥状、一端钝圆、尾部直而尖，不形成钩。新种对黄牛不能感染致病，只能使水牛致病。以１９９培养基加黄牛血清进行体外培养（微气静相培养技术）不能生长繁殖     

猪疥螨病防治进展

猪疥螨寄生于猪的皮肤内．引起猪剧烈瘙痒．主要是通过猪与猪直接接触而传播，根据临床症状和在病料中检查到病原——疥螨进行诊断，对于规模化猪场的猪最好采用在饲料中添加《虫螨净》药物根除此病。     

氧阿苯哒唑驱除绵羊蠕虫的药效试验

用自然感染蠕虫的绵羊观察并确证氧阿苯哒唑对绵羊蠕虫的驱除效果。各试验组羊分别一次内服氧阿苯哒唑５、１０、２０ｍｇ／ｋｇ药物,药物对照组内服丙硫咪唑１０ｍｇ／ｋｇ。结果是氧阿苯哒唑各试验组的精计驱虫率和粗计驱虫率对食道口线虫、奥斯特线虫和细颈线虫均为１００％;高剂量对毛首线虫分别为１００％和９５％;中、高剂量对莫尼蒋绦虫均为１００％。人药后无毒副反应,部检未见病理变化。表明氧阿苯哒唑对绵羊的抗蠕虫效