肉鹅巴氏杆菌病的诊治

通过流行病学调查、临床剖检、细菌分离鉴定、生化试验、PCR检测、动物试验和药敏试验对一起鹅巴氏杆菌感染病例进行了确诊,并参考药敏试验结果进行用药治疗,控制疫情。药敏试验结果表明,该巴氏杆菌分离株对菌必治、头孢噻吩、头孢他啶、头孢唑肟和氟苯尼考5种药物较为敏感。     

一株副乳房链球菌的分离鉴定及生物学分析

从四川省某大型养殖场病死猪肺脏分离到一株副乳房链球菌,观察该菌株的生长特性、染色特性,进行生化鉴定、药敏鉴定、毒力试验以及16S rRNA基因序列进化树分析。结果显示：该分离株的16S rRNA序列与副乳房链球菌的同源性为99%。分离株在TSA琼脂培养基上呈光滑圆形,半透明的菌落,在血琼脂上呈β溶血;对小鼠的致病性试验测得LD50为206×107 cfu·只-1;药敏试验表明,其对头孢类药物较为敏感,对喹诺酮类、四环素类以及氨基糖苷类不敏感。该研究为该菌的临床诊断、疾病预防、选药治疗等奠定了基础。     

白缘(鱼央)维氏气单胞菌的分离鉴定与药敏试验

从发病白缘(鱼央)病变组织分离纯化1株G^-细菌,经过染色镜检、生理生化试验、16S rDNA序列分析和动物试验鉴定为气单胞菌属维氏气单胞菌,并编号为LA201001。采用Kirby-Bauer法检测了维氏气单胞菌分离菌株对30种常用抗菌药敏感性。结果显示,维氏气单胞菌分离株LA201001对小鼠和白缘(鱼央)具有致病性,且耐药性较强,对强力霉素、四环素、复方阿莫西林、氨苄青霉素、头孢氨苄、头孢噻吩、卡那霉素等21种受试药物耐受,仅对庆大霉素、丁胺卡那、诺氟沙星、环丙沙星和氧氟沙星5种受试药物敏感。     

猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及荚膜血清分型

为了解各血清型的多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）在四川、重庆、云南的流行情况,对2013-2014年间四川、重庆、云南等地8个规模化养殖场的125份病死猪肺炎样品进行细菌分离,并用PCR方法对分离的多杀性巴氏杆菌进行鉴定及荚膜血清分型。结果表明：从有肺炎症状病死猪的肺脏样品中共分离出11株多杀性巴氏杆菌,其中有7株为A血清型（63.6%）,3株为D血清型（27.3%）,1株为F血清型（9.1%）,没有发现B和E血清型。表明在该区域内,猪肺疫主要是由A型Pm感染引起。另外,此次还分离出了1株较少见的F型多杀性巴氏杆菌。该结果可为上述地区巴氏杆菌病的防治提供科学材料。     

乳酶LDH作为奶牛隐性乳房炎早期诊断指标的研究

为了筛选敏感的奶牛隐性乳房炎早期诊断指标,选择220头荷斯坦泌乳奶牛,分别采集乳汁进行体细胞计数和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定.结果显示,隐性乳房炎奶牛乳汁中LDH活性显著高于健康奶牛(P＜0.05),乳汁体细胞数(SCC)与LDH活性呈正相关(r2=0.93).选择LDH活性>100 IU/L作为隐性乳房炎的判定阈值,诊断的敏感性为70%,特异性为82.3%,Jouden指数为0.52.结果提示,LDH可作为奶牛隐性乳房炎早期诊断指标.     

奶牛乳房炎抗性基因TAP cDNA克隆及序列分析

采用RT-PCR方法从奶牛乳腺组织中扩增气管抗菌肽(TAP)基因,重组到pMD19-T Simple载体中,并进行序列分析。序列分析结果显示,克隆的TAP基因包含完整的开放阅读框(ORF) 195 bp,与牛TAP基因同源性达93.8%;该ORF编码的64个氨基酸,含有β-防御素特征性结构即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。TAP基因cDNA完整开放阅读框的克隆,为进一步开发应用重组牛β-防御素奠定了基础。     

奶牛S100A12基因克隆、原核表达及体外抗菌活性分析

克隆奶牛S100A12基因并在大肠杆菌中高效表达.采用RT-PCR扩增奶牛外周血白细胞中S100A12基因,构建原核表达载体pCold TF-S100A12,在大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达并纯化.SDS-PAGE和Westernblotting分析显示S100A12基因以融合蛋白形式表达,表达量占菌体总蛋白的46.7％,纯化的重组蛋白(80 mg/L).琼脂扩散法测定重组蛋白对乳腺炎主要致病菌大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌活性.结果显示:重组蛋白对大肠杆菌有抗菌活性,而对金黄色葡萄球菌无抗菌活性.本研究为S100A12蛋白抗体制备及基因功能研究奠定了基础.     

检测猪瘟病毒胶体金和量子点试纸条的初步研制

为建立快速、简便检测猪瘟病毒(CSFV)抗体的方法,本研究采用胶体金和量子点免疫层析技术,将纯化的重组CSFV E2蛋白作为捕捉抗原,以纯化的抗CSFV E2蛋白多克隆抗体和HRP兔抗猪IgG分别包被于硝酸纤维素膜上,作为质控线(C线)和检测线(T线),优化反应条件,制备免疫层析试纸条,用于临床检测。结果表明,制备的2种试纸条都可用于检测CSFV标准阳性血清,使用不同批次试纸条进行检测,结果无差异。2种试纸条与CSFV阳性血清反应呈阳性,与伪狂犬病毒(PRV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和圆环病毒2型(PCV2)反应呈阴性;胶体金试纸条在临床样品中阳性检出率为84.38%(81/96),与CSFV抗体检测ELISA试剂盒检测阳性符合率为92.05%(81/88);量子点试纸条阳性检出率为87.50%(84/96),与ELISA试剂盒检测阳性符合率为95.45%(84/88)。本研究制备的2种试纸条都具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性。     

PCR、SPA-ELISA、GDT3种方法检测猪伪狂犬病毒的效果比较

为了比较临床中常用的猪伪狂犬病诊断方法的检测效果,试验采用常规方法对猪伪狂犬病毒进行不同浓度梯度的稀释,分别通过聚合酶链式反应(PCR)、葡萄球菌A蛋白-酶联免疫吸附试验(SPA-ELISA)、琼脂扩散试验(GDT)3种方法对猪伪狂犬病毒进行检测,并对各种方法的敏感性、可重复性、经济性、简便性进行综合分析。结果表明:SPA-ELISA法和PCR法的灵敏度都远远高于GDT法,并且二者的敏感性相当;PCR法和SPA-ELISA法适用于实验室对PRV的确诊;GDT法所耗费的材料较少、经济、操作简便,适合于临床大规模的检测和初次检测猪伪狂犬病毒的存在。     

基于高通量测序技术分析奶牛场垫沙和橡胶垫卧床中的菌群差异

为探究奶牛场沙土垫层和橡胶垫层菌群特征及差异,分别采集四川省两个规模化奶牛场的沙土垫层样本和橡胶垫层样本各6份,利用高通量测序技术对16S rRNA基因的V4区进行测序和生物信息学分析。结果显示,两个奶牛场的卧床垫层12个样本共获得1 443 818条优化序列(clean reads),将相似度为97%的有效序列进行操作分类单元(operational taxonomic units, OTUs)聚类,共得到2 311个OTUs。在属分类水平上,沙土垫层优势菌属为不动杆菌属(Acinetobacter)、海杆菌属(Marinobacter)、里氏杆菌属(Riemerella)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、节杆菌属(Arthrobacter);橡胶垫层优势菌属为棒状杆菌属(Corynebacterium)、藤黄单胞菌属(Luteimonas)、梭杆菌属(Fusobacterium)、盐单胞菌属(Halomonas)、弧菌属(Vibrio)。沙土垫层样本中不动杆菌属(Acinetobacter)、里氏杆菌属(Riemerella)的相对丰度显著高于橡胶垫层样本(P<...