微小隐孢子虫P23基因在毕赤酵母中的表达及初步应用

为将微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)P23基因在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)系统中进行表达,利用表达蛋白初步建立隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,设计引物从微小隐孢子虫基因组DNA中扩增P23基因序列,构建pPIC9K-P23重组质粒,在毕赤酵母中进行表达,用阴离子交换层析柱进行纯化。以重组P23纯化蛋白为抗原建立间接ELISA检测方法,对现场采集的猪血清样品进行检测。SDS-PAGE显示所表达的蛋白大小约为23 kDa。Western blot检测表明该蛋白能与兔抗P23蛋白血清特异性结合。用建立的间接ELISA技术对186份猪血清样品进行检测,阳性率为83.3%。本研究获得了真核表达的P23重组蛋白,初步建立了微小隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,为隐孢子虫病的诊断和流行病学调查打下了基础。     

12个微卫星DNA标记在江口萝卜猪群体中的遗传多样性研究

采用12对微卫星引物对江口萝卜猪群体的遗传多样性进行研究。结果发现12个微卫星位点在江口萝卜猪群体中均具有多态性,平均基因杂合度、多态信息含量和有效等位基因数分别为0.760 1、0.707 9和4.173 7。实验结果表明,江口萝卜猪群体具有较高的遗传多样性,群体内部变异较大,若通过家系育种有较大的选育潜力。     

微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及抗血清的制备

以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因。将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达载体,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果表明,获得了CP15-P23-CP15/60融合基因,并在大肠埃希菌中高效表达,Western blot显示重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清识别,制备的多克隆抗体能被重组蛋白特异性识别,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性。     

草原有毒植物乌头中毒及治疗

近几年由于草原载畜量过大,放牧过度,造成有毒植物大量滋生。尤其在伊犁草原乌头草已给畜牧业生产带来了严重影响,本文就乌头草的生长特点、毒性和中毒治疗给予介绍。     

饲料原料(玉米、大豆)膨化生产线研究设计

文章针对玉米难以膨化及膨化前后物理性质变化较大等问题,设计了一套时产1.5~3 t的饲料原料膨化生产线及其关键设备。该生产线由原料双清筛、粉碎机、调质器、膨化机、脉冲除尘器、翻板冷却器、料仓、蒸汽及膨化机主机负荷自动调节系统等组成。本设计改进了粉碎机的结构和保障粉碎机高效的风网体系;通过双清筛将原料中粗细杂筛出、延长了膨化机工作部件的寿命;使用效果好的调质器提高了膨化机的产能;使用多用型翻板式冷却器达到了理想的冷却及排卸功能;平底料仓的使用彻底解决了物料结拱问题;使用蒸汽及主机负荷自动调节系统提高了膨化机的产能。     

热研二号柱花草转化体系优化的研究

通过柱花草Stylosanthes guianensis转化过程中预培养时间、农杆菌Agrobacterium侵染浓度、乙酰丁香酮、植物组织浸提液、脯氨酸、硝酸银和农杆菌浸入法对农杆菌、外植体及共培养基的处理,研究了提高柱花草基因转化率的方法.试验结果:用预培养2 d处理外植体,10 μmol/L乙酰丁香酮和稀释5倍的番木瓜Carica papaya浸提液预处理农杆菌,1.5 mg/L的脯氨酸处理共培养基及采用农杆菌浸入法侵染外植体可以明显地提高柱花草的转化率;对农杆菌进行稀释,用柱花草浸提液预处理农杆菌及硝酸银处理共培养基对转化率无明显的影响.用SAS软件进行2×2的卡平方(x2)检验在最佳条件下的遗传转化表明:子叶和真叶的出芽率与对照相比差异都达到极显著.     

桤木属种质资源研究进展

桤木属种质资源具有重要的学术价值和应用价值.综述了桤木种类与分布、遗传育种、光合特性、固氮特性、材性、抗性、繁殖技术以及造林方法与幼林管理等方面的研究现状,并探讨了桤木种质资源研究中存在的问题.     

广东古田省级自然保护区两栖爬行动物资源调查

为掌握广东古田省级自然保护区两栖爬行动物资源现状,促进自然保护区的有效管理和建设,本研究于2011年3～10月对广东古田省级自然保护区的两栖爬行动物资源进行了初步调查,发现两栖爬行动物共52种,隶属于3目13科.其中两栖纲1目4科14种,爬行纲2目9科38种.该保护区两栖爬行动物地理区划属于东洋界华南区闽广沿海亚区,区系组成以东洋界华中区与华南区共有种为主,达41种(占总物种数的78.85％).调查发现1种广东省两栖类动物新记录——长肢林蛙,发现外来入侵物种红耳龟、牛蛙和孟加拉巨蜥.并就保护区两栖爬行动物资源的保护与管理工作提出了建议.     

海南地区番木瓜畸形花叶病毒的发现与鉴定

利用马铃薯Y病毒属的简并引物对3个海南感病番木瓜植株的叶片进行RT-PCR检测,并将其克隆到T载体上进行测序和BLAST分析。结果表明：均获得了大小约1 700 bp的特异性条带,与预期大小基本一致;所得序列与GenBank中收录的番木瓜畸形花叶病毒（Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV）基因序列相似性达到88％～96％,序列包含部分NIb蛋白基因、外壳蛋白（CP）基因和3′端非编码区。这是首次报道在中国海南地区发现番木瓜感染了PLDMV。但是仅基于PLDMV外壳蛋白基因的系统进化分析结果还不足以证明在海南发现的PLDMV与其他地区的某一PLDMV株系为同一进化簇。     

酉州乌羊扩繁场舍饲管理技术探讨

山羊养殖具有投资少、见效快的优点,能有效利用农闲田与退耕地种植优质牧草进行规模饲养。在现代肉羊生产体系中,品种的贡献率约占40％,品种的选优提纯是一项繁琐而重要的基础工作,其最终目的是为了高效利用。我国养羊企业从国外引种者众多,但容易忽略品种选育,尤其是对国内优良地方品种的选育。因此,充分发掘本地特色优良品种,对其进行保护并高效扩繁,最后利用其优良品质,走健康、高效养殖之路,是发展农村经济、实现农民增收的好途径。