视黄酸诱导基因蛋白Ⅰ在抗禽源病毒先天免疫中的作用研究进展

文章介绍了视黄酸诱导基因蛋白Ⅰ(RIG-Ⅰ)的结构、对病毒的识别机制、抗禽流感病毒与新城疫病毒的先天免疫作用,为其抗病毒机制的深入研究提供参考。     

SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR方法快速鉴定新城疫病毒毒力

为快速鉴定不同新城疫病毒株(NDV)毒力,我们以NDV F蛋白裂解位点附近的基因序列自行设计1对引物,对不同毒力NDV毒株进行荧光RT-PCR扩增,根据其扩增效率及扩增产物熔解温度(Tm)值大小进行NDV毒株毒力的鉴定,建立了能区分NDV强弱毒株的SYBR GreenI荧光RT-PCR方法;同时将其与鸡胚平均致死时间(MDT)测定和F蛋白裂解位点序列分析结果进行比较。结果发现:建立的SYBR Green I荧光RT-PCR方法只需4 h即可判定结果,NDV强弱毒株扩增产物Tm值为(83±0.5)℃且有2个峰值,阴性对照Tm值为(81±0.5)℃且只有1个峰值;对NDV强毒株的扩增效率即Ct值在11~20之间,NDV弱毒株Ct值在25~30之间,阴性对照Ct值在30以上,Ct值在20~25之间为强弱毒株混合物。该方法检测结果与MDT测定和F蛋白裂解位点分析结果一致。应用SYBR Green I模式荧光RT-PCR方法与普通RT-PCR方法和鸡胚接种鉴定方法分别对80份临床组织样品进行检测,强毒株的检出率均为53.75%(43/80),而弱毒株的检出率相应为31.25%(25/80)、27.50%(22/80)和35.00%(28/80),检出符合率达89.3%以上。这些结果表明建立的SYBR Green I荧光RT-PCR方法具有特异、准确、快速等特点,可用于临床病料样本NDV毒株的毒力鉴定。     

BPV1贵州株L1基因序列分析及原核表达

为表达牛乳头瘤病毒1型贵州株(BPV1-GZLZ株)衣壳蛋白L1基因,采用PCR方法从贵州省六枝特区某规模化养牛场疑似病牛的皮肤肿瘤病料样品中扩增BPV1 L1基因,克隆至p MD19-T载体,测序后进行生物信息学分析;同时将BPV1-GZLZ株L1基因克隆于原核表达质粒p ColdⅠ中,经IPTG诱导L1蛋白表达,并对重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting分析。生物信息学分析显示,BPV1-GZLZ株L1基因核苷酸序列长为1488 bp,编码495个氨基酸,分子结构式为C2484H3884N678O737S16,理论等电点(PI)为8.68,二级结构主要包括α-螺旋、无规则卷曲和β-折叠为主,无跨膜结构域和信号肽; BPV1-GZLZ L1基因序列与BPV1参考株的核苷酸和氨基酸同源性均为99.8%,处在同一遗传进化分支,且与BPV13和BPV2、BPV2-GZ01的亲缘关系较近; Western blotting结果显示,经IPTG诱导的重组表达蛋白能与His单抗产生特异性反应,条带为55.6 kD左右与SDS-PAGE结果一致。研究表明,试验构建了BPV1-GZLZ株L1基因原核表达载体并成功表达。     

猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病毒和大肠杆菌混合感染的诊断

正2017年1月贵州省某猪场的新生仔猪出现精神沉郁、消瘦、水样腹泻、呕吐等临床症状。为了解该猪场的疫病感染状况,根据剖检病理变化、实验室诊断等方法,确诊为猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病毒和大肠杆菌混合感染。笔者就本病例诊治过程做出总结与分析,以期为类似病例诊断做出一定的实践参考。1发病情况该猪场存栏猪约1 500头,2016年12月下旬3日龄左右哺乳仔猪约20%     

德菲尔法构建重大动物疫病预警指标体系

[目的 ]构建重大动物疫病暴发流行预警指标体系。[方法 ]以禽流感和口蹄疫为例,采用文献调研法和德菲尔专家咨询法中的专家会议法初拟重大动物疫病预警体系的框架和指标;应用德菲尔专家咨询法评价预警指标的重要性、可操作性;应用组合权重法比较各指标综合影响的大小,并将指标分类。[结果 ]筛选出禽流感和口蹄疫预警预报一级指标6项(易感动物、饲养管理和免疫情况等)以及二级指标14项(免疫效果、环境消毒、温度等),并将指标分为三类(关键指标、重要指标和一般指标)。[结论 ]初步构建了重大动物疫病暴发流行预警指标体系。     

致病性凡隆气单胞菌的分离鉴定与生物特性

为弄清发病瓯江彩鲤的致病病源及其特征特性,采用鲜血琼脂培养基从发病瓯江彩鲤肝脏分离到1株革兰氏阴性杆菌(HX201006-1),经细菌形态学及培养特征观察,再作生化分析、16S rDNA序列分析和构建系统发育树进行分类鉴定,且对该菌株作了药敏特性和致病性试验.结果表明:分离菌株为凡隆气单胞菌温和生物型,该菌16S rDNA前546 bp与印度凡隆气单胞菌温和生物型AE-21株的亲缘关系最近,同源性为99%;调整含菌量为3×108CFU/mL以肌肉和腹腔注射感染试验动物,16 h致死小白鼠,46 h内5条异育鲫鱼全部死亡,67 h内5条鲤鱼全部死亡,该菌株具有较强的致病性;药敏试验中该菌对头孢噻吩、丁胺卡那、庆大霉素等9种药物敏感;对红霉素和复方新诺明中度敏感;对青霉素、四环素和O/129等9种药物均存在不同程度的耐药性.     

猪瘟RT-PCR-步法检测技术的建立及应用

为了建立一种早期猪瘟病原诊断方法,试验采用RT-PCR-步法检测技术,根据猪瘟病毒(CSFV)E2基因序列合成1对特异性引物,通过确定最佳PCR反应条件对其特异性、敏感性进行测定,并对12份可疑猪瘟病毒感染的病料进行了检测.结果表明:RT-PCR-步法检测技术快速、敏感性高、特异性好,可以用于猪瘟病原的早期诊断.     

牛双芽巴贝斯虫、附红细胞体和支原体混合感染的诊治

为了对贵州省贵定县某种牛养殖场种牛死亡原因进行确诊,采用流行病学调查、临床症状观察、病理剖检、细菌分离培养、寄生虫和支原体检测等方法对发病死亡的种牛进行诊断。结果表明:根据流行病学调查、病理剖检初步诊断送检的病死种牛疑似血液原虫、支原体感染后支原体病原核酸检测出特异性条带;血涂片染色镜检观察到大量附红细胞体,感染率为80%(8/10),且红细胞内有典型双芽巴贝斯虫虫体,感染率为40%(4/10)。确诊造成该种牛养殖场种牛发病死亡的原因为双芽巴贝斯虫、附红细胞体和支原体混合感染。     

乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌组合对哺乳仔猪生长性能、免疫器官指数和血液生理生化指标的影响

为研究乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌对哺乳仔猪生长性能、免疫指标和血液生理生化指标的影响,试验将80头新生哺乳仔猪平均分为对照组和试验组,试验组仔猪灌服乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌组成的复合益生菌制剂,对照组不灌服,试验期为21 d。试验结束时,测定仔猪生长性能;每组随机选择20头仔猪前腔静脉采血,检测血液生理生化指标;同时每组选取4头体型中等的仔猪进行屠宰,钝性分离免疫器官,测定免疫器官重,计算免疫器官指数。结果表明:与对照组相比,试验组仔猪腹泻率极显著降低(P0.01),仔猪平均日增重显著提高(P0.05);试验组仔猪腹股沟淋巴结、脾脏、肾脏、肝脏、心脏和胸腺指数均高于对照组,其中肾脏和心脏指数差异极显著(P0.01),脾脏指数差异显著(P0.05);试验组仔猪血液中白细胞数、粒细胞比率、粒细胞数、红细胞数、血红蛋白、血细胞比容和血红蛋白含量均极显著高于对照组(P0.01),淋巴细胞数和血小板压积显著高于对照组(P0.05)。说明乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌组成的复合益生菌能够提高仔猪的生长性能和免疫水平。     

三穗麻鸭Cofilin2基因序列分析及其组织表达研究

为探究三穗麻鸭丝切蛋白2(Cofilin2)基因特征及其在鸭组织中的表达规律,试验根据GenBank中鸡Cofilin2基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增获得目的基因,利用生物信息学软件分析三穗麻鸭Cofilin2基因特征,实时荧光定量PCR方法检测Cofilin2基因在三穗麻鸭不同组织中的表达情况。结果显示,三穗麻鸭Cofilin2基因编码区大小为498bp,可编码166个氨基酸;三穗麻鸭Cofilin2基因序列与鸡、猕猴、牛、小鼠、安大略鲑、人和猪相应序列的同源性分别为94.4%、91.6%、91.6%、87.6%、77.7%、70.5%和69.5%;系统进化树显示,Cofilin2基因在不同物种进化过程中高度保守;Cofilin2基因编码蛋白的二级结构由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲组成,三级结构呈弯曲螺旋结构;实时荧光定量PCR检测显示,三穗麻鸭Cofilin2基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、胸腺、十二指肠、腿肌和法氏囊等组织器官中均有不同程度表达,其中心脏中表达量最高,法氏囊中表达量最低。本试验结果为三穗麻鸭抗病分子机理研究奠定了基础。