PRRSV GZJL株GP5基因的克隆及原核表达

为成功表达PRRSV GZJL株GP5蛋白,本研究设计合成一对引物,并以PCR方法从阳性重组质粒pMD18-T-GP5中扩增得到PRRSV GZJL株GP5基因片段中的79～600 bp即dGP5.将dGP5基因连接至原核表达载体pET-32a(+),并转化入表达菌株BL21(DE3).经PCR、双酶切和测序鉴定,阳性...     

猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的诊断

2009年3月贵州省某猪场送检病猪3例,为确诊病因,进行了流行病学调查,实验室剖检病变观察,细菌学、荧光抗体和RT-PCR检测。经流行病学调查和剖检病变观察,该病例为疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒感染所致;该病例细菌分离鉴定结果为阴性,猪瘟直接荧光抗体检测结果为阳性,猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒RT-PCR核酸检测为阳性。表明,该病例为猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染。     

构建山羊传染性胸膜肺炎DNA疫苗的展望

20世纪90年代以来研究诞生的DNA疫苗以经济适用、制作简易、免疫高效及安全可靠为优点,已迅速成为动物疾病预防的研究重点,被称作"疫苗的第三次革命"。文章要概述了DNA疫苗的特点及国内外研究进展,并从山羊传染性胸膜肺炎病原抗原基因研究方面讨论了构建该病DNA疫苗的意义与重要性,对构建山羊传染性胸膜肺炎DNA疫苗作一展望。     

畜禽源3种革兰氏阴性杆菌多重PCR检测方法的建立与应用

为建立一种可准确、快速鉴定畜禽临床病例中3种常见革兰氏阴性杆菌的多重PCR检测方法,本试验针对大肠埃希菌23S rRNA基因、巴氏杆菌KMT基因和沙门氏菌invA基因分别设计合成了1对特异性引物,构建可同时快速鉴别大肠埃希菌、巴氏杆菌和沙门氏菌的多重PCR反应体系,并进行反应条件优化及方法性能评估。结果显示,所建立的方法最佳引物浓度分别为1.0、1.5和1.0 μmol/L,最佳退火温度为56 ℃。性能评价结果显示,所建立的多重PCR检测方法具有较好的特异性和敏感性,其中对沙门氏菌检测敏感性最高,为1.44 pg/μL。对70株革兰氏阴性临床分离细菌进行检测,结果表明,所建立的多重PCR检测方法能实现3种临床分离细菌的快速准确鉴定。本方法的建立为相关临床病例快速诊断及流行病学调查提供了有效的技术支持。     

奶牛场蚊蝇体内细菌种类的调查

为了解奶牛场环境中蚊蝇体内携带细菌的情况,从贵阳市 4个规模化奶牛场采集蚊子和苍蝇各34只进行细菌的分离与鉴定.结果表明:从21只蚊子和33只苍蝇体内分离到细菌,检出率分别为 61.76%和97.1%;在分离的53株细菌中,鉴定为大肠埃希氏菌的有5株、克雷伯氏菌3株、志贺氏菌4株、肠杆菌1株、表皮葡萄球菌6株、腐生葡萄球菌2株和未定种32株.结果可为奶牛场细菌性疾病的综合防治提供科学数据.     

贵阳市奶牛隐性乳房炎的调查与病原鉴定

为了解贵阳地区奶牛场隐性乳房炎情况,试验采用C.M.T方法筛选隐性乳房炎乳样后,选取部分阳性乳样进行细菌分离与生化鉴定,并针对23S rRNA设计引物对金黄色葡萄球菌分离物进行分子鉴定.结果表明,贵阳地区奶牛场隐性乳房炎的检出率为40%(680/1700),从90份阳性乳样中分离出细菌188株,主要有金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、表皮葡萄球菌、停乳链球菌和大肠杆菌等,分别占分离菌的32.90%、12.23%、10.11%、8.51%、7.98%和7.44%;针对金黄色葡萄球菌建立的PCR鉴定方法具有较好的特异性和灵敏性,与传统生化鉴定结果的符合率达到90.32%.     

胸膜肺炎放线杆菌的PCR诊断方法研究

采用胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,App)外膜脂蛋白Om/A基因序列合成了1对特异性引物,建立了用于检测App的PCR方法.结果表明:经过PCR扩增,3株App分离株均能扩增出长约950 bp的预期DNA片段,而大肠埃希氏杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella sp.)、支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、葡萄球菌(Staphylococcus sp.)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、变形杆菌(Proteus sp.)和链球菌(Streptococcus sp.)等与猪病有关的8种病原菌均为阴性;App DNA最低检出浓度可达55.0 ng/mL,且试验结果与传统的生化反应鉴定结果完全一致,符合率达100%,证明此方法特异性和敏感性强,可用于猪传染性胸膜肺炎的快速诊断.     

不同新城疫病毒株结构蛋白的分析

2株新城疫病毒ND98、ND99分别分离自发病鸡群与雏鸵鸟,ND98属于中发型毒株,ND99属于缓发型毒株。将2株分离株ND98、ND99与参考毒株F48E8、Lasota进行十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质转移印迹(Western-Blotting)。SDS-PAGE结果显示,ND98、ND99与F48E8、Lasota具有相似的结构蛋白：HN蛋白、F蛋白、NP蛋白与P蛋白、M蛋白;Western-Blotting试验显示,ND98与F48E8、ND99与Lasota具有相似的免疫原,ND98、ND99免疫原性存在一定的差异。     

贵州省禽流感免疫抗体监测结果分析

为切实了解贵州省禽流感的免疫接种效果,采用HI试验对全省3个地区种禽场、8个地区规模养殖场、4个地区农村散养户和2个地区活禽市场送检的17 616份血清样本进行禽流感抗体水平检测。结果表明:全省禽流感免疫抗体的平均合格率为75.7%(13338/17616),达到农业部的要求。其中种禽场禽流感免疫抗体的平均合格率为74.2%(1211/1632),规模养殖场为83.9%(10528/12552),农村散养户为57.6%(1434/2489),活禽市场为17.5%(165/943),免疫抗体合格率的总体趋势为规模场>种禽场>散养户>活禽市场。     

山羊传染性胸膜肺炎继发流产病例的诊断

为对贵州省某规模养羊场临床表现咳嗽、消瘦及流产症状病死山羊进行病因确定性诊断,采用分子生物学方法对病死山羊进行山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)病原与山羊流产衣原体核酸检测。结果表明,从病死母羊肺组织中检测到绵羊肺炎支原体(Mo)核酸,未检测到丝状支原体山羊亚种(Mmc)核酸,病死母羊子宫组织中山羊流产衣原体检测均为阴性,病例确诊为CCPP。序列分析显示Mo感染可能与流产症状有关。研究结果将为贵州省预控此类疫病流行暴发提供技术支持。