山羊源产单核细胞李斯特菌的分离与鉴定

从贵州省盘县某养羊场病例组织样本中分离出1株疑似产单核细胞李斯特菌(Lm)。通过革兰染色、生化鉴定、PCR扩增hly基因、克隆、测序、序列分析及药敏试验等方法对可疑菌株进行分析鉴定。结果显示,该分离菌的培养特性、菌落形态、菌体形状特征、生理生化特征均与文献报道的产单核细胞李斯特菌相同,并从该分离菌株基因组中扩增到大小约850bp的Lm的特异性DNA片段,其序列与GenBank中其他Lm地方株核苷酸同源性在39.1%~99.7%之间,其中与从发病动物分离到的加拿大、瑞士参考株同源性最高,均达到99.7%,与其他途径分离到的参考菌株同源性都很低,分子水平上进一步证实分离菌株为产单核细胞李斯特菌,且从不同途径分离的地方株hly基因差异大。研究结果为本病临床防控与治疗提供理论依据。     

基于测序技术的贵州主要品种羊TLR2基因多态性分析

为了解贵州省不同品种羊TLR2基因序列的多态性特征,本研究以不同品种羊血液DNA为模板,对TLR2基因完整ORF进行PCR扩增、测序及序列分析。结果显示,5种羊TLR2基因扩增长度均为2 355 bp。对贵州黑山羊、黔北麻羊、贵州白山羊、波尔山羊和湖羊5种羊TLR2基因进行种内比对结果显示,贵州黑山羊、黔北麻羊、波尔山羊种内TLR2基因序列保守,贵州白山羊种内A1732T位点存在多态性,湖羊种内在G1133A、T1162G、A1949G等位点存在基因多态性;种间比对结果显示,4种山羊有16个核苷酸位点存在多态性,其中有10个错义突变。4种山羊与湖羊进行比对结果显示,湖羊存在较多的多态性位点,其中有11处位点的差异导致氨基酸的变化。蛋白质结构预测分析显示,不同品种羊TLR2基因呈现的错义突变位点引起了其蛋白质二级结构和三级结构的变化,提示可能存在TLR2参与免疫相关信号通路水平的变化。本研究填补了贵州地方山羊品种TLR2基因多态性空白,为探究TLR多态性与羊疫病易感性关系提供基础研究资料。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp10基因的克隆及序列分析

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒 BJ-4序列,选择Nsp10基因保守区域设计并合成特异性引物,用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州地方株(命名为JL株)Nsp10基因片段,克隆到pMD18-T载体并测序,应用DNASTAR、Clustal_1.81和Mega序列分析软件进行同源性比较.结果表明:贵州JL株Nsp10基因的cDNA长699 bp,可编码233 个氨基酸;贵州JL株Nsp10基因与早期分离毒株MLV株、BJ-4株、VR-2332株、CH-1a株、CH2002株和GS2004株相应序列的核苷酸同源性为 91.7%～94.0%,氨基酸同源性为97.4%～98.7%;而与最近分离毒株HN2007株、SX2007株、GD2007株、YN2008株、GS2008株、XL2008株、TJ株和JXA1株的核苷酸同源性为 98.3%～98.6%,氨基酸同源性为 99.6%～100%.     

贵州省影响羊口蹄疫和小反刍免疫效果分析

为研究贵州省不同地区、养殖方式、海拔和温度对羊A、O、Asia I型FMD和PPR免疫抗体阳性率的影响。采用酶联免疫吸附实验对2015～2020年本实验室收集的贵州省9个市（州）515个养殖场的羊血清（共计8869份）进行上述疫病的免疫抗体检测,并对检测结果使用易侕统计软件和R语言进行分析。统计结果表明：羊A、O、Asia I型FMD和PPR的免疫抗体平均阳性率分别为42.57%、87.99%、73.64%和64.45%。R语言分析结果表明：羊A、O、Asia I型FMD和PPR免疫抗体阳性率在贵州省的不同地区中差异不显著（P>0.05）;不同养殖方式对羊A、O、Asia I型FMD和PPR的免疫效果影响差异不显著（P>0.05）;不同海拔对羊A、O、Asia I型FMD和PPR的免疫效果影响差异不显著（P>0.05）;不同温度对羊A、O型FMD的免疫效果影响差异极显著（P<0.01)。结果提示,贵州省羊O、Asia I型FMD免疫抗体阳性率达到国家农业部动物疫病监测合格要求,羊A型FMD与PPR免疫抗体阳性率未达到国家农业部动物疫病监测合格要求;温度对羊A、O...     

山羊痘口服疫苗免疫后对其瘤胃中主要细菌含量的影响

为弄清山羊痘口服疫苗免疫后对山羊的安全性,采用实时定量PCR方法,对山羊免疫后瘤胃中主要细菌的含量进行了测定。结果表明:口服疫苗组山羊瘤胃中白色瘤胃球菌、产琥珀酸丝状杆菌和黄化瘤胃球菌3种纤维分解菌在30d前会产生一定程度的变化,但30d后,瘤胃中的3种纤维分解菌的含量变化与空白对照组差异不显著,口服疫苗未造成瘤胃微生态紊乱,具有较好的安全性。     

复合益生菌制剂对哺乳仔猪生长性能和免疫水平的影响研究

本试验旨在研究干酪乳酸菌、酿酒酵母菌和枯草芽孢杆菌3者组合的复合益生菌制剂对哺乳仔猪临床应用的效果。试验选取40头新生哺乳仔猪平均分为对照组和试验组,分别于7日龄、14日龄和21日龄前腔静脉采血用于检测血液生理生化指标,21日龄每组选取1头仔猪进行解剖,取其小肠经处理测定其肠黏膜SIgA水平。试验结果表明,复合益生菌制剂能显著提高哺乳仔猪的平均日增重(P0.05),降低哺乳仔猪腹泻率(P0.01);增加仔猪血液中白细胞数量、红细胞数量、血红蛋白含量(P0.01)和淋巴细胞(P0.05);试验组仔猪血清LDH、ALP和TP含量均极显著高于对照组(P0.01),ALT、AST和血清BUN含量均显著高于对照组(P0.05);增加IL-6、IL-1β和TNF-α分泌量(P0.05);提高十二指肠、盲肠黏膜SIgA水平(P0.05)和空肠黏膜SIgA水平(P0.01)。研究提示干酪乳酸菌、酿酒酵母菌和枯草芽孢杆菌组成的复合益生菌制剂能够提高哺乳仔猪的生长性能和免疫水平。     

贵州省猪传染性萎缩性鼻炎的调查

在2003年6月～2005年7月期间,对贵阳市6个养猪场的猪群进行了调查,猪传染性萎缩性鼻炎的临床发病率平均达到12.1%(196/1617);采用乳胶凝集试验检测不同年龄猪群的血清样本,血清抗体阳性率平均达到42.8%(12/28);从临床上表现流涕、打喷嚏、鼻梁变形和鼻甲骨萎缩的病猪采集鼻拭子分离支气管败血波氏杆菌(Bb)和多杀性巴氏杆菌(Pm),Bb的检出率平均达到64.0%(16/25),Pm的检出率平均达到20.0%(5/25)。本次调查从流行病学、血清学和病原细菌学3个方面证实了贵阳市的猪群中存在猪传染性萎缩性鼻炎。     

人工感染雏鸭体内DEV强毒的荧光定量PCR检测

将鸭肠炎病毒(DEV)强毒GZ株经腿部肌肉注射感染15日龄雏鸭后,应用建立的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR方法检测病毒在雏鸭体内各组织的动态分布。结果显示,感染后3 h即可在肝、脾、脑、胸腺、肾和肺6种组织中检出病毒核酸;感染后6 h,除上述组织外还可在十二指肠和盲肠检测到;感染后10 h又可在胸肌和心肌等检测到。不同受检组织病毒核酸检出量有所不同,由高到低依次为脑、肝、脾、胸腺、肾、十二指肠、盲肠、肺、胸肌和心肌。为阐明DEV的致病机理提供了重要的试验数据。     

口蹄疫荧光抗体的制备与应用

用猪抗口蹄疫病毒IgG制备荧光抗体,检测口蹄疫病毒感染BHK-21细胞中的病毒抗原,结果表明,该方法可以检出口蹄疫病毒感染BHK-21细胞中的病毒抗原,荧光抗体的工作浓度确定为1：40,且这种荧光能被FMDV阳性血清特异性地抑制。用制备的荧光抗体检测感染口蹄疫病毒CS株和LB株的BHK～21细胞抹片和飞片,结果均为阳性,空白对照均为阴性。对于低代次的分离毒,即使感染细胞产生明显的CPE,采用反向间接血凝试验也不能检出收获细胞液中的病毒抗原,本试验弥补了这一缺陷。采用直接荧光抗体法可确定病毒在感染细胞中增殖的位置,可作为兽医临床诊断方法之一。