基于PEDV M基因RT-LAMP快速检测方法的建立与应用

为建立一种快速、灵敏、方便的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)早期诊断方法,本研究针对PEDV的M基因片段设计了4条引物,对反应体系的时间、温度进行了优化,对试验的特异性和敏感性进行了评估,初步建立了逆转录环介导恒温扩增技术(RT-LAMP)。结果表明,建立的PEDV RT-LAMP方法在65℃恒温下扩增60min,可通过琼脂糖凝胶电泳或SYBR Green I染料肉眼判断结果,灵敏性较普通RT-PCR高100倍。该方法与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)等无交叉反应,具有良好的特异性。采用该RT-LAMP对100份临床疑似发病粪便拭子、小肠组织、初乳样本进行检测,结果较RT-PCR更灵敏。因此,本研究初步建立了可用于临床PEDV检测的RT-LAMP检测方法,为PEDV的临床快速诊断和综合防控提供了一种新的手段。     

动物园人工饲养蓝孔雀营养状况分析

以蓝孔雀为研究对象,用常规养分分析方法测定对其人工投喂食物中的粗蛋白（cp）、粗脂肪（EE）、粗灰分（Ash）、钙（Ca）和磷（P）等主要营养成分,参考营养需要量对其进行群体营养状况评价。结果表明：动物园提供的食物中蛋白质、钙、磷等养分均不能满足其在生长、繁殖、产蛋期的营养需要,动物园应适当调整孔雀在不同生理阶段、不同季节的营养配比,以改善孔雀的营养状况。     

原鸡不同组合F_1代肉质性状及营养成分研究

以原鸡滇南亚种(♂)与原鸡(♀)、临沧茶花鸡(♀)、绿耳乌骨鸡(♀)、楚雄麻鸡(♀)不同组合F1代为研究素材,分析比较了其常规肉质性状和基本营养成分。结果表明:原鸡杂交F1代胸、腿肌pH值显著低于原鸡纯种F1代(P<0.05),宰后24h均呈下降趋势,纯种F1代下降最为明显;胸、腿肌系水力、滴水损失率、蒸煮损失率、肌纤维直径(密度)等指标在各组间差异显著(P<0.05)。就营养成分而言,胸、腿肌水分含量及胸肌粗蛋白含量在各组间差异均不显著(P>0.05),腿肌粗蛋白含量在各组间差异显著(P<0.05);胸肌及腿肌的粗脂肪、粗灰分含量也均有显著差异(P<0.05)。总体而言,原鸡(♂)与临沧茶花鸡(♀)肉质特性杂种优势较大,与楚雄麻鸡(♀)杂种优势较小。通过了解原鸡与家鸡杂交后代肉质特性,将对野生原鸡的保种、开发利用和家鸡的杂交改良、选育实践具有实际意义。     

滇南亚种原鸡与家鸡蛋品质及体型指数分析研究

主要研究比较滇南亚种原鸡与家鸡品种的蛋品质和分析体尺及体型指数差异,为开发利用原鸡与家鸡品种改良奠定基础。结果显示,原鸡新鲜蛋黄比例显著高于绿耳乌骨鸡、茶花鸡及傣族鸡等地方品种(P<0.05),极显著高于海兰褐(P<0.01);蛋白比例显著低于地方品种(P<0.05),极显著低于海兰褐(P<0.01);蛋重也极显著低于家鸡品种(P<0.01)。随蛋存放时间延长,蛋比重、蛋白比例呈下降趋势,蛋黄比例呈增加趋势、原鸡表现尤为明显。家鸡品种体尺、体型指数与原鸡差异明显,其中原鸡体斜长与胸宽显著低于傣族鸡、绿耳乌骨鸡(P<0.05),与茶花鸡差异不显著(P>0.05);胸深、胸围、髋宽及胫长显著低于茶花鸡、傣族鸡及绿耳乌骨鸡等家鸡品种(P<0.05);胸骨长显著仅低于绿耳乌骨鸡、茶花鸡(P<0.05),与傣族鸡差异不显著(P>0.05)。体型指数较家鸡而言,第一胸指数、第二胸指数和髋胸指数略高,其它指数均低于家鸡。     

云南地方鸡种质资源现状与分子研究进展

云南多样化的地理气候条件,形成了丰富的地方鸡种资源,有13个鸡种被列入《中国畜禽遗传资源志》,品质和数量均居全国之首.这些独特地方鸡种是改良培育鸡品种不可缺少的原始遗传素材和宝贵的基因储存.但由于种种原因,云南多种地方鸡种群体数量下降或面临消失,种质资源亟待维系,优良性状开发极大受限.在查阅大量相关研究报道的基础上,综...     

臭参水提物通过miR-3081-3p及靶基因Ubn2对小鼠结肠癌的调控研究

为了探究臭参水提物通过miRNA对小鼠结肠癌的调控效果，试验首先采用高通量测序技术测定结肠癌模型小鼠的结肠组织中miRNA表达水平，通过GO注释分析和KEGG富集分析对差异表达miRNA进行功能预测，以筛选出的表达差异较显著且尚无相关报道的miR-3081-3p为研究对象并预测其靶基因；然后在NIH-3T3细胞中转染miR-3081-3p模拟物(mimics)并添加臭参水提物进行孵育，通过Western-blot检测其靶基因的表达水平，并利用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果表明：在结肠癌模型小鼠的结肠组织中共发现117个显著差异表达的miRNA,其靶基因主要富集在肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)、Ras、泛素化及NF-κB等信号通路中；其中miR-3081-3p在结肠癌模型小鼠中表达量显著下降54%,其靶基因Ubn2表达量显著上升(P<0.05);在NIH-3T3细胞中，臭参水提物孵育和转染miR-3081-3p模拟物(mimics)均可以提高miR-3081-3p的表达量并降低靶基因Ubn2的表达量，还可降低NIH-3T3细胞凋亡水平。说明臭参...     

VPS28通过泛素化信号通路调控奶牛乳腺上皮细胞中乳蛋白的合成

旨在分析VPS28基因调控乳蛋白合成的分子机制，为奶牛泌乳性状的分子育种奠定理论基础。本研究首先利用RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术敲降奶牛原代乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells，BMECs）中VPS28基因的表达水平，检测与乳蛋白合成、泛素化-溶酶体和泛素化-蛋白酶体通路相关的11个基因、泛素蛋白的表达水平及蛋白酶体活性；然后抑制BMECs中蛋白酶体和溶酶体的活性，检测酪蛋白相关基因、核糖体蛋白的表达水平；最后利用同位素标记相对和绝对定量（isobaric tags for relative and absolute quantification，iTRAQ）比较蛋白质组学分析敲降前后BMECs的差异表达蛋白。结果表明，敲降VPS28基因后，CSN1S1、CSN2、CSN3、RPS8、UBC、PSMC3、PSMC5基因均显著上调，PSMD12显著下调；抑制蛋白酶体后，CSN1S1、CSN2、CSN3显著上调，RPL13显著下调；抑制溶酶体活性后酪蛋白相关基因表达不显著；iTRAQ结果共筛选出129个差异表达蛋白，下调蛋白主要富集在核糖体、溶酶体、剪切体等相关通路，上调蛋白主要富集在内质网的蛋白质加工、加压素调控的水重吸收过程、RNA转运等通路中。研究表明，VPS28基因可通过泛素化信号通路影响BMECs中乳蛋白的合成。