牛分支杆菌Mce4A蛋白对牛肺泡巨噬细胞iNOS、TNF-α、IL-6和IL-12表达的影响

牛分支杆菌侵入巨噬细胞的机制,主要是由哺乳动物细胞侵袭蛋白(Mammalian cell-entry proteins,Mce)介导的,在牛分支杆菌的致病机理中具有重要的作用。为了探讨Mce4A蛋白在牛分支杆菌致病机理中的作用,用不同浓度的重组Mce4A蛋白刺激肺泡巨噬细胞,结果显示,Mce4A蛋白抑制巨噬细胞的活性;用重组Mce4A蛋白、MtbPPD、MbPPD和BCG刺激肺泡巨噬细胞,结果表明,Mce4A蛋白促使肺泡巨噬细胞TNF-α、i NOS和IL-6的表达上调,而对IL-12的表达没有影响。MbPPD和BCG促使肺泡巨噬细胞TNF-α、i NOS、IL-6和IL-12的表达上调;MtbPPD促使肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-6和IL-12的表达上调,但是对i NOS的表达却没有影响。由此可见,Mce4A蛋白能够促使巨噬细胞分泌炎性细胞因子,促使机体发生炎性反应,在宿主细胞免疫应答反应中具有重要的作用。     

长风破浪会有时 直挂云帆济沧海——湖北省森林公安局近10年发展掠影

<正>湖北省森林公安机构始建于1958年。经过近60年的发展壮大,特别是近10年来,在国家林业局森林公安局、省林业厅和省公安厅的正确领导下,全省森林公安围绕生态文明建设大局,大力推进和谐林区建设与队伍自身建设,实现了森林公安工作科学发展、跨越式发展。攻坚克难"三大战役"突破发展瓶颈曾几何时,不少森林公安机关自组建以来就一直是"三无(无正规编制、无正常经费、无办公用房)"机构,怎么看都不像一支正规军,而像一支"游击队"。面对这一困境,湖北省森林公安局开始了向落后宣战的"三大战役"——理顺管理体制、解决人员身份、落实经费保障。     

猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立

将RT—PCR方法和高灵敏度的地高辛检测系统相结合，先建立猪瘟病毒（classicalswinefevervirus，CSFV）的RT—PCR方法，用地高辛标记RT—PCR产物；再建立CSFV的PCR—ELISA方法，用生物素标记的探针在链亲和素包被的微量板孔中杂交捕获地高辛标记的PCR产物，最后进行免疫显色得出结果。试验主要对RT—PCRELISA的各种反应条件进行了优化，确定了1mg／L的链亲和素、50μg／L生物素标记的探针、1：3000抗地高辛的过氧化物酶、37C杂交2h等为最适反应条件。该方法的敏感性比常规琼脂糖凝胶电泳检测高100倍以上，克服了组织样品中CSFV含量少而难以检测的困难，为猪瘟的早期诊断和分子流行病学调查提供了一条新途径。     

绿海龟消化道组织学观察

通过常规组织学切片方法,对绿海龟的消化道进行组织学观察.结果发现除口腔和泄殖腔外,消化道均由黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜层组成.消化道各段的结构差异主要集中在黏膜层和肌层.其中食管黏膜存在特殊的高度角化倒齿结构,而非常见的皱襞,且食管黏膜层下有较发达的纵行骨骼肌.食道的黏膜上皮为复层扁平上皮,胃、小肠和大脑均为单层柱状上皮.除食管外,消化道各殷的肌层均由内环外纵的平滑肌组成,且环形肌均较纵行肌发达.肠道各段黏膜固有层中均有见弥散的淋巴组织.     

一例安德鲁貂尾尖软骨样脊索瘤的组织病理学观察及分析

1例3岁雄性家养安德鲁貂,因尾尖有一缓慢生长的肿物而就诊,通过手术完全切除肿物,并对其进行组织病理学检查。结果显示,最后尾椎骨被一个由大的多角形细胞组成的分叶状肿瘤取代,肿瘤细胞的细胞质表现为高度空泡化(physaliferous cells),并可见胞质内PAS(Periodic Acid-Schiff)染色阳性颗粒。免疫组织化学显示细胞质对细胞角蛋白(cytokeratin, CK)和波形蛋白(vimentin)以及中枢神经特异蛋白(S-100)呈阳性。组织形态学特征和免疫组化结果与人的软骨样脊索瘤一致。本文描述了该病例的组织形态学特征和免疫组织化学结果,并回顾相关文献资料,可以为该肿瘤的诊疗和预后提供参考依据。     

牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白4A(Mce4A)的原核表达、纯化及其圆二色谱分析

将牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白4A(Mammalian cell-entry protein 4A,Mce4A)基因克隆至原核表达载体pET30a( )中,得到重组表达载体pET30-mce4A,转入宿主菌BL21(DE3)中,获得大量表达,表达量占菌体蛋白总量的52%,大小约为43 Ku。经Ni-NTA琼脂糖亲和层析获得Mce4A重组蛋白;圆二色谱(CD)测定结果表明,Mce4A重组蛋白α螺旋含量为31.1%,β-折叠含量为0%,无规卷曲含量为61.0%,转角含量为7.9%。为进一步开展牛分枝杆菌致病机理的研究和寻找新的药物作用靶位点奠定了基础。     

大鼠睾丸支持细胞体外培养及FSH对其增殖的影响

为探索睾丸支持细胞体外纯化培养的方法,并观察不同水平FSH对支持细胞增殖能力的影响,本研究采用胶原酶Ⅰ和胰蛋白酶序贯两步消化法和低渗处理法分离、纯化睾丸支持细胞,Fas-L免疫荧光法对纯化后的支持细胞进行鉴定。取培养第2代第2天已完全贴壁的支持细胞,在其培养液中添加不同浓度FSH,培养16 h后,MTT法检测FSH对支持细胞增殖能力的影响。结果表明,该方法培养的支持细胞纯度高,且FSH的添加可显著促进支持细胞的增殖(P<0.01),为支持细胞高效制备提供可行性。     

牛结核分枝杆菌Mce4E蛋白对牛肺泡巨噬细胞iNOs、TNF-α、IL-6和IL-12表达的影响

探讨Mce4E蛋白在牛结核分枝杆菌致病机理中的作用。以Mce4E蛋白刺激肺泡巨噬细胞24和48h后,MTT检测分析表明,Mce4E蛋白对巨噬细胞的活性有显著的抑制作用(P<0.05);用重组表达的Mce4E蛋白、人分枝杆菌纯化蛋白衍生物(Purified Protein Derivative of M.tuberculosis,MtbPPD)、牛结核分枝杆菌纯化蛋白衍生物(Purified Protein Derivative of M.bovis,MbPPD)、卡介苗(Bacille Calmette Guerin,BCG)和刀豆蛋白A(con-canavalin A,ConA)分别刺激肺泡巨噬细胞48h后,real-time PCR方法检测显示,Mce4E蛋白能够促使牛肺泡巨噬细胞TNF-α和IL-6 mRNA的表达上调(P<0.05)、抑制肺泡巨噬细胞iNO的mRNA表达(P<0.05)而对IL-12表达没有影响(P>0.05)。Mce4蛋白能够促使肺泡巨噬细胞分泌炎性细胞因子,并对肺泡巨噬细胞有抑制作用,证实Mce4蛋白在分枝杆菌中具有重要的作用。     

犬乳腺硬化性腺病的病理学观察

乳腺硬化性腺病(selerosing adenosisoma)指终末导管小叶单位发生的特异性增生性病变[1],是乳腺增生症的一种,在乳腺疾病中发病率较低,主要表现为纤维间质和腺体均增生[2]。2010年本实验室接诊2例犬乳腺硬化性腺病,报告如下。1材料与方法病料来自1只6岁的已绝育雌性松狮犬,左侧第4乳腺肿块直径约1cm,左侧第5乳腺肿块直径约3cm,渐进性增大,增生约半年;右侧第5乳腺有     

TNF-α在IFN-γ诱导的感染牛分枝杆菌的THP-1细胞凋亡过程中的作用及相关信号通路分析

为研究IFN-γ对感染牛分枝杆菌的THP-1细胞的促凋亡作用,及TNF-α在此细胞凋亡过程中的作用和相关信号分子的变化,使用浓度为15 ng.mL-1的IFN-γ作用于不同剂量牛分枝杆菌北京株(MOI10∶1,20∶1)感染的THP-1细胞,在感染后12、24、36、48和72 h,使用流式细胞仪测定细胞凋亡百分比。结果显示,IFN-γ诱导了M.bovis北京株感染的细胞凋亡,并且凋亡呈时间相关性。随着细胞凋亡百分比的增加,牛分枝杆菌的CFU降低。在IFN-γ和M.bovis北京株(MOI10∶1)处理的巨噬细胞内加入抗TNF-α单克隆抗体,感染后36 h,细胞凋亡百分比测定结果显示,加入抗TNF-α单抗抑制了IFN-γ诱导的M.bovis感染的THP-1细胞的凋亡,与对照组相比,差异显著(P0.05);用分光光度计检测表明Caspase-3和Caspase-8的激活是TNF-α依赖性的。在IFN-γ和M.bovis北京株(MOI10∶1)作用的THP-1细胞内分别加入JNKinhibitor I或NEMO-Binding Domain BindingPeptide,或同时加入2种抑制剂,36 h后测定细胞凋亡情况,与对照组相比,加入抑制剂后,细胞凋亡无显著差异(P0.05),说明在本试验中,JNK通路和NF-κB凋亡通路未被激活。本研究初步阐明了TNF-α在IFN-γ诱导的感染牛分枝杆菌的细胞凋亡过程中的作用及相关信号通路。