鸡新城疫病毒荧光双链引物实时荧光PCR检测方法的研究

根据鸡新城疫F糖蛋白的保守基因序列,设计一对正引物。根据正引物设计一对与之相互补的负引物。正引物的5’端标记FAM,负引物的3’标记淬灭剂DABCYL。反应体系中进行引物杂交后,由于正、负引物完全互补,FAM产生的荧光被标记在负引物上的DAB-CYL淬灭掉。然后利用杂交后生成的荧光双引物对鸡新城疫及AIVI、LTVI、BV四种病毒和MG进行了实时荧光PCR检测。结果表明,只有以鸡新城疫标准毒株的克隆质粒为模板的管中能够检测到荧光信号,其他管中没有信号产生。该方法特异性强,灵敏度高,重复性好,在鸡新城疫临床诊断和出入境检疫中有着广阔的应用前景。     

应用核酸探针检查种公牛精液与鼻拭子中IBR病毒

牛传染性鼻气管炎(IBR)是由疱疹Ⅰ型病毒引起的牛结膜炎,生殖道炎、呼吸道炎、脑膜脑炎等症状的疾病。在西安市疫病普查工作中首次应用核酸探针对种公牛的精液与鼻拭子进行抽样检查,发现5头牛为阳性,其中4头牛的血清学反应也为阳性,可见此病在西安市已开始流行。由于核酸探针方法简单,安全性好,具有较高的特异性和灵敏度,适合于疫病普查工作,现将实验方法与结果简报如下。     

用~(32)P标记RNA5′末端探针检测蓝舌病病毒研究初报

目前世界上报导蓝舌病病毒(BTV)已有24个血清型,各型病毒的毒力不一致。由于蓝舌病病毒的基因序列漂移和基因重配列现象的存在,新的BTV血清型还有不断增加的趋势,这就给蓝舌病的研究和诊断带来了困难。近年来,不少国外学者应用核酸杂交技术来研究蓝舌病各型之间的相关性和进行病毒的检测。不少国家和地区用琼扩及其它血清     

0520微型计算机国际动物疫情汉字数据库的研制

为了促进我国畜牧业的发展,近年来从国外大量地引进优良家畜、家禽和各种经济动物,同时也带入了若干国内不存在的动物疫病。为了防止国外疫病的传入,对进口的动物必须进行严格的检疫。动物疫病相当复杂,危害较大的有二百余种。要对每批进口     

用M_(13)克隆系统建立牛传染性鼻气管炎病毒基因组无性繁殖系

用M_(13)克隆系统对牛传染性鼻气管炎病毒进行克隆,获得14个重组体。用其中9.6kb片段制成的探针,可与IBRV—DNA进行杂交,证实已建立了IBRV基因组的无性繁殖系。 牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)属于疱疹病毒,它的基因组是线性双链DNA,约154kb(千碱基对)。 M_13为丝状雄性特异的大肠杆菌噬菌体,它具有一个单链环状DNA基因组及蛋白外壳,当感染宿主细胞后,单链环状的基团组(ssDNA)转变为双链环状的复制型((?)DNA)。M_(13)DNA经改造已成为有效的克隆载体,并广泛地应用于核酸的序列分析及单链DNA探针。我们采用了M_(13)mp作为克隆载体。改建的M_(13)载体转染JM_(103)细菌后可以产生有活性的β—半乳糖苷酶(Lac~ ),在用IPTG诱生和用X-gal作为酶底物时可以形成蓝色空斑,在Lac DNA的多个单一酶切点序列中插入外源基因,就不能产生有活性的半乳糖苷酶,从而形成透明空斑,可以用这种正性标记挑选重组体。     

通用基因芯片对奶牛乳房炎主要致病茵的检测

应用生物信息学手段和查阅文献资料设计了金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、无乳链球菌、绿脓杆菌、停乳链球菌、乳房链球菌6种奶牛乳房炎主要致病菌的通用引物和金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌的寡核苷酸探针及无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌的特异引物,并用这3种特异引物扩增片段的纯化产物作为这3种链球菌的检测探针。在引物对样品中细菌的相应基因片段扩增的同时进行靶基因的生物素标记,扩增的产物与硝酸纤维素膜上的探针进行杂交,酶联、显色后根据芯片扫描仪的判读结果来确定奶牛乳房炎致病菌感染的种类。结果表明,建立的以16S rDNA为对象的基因芯片技术可以快速的检测出以上6种细菌,整个检测过程需要6h~7h,灵敏度高,特异性好,能快速的对奶牛乳房炎的主要致病菌做出诊断。     

实时荧光PCR方法检测禽病毒病的研究

通用探针是实时荧光PCR探针类的一种,具有高度的特异性和灵敏度,可对样品进行准确的定量分析。本试验主要采用该方法对通用探针检测禽病毒病进行了研究,试验结果显示本方法的特异性、灵敏度和Taq Man探针相近,且具有操作简便、费用低廉等优点。     

基因芯片在奶牛乳房炎主要致病菌检测中的应用

基因芯片是近年来迅速发展的一门生物高新技术,它以其能够快速、高效、大规模地同步检测的功能而得到发展.在奶牛乳房炎主要致病菌的检测中显示出重要的理论和实用价值.本文就基因芯片技术的原因、技术要点以及在奶牛乳房炎检测中的应用作一综述.     

光生物素核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒的研究

用光生物素标记牛传染鼻气管炎病毒(IBRV)基因的9.6kb片段制成探针,能检出10pg的IBRV—DNA,1个TCID_(50)量的病毒和1个TCID_(50)掺毒量的精液,与其它病毒无交叉反应。检测人工感染牛的鼻、眼拭子和病毒分离符合率为84.4％,检测感染细胞与细胞病变符合率达81.7%,两项综合符合率为82.5%,以病毒分离为标准,核酸探针检测的鼻眼拭子特异性为90.9%,灵敏度为71.4%。鼻眼拭子经一代细胞培养增毒后再用核酸探针检测,与病毒分离的符合率达93.8%,特异性和灵敏度均达92.9%。 牛传染性鼻气管炎是由IBRV引起的牛呼吸道炎症、生殖道感染、结膜炎、脑膜脑炎等症状的疾病。此病的诊断通常采用中和试验、ELISA等方法检查感染动物的血清抗体以及病毒分离检测病原。只要病料新鲜,分离病毒并不困难,但从牛精液中分离IBRV,由于精液对细胞有毒性影响,有时不一定能成功。用核酸探针检测病毒基因是一种快速、灵敏、简便的方法,我们采用光生物素标记IBRV基因的9.6kb片段作探针,对IBRV掺毒精液及人工感染牛的鼻、眼拭子进行检测,并与病毒分离进行比较,结果表明核酸探针具有较高的特异性和灵敏度,与病毒分离符合率在8(?)%以上,可与病毒分离互相补充作为病原检测的一种手段。