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堆型艾美球虫广东株3—1E基因的克隆与序列分析 总被引:2,自引:1,他引:2
根据GenBank中登录的堆型艾美球虫3—1E基因序列,设计了3条引物,以广东株堆型艾美球虫裂殖子总RNA为模板,利用反转录一聚合酶链反应(RT—PCR)扩增获得了3—1E基因部分片段,将这一片段克隆至pGEM—TEasy载体中,经PCR、限制性内切酶分析和克隆片段的序列测定、比较,证实了克隆片段的可靠性。序列比较发现,所克隆的基因片段与Eimeria acervulina美国株(US)、E.acervulina QH株3—1E cDNA的核苷酸同源性分别为99.0%和99.2%,推导氨基酸的同源性分别为98.2%和97.6%。 相似文献
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含有鸡体偏嗜性密码子的H5亚型禽流感病毒HA基因的优化构建及其DNA疫苗体外瞬时表达研究 总被引:2,自引:1,他引:2
不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒的密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的表达A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]HA蛋白的基因optiHA5,并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA5,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质粒pCIHA5和pCIoptiHA5分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24~48h293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Westemblot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的基因optiHA5体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因.这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础. 相似文献
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禽流感病毒分离株A/Chicken/Xinjiang/1/96(H14N5)NP基因序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
对RTPCR扩增的禽流感病毒A/Chicken/Xinjiang/1/96(H14N5)分离株核蛋白基因进行了序列分析。结果表明:所克隆的基因包含了全部核蛋白阅读框架,编码区为1494个核苷酸。比较性研究表明,该毒株与A/Malard/Astrakhan(Gurjev)/263/82(H14N5)有很高的同源性,而与人流感病毒株有较大,显示出明显的禽流感病毒特征。 相似文献
66.
禽流感RT-PCR诊断法的建立 总被引:5,自引:0,他引:5
根据禽流感病毒(AIV)A/Chicken/Breslin/1902(H7N7)株的血凝素(HA)基因参考序列设计合成一对H7HA特异引物,并应用SDS-蛋白酶K法提取病毒RNA,建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测AIVRNA的方法。应用此法对鸡胚培养的AIV尿囊液、SPF感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、减蛋综合征病毒(EDS-76V)等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,AIV尿囊液RT-PCR全部阳性,SPF感染鸡粪便87份,RT-PCR检出69份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出11份,电镜检测了23份样品,仅检出2份阳性。非特异性对照样品经RT-PCR检测全部阴性。将AIV感染鸡胚尿囊液作10倍系列连续稀释,可检出稀释度为10-2的病毒尿囊液。RT-PCR最早检出时间为感染后第3天,而琼扩和电镜均是7天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间(只需8小时左右),可从分子水平上对AIV进行早期快速诊断和流行病学调查 相似文献
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禽流感病毒分离株A/Chicken/Xinjiang/1/96(H14N5)NP基因序列 … 总被引:2,自引:0,他引:2
对RT-PCR扩增的禽流感病毒A/Chicken/Xinjiang/1/96(H14N5)分离株核蛋白基因进行了序列分析。结果表明:所克隆的基因包含了全部核蛋白阅读框架,编码区为1494个核革酸,比较性研究表明,该毒株与A/Mallard/Astraknah(Gurjev)/263/82(H14N5)有很高的同源性,而与人流感病毒株有较大,显示出明显的禽流感病毒特征。 相似文献
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2008年全国兽药监察所工作会议的主要任务是:以党的十七大精神为指导,深入贯彻落实科学发展观,全面贯彻中央农村工作会议和全国农业工作会议精神,总结2007年工作,研究部署2008年任务。会议的主题是:树立兽药质量科学监管理念,加强兽药尤其是重大动物疫病疫苗监管,保障现代养殖业健康发展;加强兽药残留监控, 相似文献
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H5亚型高致病性禽流感病毒抗原捕捉ELISA诊断方法的建立 总被引:5,自引:1,他引:4
本研究在已有H5亚型禽流感病毒特异性单抗基础上,建立了以多抗作为包被抗体、单抗作为检测抗体的抗原捕捉ELISA方法。通过对各个反应条件进行优化,获得的最佳工作条件为:羊血清1:1600倍稀释;单抗1:10000稀释;酶标抗体最适工作浓度为1:5000倍稀释;单抗反应时间1.5h;酶标抗体作用时间1.5h。特异性试验和敏感性试验结果表明:该方法具有良好的特异性和敏感性,可用于H5亚型高致病性禽流感病毒的检测。 相似文献
70.
牛流行热病毒结构糖蛋白(G)基因的克隆及鉴定 总被引:2,自引:1,他引:1
牛流行热是由病毒引起的牛和水牛的急性热性传染病。其G蛋白为81kDa的结构糖蛋白,它位于病毒表面并含有中和抗原位点,可使牛产生免疫保护。本研究利用RT-PCR法从牛流热病毒北京血毒JB76H总RNA中,扩增并克隆了其G蛋白基因(1.9Kb)。限制性内切酶酶切分析结果显示,与澳大利亚分离株BB7721差异较大。脱氧核糖核苷酸序列分析表明,该基因与澳大利亚分离株BB7721同源性高达91%。 相似文献