公猪精液PRRSV变异株检测及NSP2、ORF5基因序列分析

用荧光RT-PCR方法从某猪场精液中检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异株(NSP2 1 594～1 680 bp缺失)核酸阳性.提取1份阳性样品病毒核酸测定和分析其NSP2和OBF5全基因序列,结果表明NSP2基因由950个氨基酸组成,与CH-1a、VR-2332等经典PRRSV相比481位缺失1个氨基酸、532～560位连续缺失29个氨基酸,与JXA1、HUN4等毒株具有相同的缺失特性;ORF5基因第13、151位为具有强毒特性的精氨酸(R),存在4个潜在的糖基化位点,分别位于30～32、35～37、44～46和51～53位氨基酸.遗传进化分析表明,测定序列与JX-A1、HUN4等毒株关系最近,与CH-1a、NVSL等同属一个大分支,而与BJ-4、P129、RespPRRS MLV、VR-2332等处于不同分支.研究证实公猪精液可携带PRRSV变异株,因此猪场(群)在人工授精和引进精液时必须强化检疫和生物安全措施.     

含LacZ重组逆转录病毒的制备及其在NIH3T3细胞的表达

构建了含有3．7kbLacZ的重组逆转录病毒载体,转染包装细胞系PA317后,经G418筛选,得到了G418的抗性的产毒细胞系,用收获的含有重组逆转录病毒粒子的浓缩病毒上清,感染NIH3T3细胞。经X-gal染色检测,发现表达了LacZ的NIH3T3细胞呈蓝色。     

流感病毒M2基因变异与盐酸金刚烷胺耐药性的关系

盐酸金刚烷胺是治疗流感的常用药物,但流感病毒极易产生耐药性并发生变异.本文仅就使用盐酸金刚烷胺后流感病毒M2基因的变异情况作一综述.     

禽流感病毒A/PFV/Restock/34(H7N1)HA基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV／Restock／1／34（H7N1）1．7kbHA基因的cDNA，将其克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后，亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis，筛选到重组质粒命名为pBlueBacHisH7HA，测序正确后与线性化的杆状病毒DNA（Bac-N-Blue^TMDNA）共转染sf9昆虫细胞，挑取蓝色蚀斑，经三轮蚀斑纯化，获得数株重组杆状病毒rpBlueHisH7HA。提取重组病毒DNA，经PCR证明目的基因片段已插入到杆状病毒基因组中，血凝实验、SDS-PAGE和Western blot实验结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得了表达。     

堆型艾美球虫3-1E基因在大肠杆菌中的可溶性表达及鉴定

将堆型艾美球虫（E．acervulina）3-1E基因克隆至pET-32a（＋）载体中。转化大肠杆菌BL21，在37℃下，用终浓度为1.0mmol／L的IPTG诱导表达，得到相对分子质量约为38500的重组蛋白。Western blot检测证实，该重组蛋白可以与特异性抗血清结合。在20℃条件下，以终浓度分别为2．0、1．0、0．5mmol／L的IPTG进行诱导．当IPTG终浓度为0．5mmol／L时，以可溶性形式存在的目的蛋白含量最高。     

禽流感病毒人工感染鸡抗体的监测及血凝素分型血清的制备

从英国中心兽医实验室（ＣＶＬ）引进禽流感病毒１４种血凝素亚型（Ｈ１～Ｈ１４）的标准毒株,经９～１１日龄的ＳＰＦ鸡胚增殖、传代后收取感染鸡胚的羊水及尿囊液,经１０００ｘｇ离心１５分钟后,收取上清作为免疫原。取８只１２周龄ＳＰＦ鸡分成Ａ、Ｂ两组,进行人工感染鸡的抗体消长规律试验。选用Ｈ３毒株制备的免疫原,按１ｍｌ／只的剂量翅静脉接种Ａ、Ｂ两组的８只ＳＰＦ鸡,１周后Ｂ组的４只鸡复免一次,分别用ＨＩ和ＡＧＰ试验测定２种方法免疫鸡的抗体水平．监测结果表明：经１次免疫的鸡（Ａ组）于免疫后１５天ＨＩ抗体升至最高,以后抗体逐渐下降,且产生的抗体个体差异不大,ＡＧＰ试验结果只有于免疫后２０～５５天内全部为阴性;经重复免疫的鸡（Ｂ组）,于初免后１５～４５天内ＨＩ抗体都维持较高水平,且产生的抗体个体差异不大,ＡＧＰ试验结果在初免疫后１５７５天内全部为阳性。据此,我们根据禽流感病毒株毒力的强弱（参照其ＥＩＤ５０,用纯化后的鸡胚尿囊液制备的免疫原,按０５～２５ｍｌ／只的剂量分别免疫１２周龄ＳＰＦ鸡,１周后加强免疫一次于二免后１０～１５天放血,制备出禽流感病毒１４个血凝素亚型的分型血清,并有霍乱滤液（ＲＤＥ）法对血清进行了处理。     

禽流感RT—PCR诊断法的建立

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法,应用此法对鸡胚培养ＡＩＶ尿囊液,ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩莠试验和电镜技术作了对比,特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）,传染性氏囊病病毒（ＩＢＤ     

禽流感与养禽业发展and人类健康

禽流行性感冒 (简称禽流感， Avian Influenza,AI)被国际兽疫局定为 A类传染病，同时被列入国际生物武器公约动物类传染病名单，是由 A型流感病毒引起的禽类的烈性传染病，可表现为亚临诊到轻度的呼吸系统疾病、产蛋下降到急性致死性疾病等多种形式。在禽流感发现后的一百多年中，世界各地都有特定毒株引起的禽流感暴发和流行，造成了巨大经济损失。禽流感在我国鸡群出现的时间虽短，但已经并正在给我国养禽业造成巨大经济损失，很可能成为下个世纪威胁我国养禽业的头号大敌。禽流感历来被认为是人流感病毒发生变异的新基因来源， 1997年…     

充分发挥最美乡村动物防疫员的引领示范作用

今天的座谈会主题突出、形式新、效果好。通过大家的发言,我真切感受到了我们乡村动物防疫员工作的艰辛,正所谓＂上头千条线,下面一根针＂。对你们任劳任怨、扎根基层、勤奋工作、默默奉献的精神,由衷地敬佩。     

表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护性研究

以脂质体转染技术构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因的重组鸡痘病毒ＦＰＶ－ＶＰ２，该病毒在鸡胚成纤维细胞及鸡体内均能稳定产生子代病毒，经翅皮下５×１０５ＰＦＵ／羽免疫１日龄ＳＰＦ鸡，免疫后４周以１００ＬＤ５０／羽ＩＢＤＶ超强毒株Ｇ株攻毒，获得了５／６的保护，但不能有效预防临床发病及法氏囊受损萎缩。实验结果证明了ＶＰ２是ＩＢＤＶ的宿主保护性抗原，提示Ｔ细胞介导的免疫可能在ＩＢＤＶ的免疫中起着较为重要的作用。本研究为ＩＢＤＶ重组病毒疫苗研制进行了有益探索。