用重组核衣壳蛋白ELISA检测PRRSV抗体的研究

ＰＲＲＳＶ重组Ｎ蛋白ＥＬＩＳＡ检测人工感染猪血清７５份,与ＩＤＥＸＸ公司ＥＬＩＳＡ试剂盒及ＩＦＡ的符合率分别为９７．３％和１００％。检测疫苗免疫猪血清,阳性率１００％。在免疫后６ｄ就能检出抗体,比ＩＦＡ敏感。检测８５份我国田间猪血清,阳性率１８．８％。     

PRRS ELISA试剂盒检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的应用

利用重组杆状病毒表达的PRRSV核衣壳蛋白作抗原制成ELISA诊断试剂盒，检测人工感染PRRSV猪血清、疫苗免疫抗体和田间血清，并与IDEXX公司生产的试剂盒进行比较。结果表明，该试剂盒在PRRSV感染后8天内就可检出感染性抗体，而用IDEXX公司生产的试剂盒在感染后的18天才检测到感染性抗体，对弱毒疫苗的免疫检测也基本能反映出疫苗的免疫应答状况。对华东地区PRRSV流行病学调查结果表明，PRRSV在国内普遍存在，同时也证明研制的试剂盒，是客观科学调查我国PRRS流行情较理想的检测工具。     

牛布氏杆菌病热酚法脂多糖抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)的研究

采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的热酚法提取的脂多糖(LPS)作为抗原，建立了牛布氏杆菌病的ELISA方法，对45份血清进行检测，证明本ELISA方法灵敏性较高，经阻断试验和交叉试验，证明特异性较好。同时对建立的ELISA方法进行了改进，使制备的牛布氏杆菌ELISA试验试剂盒能在4℃条件下长期保存，具有良好的稳定性和重复性。     

科学化养猪与环境保护

1养猪业对环境的污染及其危害。养猪业中的污染是由于对其产生的固体废弃物和废水未进行合理处置造成的,其主要污染物氮、磷和病原微生物,其主要影响是对通过污染负荷的贡献导致地表水体的耗氧和富营养化,以及硝酸盐带来的地下水水源的污染,此外,猪粪便发酵后会产生大量的NH3,H2S,粪臭素和CH4等有害气体,也会对畜产品产量、人类健康和空气质量造成影响.     

一株基因VII型新城疫病毒的分离与鉴定

应用一步法RT-PCR技术成功扩增了一株自然分离NDVF基因的重要功能区片段(约500bp)。最后测序结果表明:该分离株F0裂解位点氨基酸序列为NDV强毒株特征性序列(112-R-R-Q-K-R-F117),且具有NDV基因VII型的特征性氨基酸,即101位的K和121位的V。     

实时荧光RT-PCR鉴别小反刍兽疫病毒疫苗株和野毒株

为快速鉴别小反刍兽疫病毒的疫苗株和野毒株,本研究通过分析Gen Bank中已发布的小反刍兽疫病毒全基因组序列,设计了1对通用引物以及疫苗株和野毒株特异性探针各1条,建立了小反刍兽疫病毒鉴别实时荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法对疫苗株和野毒株的检测灵敏度均可以检测至10拷贝/反应,在108至101拷贝/反应之间具有良好的线性关系,扩增效率均接近1。该方法具有良好的特异性,能够区分不同谱系的野毒株株和疫苗株。使用该方法对136份临床疑似样品检测,检出的阳性数量与普通RT-PCR相同,并且测序后的区分结果也相同。本方法的建立为该病的实验室鉴别检测和流行病学调查提供了技术支持。     

白羽肉鸡传染性喉气管炎的防治

<正>一、流行特点急性病毒性传染病,以眼结膜炎、呼吸困难和咳出带血渗出物为特征。传染源:病鸡、康复鸡或接种过疫苗的鸡成为带毒者而长时间排毒(经粪便排毒)。传播途径:主要通过空气传经呼吸道感染,亦可经眼结膜、上部消化道感染。易感动物:各种年龄的鸡都有易感性,主要侵害成年鸡,蛋鸡和土鸡易感。传播迅     

重组酶聚合酶扩增技术在疾病快速检测中的研究进展

重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是近年来开发的核酸扩增技术,在保证灵敏、特异的同时,操作简单、耗时短,能够在常温下10~20分钟内对靶DNA进行扩增,对实验设备、资源的要求低,适用于兽医、食品安全、生物防御、农业等领域的快速诊断。本文介绍了该技术的原理及目前在病毒、细菌、寄生虫等病原检测方面的应用,展望了其现场检测方面的应用前景。     

PPR与RP病毒N蛋白片段的克隆表达与纯化

目的选取PPRV和RPVN蛋白中抗原性较强、氨基酸差异性较大的片段进行重组表达。方法对PPRV和RPVN蛋白中51-175aa、376-525aa蛋白片段基因进行大肠杆菌偏爱密码子优化后人工合成,利用分子生物学技术,将目的基因分别克隆至原核表达载体pET-28a(+)构建重组表达质粒,将重组表达质粒转化至E.coliBL21(DE3),诱导表达并纯化PPRV与RPVN蛋白中51-175aa、376-525aa片段。结果得到了分子量分别约17.8kD、20.6kD的各两段融合蛋白。结论本研究成功表达了PPRV和RPVN蛋白中抗原性较强、氨基酸差异性较大的51-175aa和376-525aa蛋白片段,为制备能区别PPR和RP病毒的特异性单抗提供了抗原。