生物素缺乏可能是肉鸡股骨头坏死的病因

生物素缺乏可能是肉鸡股骨头坏死的病因吴延功杜元钊摘译１９９５年１１月１５～１６日在希腊由５２名专家参加的禽病会上，专家们对给肉鸡饲养带来较大危害的股骨头坏死病（Ｆｅｍｏｒａｌｈｅａｄｎｅｃｒｏｓｉｓ；Ｅｐｉ－ｐｈｙｓｉｏｌｙｓｉｓ）的病因进行了研讨。...     

2010年我国肉鸡疾病流行情况剖析

<正>1回顾三年来肉鸡疾病的流行情况下面的这些统计数据是我们实验室从2007年6月份至2010年6月份的病例检测结果,来源于山东、河南等及周边的几个养殖大省,其中涉及到的肉鸡病例较多,但也有蛋鸡和其他家禽。送到我实验室     

伪狂犬病病毒gE囊膜糖蛋白主要抗原表位区基因的原核表达

参照GenBank上公布的伪狂犬病病毒gE基因序列设计1对引物,通过PCR方法扩增一段包含gE主要抗原表位编码区的564 bp的片段,扩增产物克隆于pMD18-T vector中,酶切后插入原核表达载体pET-32a的T7启动子下游,构建的原核表达质粒pET-gE在大肠杆菌BL21中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示:表达产物分子质量为38 ku,以包涵体的形式存在,表达产物用His亲和层析柱进行纯化。Western blotting分析表明:该蛋白能与标准阳性血清发生特异性反应。结果证明该表达产物具有生物学活性,可作为鉴别诊断的抗原。     

水牛朊蛋白成熟片段基因的克隆与原核表达

【目的】克隆、分析水牛朊蛋白（prion protein，PrP）成熟片段基因，并获取纯化的表达产物。【方法】将应用PCR技术扩增的水牛成熟PrP的核酸序列克隆到表达载体pET-32a，并分析其序列；把阳性克隆质粒pET-32a-BPrP转化表达菌BL21(DE3)，鉴定纯化的表达产物。【结果】水牛朊蛋白成熟片段核酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其他牛科动物的成熟PrP核酸、氨基酸序列间的相似性分别在97.1%和97.2%以上，并且发现水牛成熟PrP有5个重复序列，编码的氨基酸序列其中有2个九肽和3个八肽重复序列。具有较高的表达水平的PrP融合蛋白被纯化后，用Western印迹实验证明该蛋白具有PrP抗原活性。【结论】首次报道了克隆、分析水牛朊蛋白成熟片段基因，发现水牛成熟PrP有5个重复序列，并获得了具PrP抗原活性的水牛成熟PrP融合蛋白。     

单抗介导牛海绵状脑病免疫组化检测方法的建立及其应用

 中国鲁西黄牛重组PrPc成熟蛋白免疫PrPc基因敲除小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术，经免疫组织化学试验筛选出单抗4C11可特异识别牛海绵状脑病标准阳性牛脑样品上PrPSc核心片段。以单抗4C11为核心试剂，建立了单抗介导牛海绵状脑病免疫组织化学检测方法，并已颁布成为中华人民共和国国家标准GB/T19180-2003（牛海绵状脑病诊断技术）。已应用于中国牛海绵状脑病的持续监测，至2002年底共检测了全国各地3344份牛脑样品，结果全为阴性，且每批次所设的阳性对照样品检测结果均呈阳性，与Roche公司单抗6H4检测结果的符合率为100％。     

养殖池塘的污染与修复技术

池塘养鱼是淡水渔业的主要组成部分,我国也是世界上淡水养鱼最早的国家。池塘由于分布广、水体小、人力易于控制,便于采取综合的技术措施进行高度精养,从而大大提高了单位面积产量。同时池塘养鱼具有投资小、见效快、收益高、生产稳定等特点,因此易于广泛开展,为广大人民群众提供了大量鲜活的富含动物蛋白质的鱼类产品。但随着水产养殖业的不断发展,养殖密度不断加大,一味追求高产高效的养殖措施对养殖水环境(尤其是池塘底部环境)造成了很大的污染,破坏了池塘原有的生态平衡,使得池塘水体中的养殖对象长期处于应激状态,导致其生理功能紊乱,…     

小反刍兽疫病毒分离株China/Tib/07辅助质粒及微型基因组的构建和鉴定

本研究旨在构建小反刍兽疫病毒(PPRV)的辅助质粒和微型基因组并验证其功能,为建立PPRV反向遗传操作平台奠定基础.首先构建表达PPRV分离株China/Tib/07的N、P和L蛋白的辅助质粒pCI-N、pCI-P和pCI-L.通过间接免疫荧光试验验证3个辅助质粒转染细胞后的蛋白表达情况,并从mRNA水平上验证蛋白表达的正确性;扩增PPRV基因组两末端序列和eGFP报告基因,三者通过overlap-PCR连接并克隆至转录载体pOL-TV5中构建微型基因组.将构建的微型基因组分别与辅助病毒和3个辅助质粒进行共转染.经鉴定各辅助质粒完全正确,构建的微型基因组不论与辅助病毒还是与3个辅助质粒共转染,报告基因均表达.本试验成功构建了PPRV分离株的表达N、P和L蛋白的3个辅助质粒以及微型基因组,并用微型基因组验证了3个辅助质粒可以作为PPRV反向遗传操作的辅助质粒,为该病毒感染性克隆的构建奠定了基础.     

I类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定

目的本研究旨在构建Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的微型基因组和辅助质粒,为构建病毒拯救体系奠定基础。方法根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的全基因组序列,采用SOE方法将增强绿色荧光蛋白基因(eGFP)插入NDV08-004的3’-Leader和5’-Trailer区域之间后反向插入转录载体pOLTV5中,构建了NDV08-004的微型基因组pLGT-03。将pLGT-03转染辅助病毒NDV08-004感染的表达T7RNA聚合酶BSRT7/5细胞进行功能鉴定。采用RT-PCR将NDV08-004的NP、P和L蛋白基因亚克隆入表达载体pCI-neo中,分别构建了三个辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI-L。通过构建的微型基因组pLGT-03和三个辅助质粒按照一定的比例共转染BSRT7/5细胞来验证辅助质粒的功能。结果微型基因组pLGT-03转染辅助病毒感染的BSRT7/5细胞后可见明显荧光,表明微型基因组构建成功。微型基因组和辅助质粒共转染可见荧光表达,表明三个辅助质粒均具有相应的功能。结论表明微型基因组和辅助质粒均具有相应的功能,为建立NDV08-004的反向遗传操作平台奠定了基础。     

非洲猪瘟研究进展

非洲猪瘟(ASF)是由病毒(ASFV)引起的家猪和野猪的一种高度接触性传染病,所有品种和年龄的猪均易感。家猪感染后出现发热、高病毒血症和出血性病变等典型特征,发病率高,但死亡率因感染毒株和猪品种的不同而有所差异,从5%到100%不等。通常将临床表现分为最急性、急性、亚急性和慢性四种类型,最急性和急性型病死率高,解剖病变与古典猪瘟