单抗捕捉ELISA检测猪附红细胞体血清抗体方法的建立

在制备针对猪附红细胞体病的特异性单克隆抗体的基础上,建立了单抗捕捉快速检测猪附红细胞体病抗体的ELISA方法,并对影响ELISA结果的各项反应条件进行了优化.结果表明,猪附红细胞体腹水单抗的最佳稀释度为1:20 000,猪附红细胞体病抗原工作质量浓度为4.088 mg/L,血清稀释度为1:40,HRP标记的兔抗猪IgG的工作浓度为1:5 000.待检血清和酶标二抗的反应时间均为37℃1 h;底物在室温显色时间为10 min.已建立的ELISA方法与PCR平行检测50份样本,总符合率为92%,表明该方法特异性强、快速、敏感性高.用该法检测了各地采集的171份血清,阳性率为40.4%,与镜检的符合率为59.2%;阴性率为47.4%,与镜检的符合率为66.7%,总符合率为67.3%.     

PPR与RP病毒N蛋白片段的克隆表达与纯化

目的选取PPRV和RPVN蛋白中抗原性较强、氨基酸差异性较大的片段进行重组表达。方法对PPRV和RPVN蛋白中51-175aa、376-525aa蛋白片段基因进行大肠杆菌偏爱密码子优化后人工合成,利用分子生物学技术,将目的基因分别克隆至原核表达载体pET-28a(+)构建重组表达质粒,将重组表达质粒转化至E.coliBL21(DE3),诱导表达并纯化PPRV与RPVN蛋白中51-175aa、376-525aa片段。结果得到了分子量分别约17.8kD、20.6kD的各两段融合蛋白。结论本研究成功表达了PPRV和RPVN蛋白中抗原性较强、氨基酸差异性较大的51-175aa和376-525aa蛋白片段,为制备能区别PPR和RP病毒的特异性单抗提供了抗原。     

非洲猪瘟传入我国危害风险分析

近年来,非洲猪瘟病毒疫情不断向非洲以外的欧洲、美洲国家蔓延,亚洲国家也面临非洲猪瘟侵入的严重威胁,引起各国政府及兽医科技工作者的高度关注。剖析目前该病在全球以及我国周边国家的流行状况,分析该病毒的病原学特点和传播特性,以及传入我国的可能途径,再分析我国对该病的防控现状等因素,认为目前我国存在传入非洲猪瘟的较高风险,需要按照我国既定的新发、突发重大动物疫病防控方案加强对非洲猪瘟的防范。     

施马伦堡病毒感染

施马伦堡病是由施马伦堡病毒(schmallenberg virus,SBV)引起的一种新发现的吸血昆虫传播的动物疾病。该病可引起成年牛发热、腹泻、奶牛产奶量下降,怀孕牛羊感染可引起胎儿畸形、流产或死胎。目前荷兰、比利时、德国西部、法国北部和英国东南部有疫情报道,已有国家严禁从上述出现施马伦堡病毒疫情的国家进口相关动物产品。本文汇总了最新的疫情研究进展,介绍了该病的病原、流行病学和预防控制措施。     

双重实时荧光PCR快速检测猪链球菌2型方法的建立及应用

根据GenBank上公布的MRP与CPS2J的开放性阅读框保守序列,运用BEACON Desigener 2.0软件设计和合成了2对引物和其相应的荧光探针,优化各个反应物的浓度和实时荧光PCR循环程序,建立从组织中直接检测2型链球菌主要毒力因子MRP与CPS2J的实时荧光PCR方法.双重实时荧光PCR检测2型猪链球菌方法能够从病料中直接检测2型猪链球菌并可以检测出该菌的主要毒力基因MRP,运用该方法可以最低检测到24CFU/mL 2型猪链球菌,并且与其他血清型链球菌和其他病原菌无交叉反应.特异性良好.通过对8个样品在3个不同时间的检测.结果显示该方法的稳定性和重复性均很好.     

猪生殖与呼吸综合征油乳剂灭活疫苗的制备及安全性试验

用本中心分离鉴定的猪生殖与呼吸综合征(PRRS)强毒株接种Marc-145细胞，制备病毒抗原液，毒价不低于10^-7.0TCID50／0．1mL。经一定浓度的甲醛溶液灭活后与油佐剂乳化制成油乳剂灭活疫苗3批。经对该制品的安全性能测定，结果表明该品对初生仔猪、断奶仔猪及妊娠母猪3倍剂量注射，均未出现不良反应，安全性良好；对母猪的繁殖性能不产生影响。     

口蹄疫鉴别诊断方法的确认与标化问题探讨

口蹄疫(Foot—and—mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒感染引起的一种急性、热性、高度接触性和可快速远距离传播的动物疫病，动物和动物产品的国际贸易中受到严格限制。FMDV有7个血清型，80多个亚型，型与型之间无交叉保护性，使FMD的预防和诊断更加困难。目前，该病在世界动物卫生组织(OIE)成员国中有三分之二的国家存在本病，由于发病后的巨大影响——引起消费者恐慌和出口受到限制，     

肉鸡感染禽网状内皮组织增殖病的诊断及流行病学分析

禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)引起鸡、鸭、鹅、火鸡及其它禽类的网状内皮组织增殖病(RE),它是以急性网状细胞肿瘤形成、矮小综合征、淋巴组织和其它组织的慢性肿瘤形成为特征的一群病理综合征,由于病毒引起的肿瘤以网状组织增生为特征,因此称为禽网状内皮组织增殖病。     

鹅源新城疫病毒感染鹅的组织学变化研究

自1997年以来,在江苏省苏南、苏北许多地方的鹅群中流行一种以消化道呈糠麸样并有溃疡、胰腺肿胀且表面有灰白色点状坏死灶为特征的具有高度发病率和死亡率的鹅病。目前此病在山东、福建、安徽、浙江、上海、四川、吉林、江苏等全国大部分地区大面积流行,     

PRRSV血清抗体间接ELISA检测方法的建立

用亲和层析纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白GST-N作为诊断抗原,建立检测PRRS血清抗体的间接ELISA方法。抗原最佳包被量为每孔400 ng,待检血清最佳稀释度为1∶100,待检血清样品的D_(490 nm)≥0．43D_(po■) 0．57D_(neg)判为阳性,反之判为阴性。对采自14个猪场的364份猪血清样品进行检测,PRRS阳性率为51．4%,略高于HerdChek ELISA的阳性检出率49．7%。与HerdChek ELISA相比,间接ELISA的敏感性为94．5%,特异性为91．3%,总符合率为92．9%,Youden指数为0．86。同时还证明该方法具有良好的批间和批内重复性,并且不与猪瘟、猪伪狂犬病等阳性血清发生反应。该方法的成功建立将为我国PRRS的防制工作作出贡献。