北京地区奶牛流产发生规律的调查研究

本次试验共调查了北京地区的7个奶牛场在1998-2000年中奶牛的流产情况.结果表明,北京地区的奶牛流产率平均为6.5%,最高达12.3%,且与月份、胎次以及妊娠天数等因素有关.     

热应激中蛋鸡血液和肝脏SOD活性的动态变化

人工气候室中 ,32 0日龄海赛褐蛋鸡 14 4只连续 10d热应激 2 7～ 38℃。用NBT光还原法测定持续高温下血液中红细胞SOD活性 ;用亚硝酸盐形成法测定组织SOD活性。结果表明 :高温组与常温组相比 ,血液中红细胞SOD动态活性降低 ,并维持在一个低于常温组的新水平上 ;肝脏SOD动态活性同时降低 ,其最低值低于常温组 ;肝脏和血液SOD活性呈显著正相关 ,相关系数为γ =0 .6 5。     

连翘酯苷-羟丙基-β-环糊精包合物制备及其特性

针对连翘酯苷稳定性较差,限制了药物制剂制备及临床应用的问题,采用环糊精包合技术研制连翘酯苷注射剂,利用研磨法制备连翘酯苷-羟丙基-β-环糊精包合物.表征分析表明包合物光谱和熔点发生变化,对光稳定性和热加速实验稳定性明显增加.高效液相色谱分析鸡静脉注射给药血药浓度,表明连翘酯苷包合物与连翘酯苷药物动力学差异较小,血液中包合态药物能较快发生脱包合作用.     

鸡源沙门氏菌多重耐药和Ⅰ型整合子的流行调查

为了研究沙门氏菌多重耐药性与Ⅰ型整合子的流行情况,本研究从山东省鸡场分离沙门氏菌,根据Kauffmann-White方法测定其血清型,采用微量稀释法测定了沙门氏菌对19种常用抗菌药物的MIC值,并且采用PCR技术测定了Ⅰ型整合子及其携带的耐药基因盒。结果显示：本次分离得到311株沙门氏菌,包括印地安纳沙门氏菌（133株）和肠炎沙门氏菌（178株）2种血清型;药物敏感性试验表明：分离菌株对磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、萘啶酸、氨苄西林、四环素、多西环素和甲氧苄啶普遍耐药,菌株多重耐药率为91.0 %(283/311),99%的分离株对阿米卡星、多黏菌素敏感;PCR测定Ⅰ型整合子结果：Ⅰ型整合子的检出率为65.0%(202/311),其中多重耐药表型菌株Ⅰ型整合子阳性率为92.6%,202株整合子阳性菌株中有6株的携带基因盒dfr17-aadA5。上述结果表明,Ⅰ型整合子普遍存在于沙门氏菌中,并且与沙门氏菌的多重耐药性密切相关。     

Arkadia表达载体转染肾小管上皮细胞条件的优化

本试验旨在优化泛素化酶Arkadia质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo转染小鼠肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)的条件,为研究Arkadia表达载体在小鼠马兜铃酸肾病(aristolochic acid nephrohathy,AAN)中的作用奠定基础。以小鼠RTECs为转染对象、脂质体Lipofectamine^TM 2000为转染介质,采用Real-time PCR和CCK-8法检测不同的质粒与脂质体比例条件下Arkadia mRNA的表达差异及对细胞活性的影响;同时,用Real-time PCR检测不同的转染时间条件下表达载体对Arkadia mRNA沉默效果的差异。结果显示,Arkadia-pGPU6/GFP/Neo载体的转染效率表现出了一定的剂量和时间依赖性。当质粒DNA∶Lipofectamine^TM 2000为0.66 μg∶2 μL、转染时间为24 h时,对Arkadia mRNA表达的抑制最明显并且对细胞的毒性最小。最终确定了Arkadia-pGPU6/GFP/Neo载体转染小鼠RTECs的最佳条件。     

Arkadia和UCH37表达载体的构建及其对TGF-β1/Smads信号通路的影响

【目的】构建泛素启动酶Arkadia和泛素羧基末端水解酶-5（亦称UCH37）的表达载体,并探讨Smad7蛋白的泛素化修饰对马兜铃酸肾病中TGF-β1/Smads信号通路的影响。【方法】通过观察绿色荧光的表达量及real-time PCR反应优化转染条件,转染Arkadia和UCH37 siRNA,real-time PCR检测mRNA表达抑制率。分别构建Arkadia和UCH37的表达载体pGPU6/GFP/Neo,经鉴定后转染细胞,real-time PCR和Western blotting检测Arkadia、UCH37和Smad7的表达变化。【结果】①30 pmol siRNA和1.5 μL LipofectamineTM 2000为最佳转染条件;②Arkadia-1490和UCH37-721的干扰效果最明显;③载体的插入序列完全正确,且pGPU6/GFP/Neo-Arkadia能上调马兜铃酸肾病模型中Smad7的表达,而pGPU6/GFP/Neo-UCH37使Smad7表达下降。【结论】成功构建了表达载体pGPU6/GFP/Neo-Arkadia和pGPU6/GFP/Neo-UCH37,且Arkadia和UCH37可分别放大、抑制TGF-β1/Smads信号通路。     

鸡传染性支气管炎病毒M41型的扩繁及在鸡胚肾细胞上的适应性研究

探明鸡传染性支气管炎病毒（Avian Infectious Bronchitis Virus,IBV）感染鸡胚肾细胞（Chicken Embry-o Kidney Cells,CEK cell）,并且实现其增殖为目的。将IBV稀释液注射到SPF鸡胚尿囊腔内,培养鸡胚扩繁,观察记录结果;并培养CEK细胞,采用100倍半数组织培养感染量的IBV进行染毒实验;应用Reed-Muench法计算半数鸡胚感染量为10-6.68/0.1 mL;用Real time PCR检测IBV在感染细胞中的含量,以确定IBV在CEKcells中已经感染且增殖成功。结果表明,接种10日龄的SPF鸡胚可以收集更多的、约8 mL的尿囊液毒;反复盲传至7代的IBV可使CEK cells产生明显的细胞病变效应;通过实时荧光定量PCR和RT-PCR检测,最终确定IBV-M41型扩繁成功并且能够在CEK细胞上繁殖,为下一步实验提供了参考。     

Dab2在马兜铃酸肾病小鼠肾脏中的表达变化

本试验旨在研究Dab2蛋白在马兜铃酸肾病（aristolochic acid nephropathy,AAN）小鼠模型中的表达变化。在AAN小鼠模型的基础上,利用免疫组化、荧光定量PCR和Western blotting技术对肾脏中Dab2基因转录水平和蛋白表达水平进行检测。结果显示,随着用药时间的延长,肾脏组织损伤程度加重;Dab2蛋白表达量在第6天先降低（P＞0.05）,在第12天突然升高随后又极显著降低（P＜0.01）,Dab2蛋白表达总体呈上升趋势,Dab2基因转录水平变化趋势与此一致;同时Dab2蛋白的定位也发生了变化,完成了从刷状缘到细胞质,再到细胞核的转移。结果表明Dab2蛋白参与AAN小鼠的发病过程,为进一步研究Dab2蛋白在AAN中的作用奠定理论基础。     

智能化潮汐式灌溉系统的研究

智能化潮汐式灌溉是一种高效、节水、先进的新型灌溉技术,已成为温室花卉种植和蔬菜育苗的重要灌溉方式之一。文章介绍了智能化潮汐式灌溉的原理和应用现状,分析和总结了利用智能设备进行潮汐灌溉条件下水肥利用和植物病虫害2个方面的研究现状,并讨论了智能化潮汐灌溉技术存在的问题和发展趋势。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白刺激小鼠产生抗体的研究

为比较传统免疫、脾内免疫、胶粒免疫和硝酸纤维素膜皮下包埋等4种方法制备的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)核衣壳蛋白抗原免疫小鼠后刺激机体产生特异性抗体的水平,比较不同方法对于特定抗原刺激机体产生免疫应答的影响,筛选一种最有效的能够用于PRRSV核衣壳蛋白多克隆抗体和单克隆抗体制备的免疫方法。用PRRSV核衣壳蛋白作免疫原,分别用传统皮下免疫法、脾内免疫法、胶粒免疫和硝酸纤维素皮下包埋法免疫BABL/c小鼠,间接ELISA检测血清效价,用Western blotting检测其特异性。三免后,常规免疫小鼠血清效价为1.28×105,脾内免疫法为1.28×105,胶粒免疫为3.2×104,NC膜皮下包埋法为6.4×104。结果表明,4种免疫方法均获得了高滴度、高特异性的多克隆抗体,与传统免疫法相比,其他3种方法有其明显的优势,即节省抗原,其中脾内免疫法为优先选用的免疫方法,其免疫效果好,可节省大量抗原和时间。