致狐狸肺炎大肠杆菌血清鉴定与毒力基因检测

为了确定狐狸肺炎源致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)流行血清型与毒力基因的携带情况并分析其相关性,2016—2017年采集河北省部分地区患肺炎死亡的狐狸的肺脏、心血等组织142份中分离到了105株E.coli,且RT-PCR检测犬瘟热病毒为阴性,人工感染小鼠致病性试验结果显示105株分离菌株中77株为致病性E.coli。采用玻片凝集试验和PCR方法分别检测77株致病性E.coli血清型和毒力基因,结果显示:77株致病性E.coli有9种血清型,其中以O1、O8、O78、O12为流行的优势致病血清型,77株致病性E.coli携带14种不同毒力基因,以irp2、fyuA、papC、fimC、iucD^a、colv、hlyF、ompT 8种毒力基因检出率较高,在32.5%～98.7%之间,其余毒力基因检出率较低。狐狸肺炎源致病性E.coli的优势血清型携带的毒力基因较多,至少携带9种毒力基因,流行的优势血清型与毒力基因之间具有一定的相关性。狐狸肺炎源E.coli流行血清型代表株TS(O1)1、QH(O8)2、QH(O78)3、TS(O12)4均对狐狸很强的致病性。本试验为狐狸肺炎源致病性E.coli防控提供了参考依据。     

迟缓爱德华菌FliC-TolC融合蛋白表达及免疫特性研究

鞭毛蛋白FliC与外膜蛋白TolC均具有免疫保护效果,其中FliC蛋白具有疫苗佐剂的特性,但目前尚未有关迟缓爱德华菌(E.tarda)FliC-TolC融合产物免疫动物的免疫效果的相关报道。为研究E.tarda FliC-TolC融合蛋白的免疫特性,本研究利用融合PCR方法扩增获得fliC-tolC片段,构建重组载体pET-28a-fliC-tolC,并利用E.coli BL21表达系统表达了融合蛋白FliC-TolC。将纯化的FliC-TolC、TolC、FliC蛋白免疫小鼠后,以E.tarda强毒株攻毒评估免疫效果;并利用斑马鱼模型进行了平行试验。结果显示,本研究克隆了E.tarda fliC-tolC基因并表达和纯化了相应重组蛋白FliC-TolC;FliC-TolC蛋白激发小鼠产生的抗体水平优于FliC、TolC蛋白单独免疫组,表明FliC-TolC蛋白具有优良的免疫原性。攻毒试验表明FliC-TolC蛋白组小鼠对强毒株可产生较好的抵抗力,相对保护率为95%;斑马鱼攻毒试验相对保护率为60%。本研究证实了E.tarda重组蛋白FliC-TolC的免疫效力,为进一步研制E.tarda亚单位疫苗提供了参考和借鉴。     

中西药联用对嗜水气单胞菌体外抑菌作用研究

为了探讨中西药联用对舌鳎源嗜水气单胞菌的体外抑菌效果,试验采用水提法提取中草药有效成分,用试管二倍稀释法分别测定黄柏、黄芩、知母、连翘、阿米卡星、环丙沙星6种药物对嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),用微量肉汤棋盘稀释法测定中西药联用对嗜水气单胞菌的联合抑菌指数(FIC)。结果表明:这6种药物对舌鳎源嗜水气单胞菌均有不同程度的抑制作用,单独使用时以阿米卡星抑菌效果较好。此外,在8种药物组合中:阿米卡星+黄柏及环丙沙星+黄柏为颉颃作用;阿米卡星+知母及环丙沙星+连翘为无关作用;环丙沙星+知母、阿米卡星+黄芩、阿米卡星+连翘、环丙沙星+黄芩为相加作用。说明中西药联用对由嗜水气单胞菌引起的细菌病具有一定的作用。     

蛋种鸡禽白血病与大肠杆菌病混合感染的诊治

为了确定引起邢台地区某种鸡场饲养的父母代海兰褐、罗曼粉蛋种鸡腹泻、产蛋量下降、突然死亡的病原,对送检的病鸡剖检观察病变,同时无菌采集死亡种鸡的肛拭子、心血、肝脏等组织病料,通过胶体金试纸条法检测新城疫、禽流感(H5N7)、鸡传染性支气管炎的抗原,通过禽白血病p27抗原ELISA检测试剂盒检测禽白血病p27(ALV-p27)抗原,用常规的方法进行细菌的分离、生化鉴定及药敏试验。结果表明:剖检可见发病鸡肝脏、脾脏肿大并出血,肠腔有黏液,个别鸡出现卵黄性腹膜炎等。新城疫、禽流感(H5N7)、鸡传染性支气管炎抗原均为阴性,ALV-p27抗原为阳性,细菌分离及生化鉴定确定感染细菌为大肠杆菌,由此可知该种鸡为禽白血病与大肠杆菌病混合感染。通过K-B药敏纸片法筛选出对大肠杆菌敏感的恩诺沙星、新霉素、阿米卡星等7种抗生素。     

中西药联用对美人鱼发光杆菌的体外抑菌试验

为了探讨中西药联用对美人鱼发光杆菌的体外抑菌效果,试验采用试管二倍稀释法分别测定2种西药(氟苯尼考、阿米卡星)和3种中药(女贞子、黄柏、夏枯草)对美人鱼发光杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),微量肉汤棋盘稀释法测定中西药联用对美人鱼发光杆菌的联合抑菌指数(FIC)。结果表明:这5种药物对美人鱼发光杆菌均有不同程度的抑制作用,且每种药物单独使用时以阿米卡星的抑菌效果最好。在6种药物组合中,氟苯尼考和黄柏组合及阿米卡星和黄柏组合在抑菌方面表现为相加作用;氟苯尼考和夏枯草组合及氟苯尼考和女贞子组合在抑菌方面表现为无关作用;阿米卡星和女贞子组合及阿米卡星和夏枯草组合在抑菌方面表现为颉颃作用。说明中西药联用对美人鱼发光杆菌具有一定程度的抑制作用。     

致水貂出血性肺炎铜绿假单胞菌胞外产物生物活性及免疫保护力分析

胞外产物在细菌致病过程中发挥重要作用,为探索胞外产物在铜绿假单胞菌致病过程中的作用,首先从铜绿假单胞菌培养液提取其出其胞外产物,利用小鼠模型分析其致病性,并通过细胞证实了该产物对巨噬细胞功能的抑制作用,进一步测定其胞外产物的酶活性并利用LC-MSMS方法对铜绿假单胞菌胞外产物蛋白成分和功能进行分析。结果表明,铜绿假单胞菌胞外产物对小鼠有致病性,能够显著抑制巨噬细胞吞噬细菌活性,其具有淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶、卵磷脂酶活性和溶血活性可能在这一过程中发挥关键作用。LC-MSMS分析鉴定所提纯的胞外产物中有153种蛋白成分,涉及多种酶类、细胞结构蛋白和功能性蛋白。用低剂量胞外产物免疫动物对于铜绿假单胞菌感染具有较明显的保护率,可达90%。本试验为揭示铜绿假单胞菌致病机理,研制新型疫苗奠定基础。     

豚鼠源马链球菌兽疫亚种的分离鉴定

为了查明河北省唐山市某豚鼠养殖场发病豚鼠感染的病原菌,本试验采集发病豚鼠的眼角脓性分泌物,采用细菌分离纯化、革兰染色、生化鉴定、16S rRNA基因PCR扩增方法对分离菌进行鉴定,通过K-B试纸法检测分离菌株对24种抗菌药的敏感性,试管二倍稀释法测定19种中药对该分离菌株的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并通过动物回归试验检测该分离菌株的致病性。结果显示,分离菌株在血琼脂培养基培养24 h生长为针尖状透明菌落、呈β溶血,革兰染色为阳性圆球状、3～5个连接呈短链状,生化特性与马链球菌兽疫亚种相符,将其命名为MLQJ-1;16S rRNA序列比对结果显示,MLQJ-1与马链球菌兽疫亚种同源性高达99.72%,在系统进化树中处于同一分支,鉴定为马链球菌兽疫亚种;MLQJ-1对24种抗菌药的敏感性不同,对青霉素、头孢曲松和阿莫西林等8种抗菌药敏感,对阿米卡星、新霉素和卡那霉素等10种抗菌药耐药;苦地丁、苦参、黄芩和千里光对MLQJ-1的MIC值介于1.9～15.6 mg/mL,MBC值介于1.9～31.2 mg/mL;小鼠腹腔接种MLQJ-1菌液后24 h内全部死亡。结果表明,...     

禽腺病毒血清4型QHD2021株的分离鉴定和全基因序列分析

为了解河北秦皇岛地区禽腺病毒血清4型(FAdV-4)分离株的遗传变异情况和致病性,本试验对疑似患FAdV-4病死鸡的肝脏、心脏等组织进行PCR检测,将PCR检测为阳性的组织接种鸡肝癌细胞(LMH)进行病毒分离培养,对纯化后的FAdV-4进行全基因测序,对所得的序列进行同源性和遗传进化分析及致病性试验。结果表明：将PCR检测为FAdV-4阳性的肝脏、心脏匀浆于接种LMH细胞后72 h内出现明显细胞病变,初步确定分离毒株为FADV-4毒株,命名为FAdV-4 QHD2021株。全基因测序结果显示,QHD2021株全基因组全长44 225 bp,共编码14 741个氨基酸。与国外毒株相比短1 500 bp左右,但比国内毒株长约500 bp。同源性和遗传进化分析显示,QHD2021株与国内外FAdV-4流行毒株在同一支,与国内SD1601株的同源性最高,为94.3%。序列比对发现QHD2021株与国内流行株、国外经典株相比均出现1段1 966 bp的碱基缺失,包括ORF19、ORF27和ORF48的缺失。将经LMH细胞纯化的QHD2021株接种21日龄的SPF雏鸡后,可引起心包积液、肝炎等典型...     

鸡源豚鼠气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

2021年7月份，河北省昌黎县某蛋鸡场130日龄左右海兰褐蛋鸡发病，主要临床症状为眼睑肿胀且有干酪样渗出物，肛门粘有绿色稀便，剖检可见腿部肌肉组织溶解和腹腔积液。为了查明感染的病原，试验采集病鸡的眼睑干酪样渗出物、气管黏液、腹腔积液及腿部深层肌肉病变组织，进行细菌的分离纯化、形态学观察、革兰氏染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因PCR鉴定，确定感染病原菌种类；对分离纯化的病原菌采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行抗生素敏感性试验，采用牛津杯法进行22种中草药敏感性试验，同时对22种中草药提取液进行体外最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定；对分离纯化的病原菌进行毒力基因检测，应用Balb/c小鼠进行致病性试验。结果表明：经培养，在绵羊血琼脂培养基上可见边缘整齐、光滑、湿润、呈β溶血的灰色菌落，革兰氏染色可见散在或成对存在的革兰氏阴性短杆菌，与豚鼠气单胞菌形态特征相似，将分离菌株命名为TSQDBJ-1;其生化特性与豚鼠气单胞菌符合率达99%,核苷酸相似性达99.7%;分离菌携带丝氨酸蛋白酶(Ahp)、细胞毒性肠毒素(Act)两种毒力基因；对头孢曲松、乙酰甲喹、头孢噻...     

蛋种鸡源沙门菌分离与生物学特性

为鉴定蛋种鸡源沙门菌生物学特性，本试验采集患病蛋种鸡的肝脏、卵黄、心血等病料组织，通过细菌分离培养、肠杆菌科和其他革兰阴性杆菌的标准鉴定系统(API20E)、PCR等方法进行沙门菌分离鉴定；采用人工感染试验、玻板凝集试验、脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)分别对分离的沙门菌致病性、血清分型、分子分型进行检测。结果显示，分离的12株沙门菌对雏鸡具有致病性；除菌株36未测出血清型外，其余11株沙门菌分离株属于4种血清型，其中菌株C1为O4(B)群无动力沙门菌，菌株C13、C4为鸡沙门菌，菌株C5、C6、C7、C8、C9为病牛沙门菌，菌株C10、C11、C12为肠炎沙门菌；菌株36的PFGE带型不明显，其余11株沙门菌可分为4个不同的PFGE带型，各带型间亲缘关系较远，不同血清型菌株之间的相似度在56%～100%,相同的血清型可能具有聚为1簇的趋势，不同血清型菌株之间具有较高的相似度。本试验结果为进一步分析蛋种鸡源沙门菌及开展分子流行病学溯源提供了科学依据。