转GFP基因核移植牛胚胎的研究

试验采用脂质体转染法与电穿孔法,以携带绿色荧光蛋白（GFP）-新霉抗性（neo-）双标记基因的pMSCV质粒转染胎牛耳成纤维细胞为供体与体外成熟的牛卵母细胞为受体构建克隆胚。研究了体外成熟培养液中添加EGF（表皮生长因子）对转基因胚的影响,不同转染方法构建供体细胞对重构胚发育的影响和在不同体外培养系统中的发育效果。结果显示,体外成熟培养液中添加EGF 30 ng/mL组的卵母细胞成熟率最高,但对后期转基因重构胚的囊胚发育率的影响,以添加EGF 20 ng/mL组的最高;以胎牛耳成纤维细胞为供体细胞,不同转染方法转染供体细胞构建重构胚,其囊胚发育率差异不显著（P>〖JP2〗0.05）;mSOFaa+颗粒细胞单层细胞共培养体系中的转基因囊胚发育率最好,该体系更适合体细胞核移植法生产转基因牛胚胎。     

哺乳动物胚胎干细胞研究进展

胚胎性干细胞包括从动物早期胚胎的卵裂球、囊胚内细胞团细胞分离建系的胚胎干细胞（embryonic stem cell,ESC）、从胚胎生殖嵴原始生殖细胞（primordial germ cell,PGC）分离建系的胚胎生殖细胞（embryonic germ cell,EGC）和来源于畸胎瘤中的胚胎性癌细胞（embryonic carcinoma cell,ECC）。ESC具有发育分化的多潜能性和无限的自我更新能力,能在体外长期培养并具有向机体各种组织细胞分化的潜能。所以,被广泛应用于胚胎发育与细胞分化调控的研究,作为修复器官与器官移植的种子细胞,并可用于转基因动物的生产。作者主要综述了干细胞的最新研究进展,ESC培养扩增诱导机制,定向分化方法。     

莫索湾绿洲的建立与梭梭荒漠的动态研究

本文就古尔班通古特沙漠南缘的梭梭荒漠、在本世纪５０年代后期开发以来发生的变化，分析绿洲形成过程、依存条件及其与荒漠关系，并对绿洲界外区的生态地位、发生原因和其对策进行剖析。     

人Ⅰ型胶原基因脂质体转染牛耳细胞克隆筛选方法

构建连接有人Ⅰ型胶原基因的质粒(PGCl-collagen).利用脂质体介导的方法转染荷斯坦奶牛耳成纤维细胞,优化一系列转染条件以提高转染效率,再利用G418和GFP荧光的表达来筛选稳定转染的细胞,最后以末转染的成纤维细胞作为阴性对照组,PGCl-collagen作为阳性对照组对转染的细胞进行PCR验证.结果显示:在6孔培养板中细胞融合度达到50%～60%左右介导1～3μg重组质粒转染24 h,转染效率可达25%～30%,筛选单克隆细胞在荧光显微镜观察检测到绿色荧光蛋白的表达.在使用800U的G418筛选效果最好,维持浓度300～600U,获得25个稳定表达的阳性细胞系.从中选取6个克隆进行PCR验证.成功利用脂质体转染方法将人I型胶原基因成功转染到荷斯坦奶牛耳成纤维细胞,PCR验证结果正确.     

性控冻精在牛场的使用效果分析

该实验分为两个部分。第一部分为生产牛体内胚的研究：使用常规冻精超排了49头牛,头均可用胚为5.5枚,可用胚率为56.0%;使用性控冻精超排了50头牛,头均可用胚为4.6枚,可用胚率为49.0%。两者的差异不显著（P〉0.05）。第二部分为受胎率和性控比率的研究：使用常规冻精对936头青年牛进行了配种,受胎645头,受胎率68.9%;使用性控冻精对1131头青年牛进行了配种,受胎734头,受胎率64.9%。常规冻精的受胎率比性控冻精的高,但两者差异不显著（P〉0.05）。在第二部分的研究过程中,利用B超仪对胎儿进行了性别鉴定,总共鉴定了68头妊娠55-90d的牛,母犊率为94.1%。