猪细小病毒Vaccine株VP2基因克隆与抗原性分析

[目的]为研制和筛选猪细小病毒核酸疫苗提供依据。[方法]对猪细小病毒Vaccine株VP2进行克隆、测序以及抗原性分析。[结果]参考GenBank公布的NADL-2株序列,设计出1对引物,并利用该引物扩增了猪细小病毒vaccine株VP2主要抗原基因,将其克隆到pGEM-T Easy载体上,测序获得656 bp核苷酸序列,并推导出其氨基酸序列,共编码218氨基酸,与NADL-2株相应的序列进行比较分析,比NADL-2毒株缺失781 bp,两者核苷酸同源性为98.9%,氨基酸同源性为97.2%;应用DNAStar软件对氨基酸的抗原表位进行了预测,共有7个抗原表位,分别在氨基酸N端的第10~183、4~39、94~103、121~126、137~144、156~165和209~214区段,此序列具有较好的免疫原性。[结论]该研究为发展特异性和敏感性诊断系统和研制疫苗提供了有力的技术依据,为研究蛋白质特性分析提供了理论依据。     

高纬寒地玉米高产栽培中存在的问题及应对措施的探讨

在以大豆为主栽作物的黑龙江省北部,随着种植业调整及畜牧业的发展,玉米种植面积在逐年增加,广大农民对玉米的种植已由过去的随意性逐渐向系统化、规范化方向发展。尽管如此,受着传统栽培作物(麦豆)的影响,在玉米的高产栽培中还存在着许多问题,仍有许多偏差,对此提出了应对措施。     

高纬寒地青贮玉米高产栽培数学模型研究

为了进一步提高青贮玉米的经济效益,采用二次正交旋转组合设计,研究了密度、氮、磷、钾四因素配合施用对青贮玉米中单5384的影响。结果表明:青贮玉米中单5384产量在76 744.88kg·hm-2以上的密度范围为7.88万~8.19万株·hm-2;施纯氮肥123.61~132.61kg·hm-2;施磷肥114.21~122.37kg·hm-2;施钾肥93.57~102.72kg·hm-2。     

金枝玉叶的栽培与养护

金枝玉叶原产南非,学名叫马齿苋树,为马齿苋科,属多年生常绿肉质灌木。茎肉质,呈紫褐色或浅褐色,分枝近水平,新枝在阳光充足的条件下呈紫红色,若光照不足,则为绿色。喜温暖干燥和阳光充足的环境,耐干旱和半阴,不耐涝。     

河南良杂猪白细胞介素-18成熟蛋白基因的克隆及表达载体的构建

采集6月龄河南良杂猪的脾脏,分离淋巴细胞后直接提取总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行T-A克隆、测序,获得了河南良杂猪IL-18基因成熟蛋白序列.序列测定表明,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp,编码157个氨基酸.将该基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pQE30,构建重组质粒pQE-IL18,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确.     

蔬菜中硝酸盐污染程度快速测定方法的研究

以市售常见几种蔬菜为试验材料,依据NO3^-与水杨酸在酸性介质(浓硫酸)中的显色反应,设计了一种建立在目视比色法基础上的快速测定蔬菜中硝酸盐污染程度的方法。试验结果表明：该方法测定蔬菜中硝酸盐污染程度的时间仅为12～15min,判定结果与国标法相符。     

实时荧光定量PCR检测猪细小病毒

根据已报道的猪细小病毒基因组序列,设计并合成了引物和探针,从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中提取DNA,经PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌JM109,筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行PCR和测序鉴定,表明目的片段已经成功克隆.将104～108拷贝反应的重组标准品质粒进行荧光定量PCR,系统自动分析软件显示Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系.动力学曲线分析表明,在该反应体系和反应条件下,标准曲线的灵敏度为102拷贝.本方法的建立为猪细小病毒感染的早期诊断奠定了基础.     

猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR诊断与防制

2007年7月,周口市某猪场发生了一种以初产猪流产、死产为特征的疾病。根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株VR-2332ORF7基因序列设计1对特异性引物,提取流产胎儿的肺、肝等组织中的RNA,经RT-PCR扩增,检测PRRSV为阳性,结合病史和临床症状,诊断为猪繁殖与呼吸综合征。对该猪场采取综合防制措施,取得了较好的效果。     

两种O型口蹄疫ELISA检测试剂盒的对比

为比较哪种ELISA试剂盒能够更准确、简便、快捷地检测出口蹄疫病毒抗体,本研究使用液相阻断酶联免疫吸附试验(LB-ELISA)试剂盒和固相竞争酶联免疫吸附试验(SPC-ELISA)试剂盒,对2014年广西各市县动物疫病预防控制中心送检的已免疫过口蹄疫疫苗的猪、牛、羊血清共计1121份进行了检测,对比两种试剂盒的特异性、敏感性、阳性检出率及符合率。检测结果表明,两种口蹄疫ELISA试剂盒的阳性检出率不同,LB-ELISA的阳性检出率比SPC-ELISA高2.4%;LB-ELISA试剂盒对血清抗体滴度水平的要求相比SPC-ELISA试剂盒要低,因此LB-ELISA试剂盒更适合于口蹄疫病毒感染的检测。     

獭兔胃肠炎的治疗与预防

獭兔胃肠炎主要是由于胃肠黏膜受到长期的异常刺激，如饲料搭配不适宜，饲料质量不佳，新鲜度不好，日粮比例不当，调制方法不合理，卫生条件差等都会引起胃肠炎。食物的变化加之天气原因，加剧了胃肠中有害微生物的破坏作用，往往会造成较长时间的轻微腹泻，从而导致以胃肠黏膜层异常、炎症为主要特征的疾病。常可见粪便形状、颜色和气味的异常，虽能采食、活动，但食欲会逐渐降低，精神状态较差，严重的拒绝采食，甚至死亡。