中粮屯河甜菜品种比较试验简报

通过对新疆2007—2010年多点品种比较试验的产量和含糖率结果分析,比较全面地了解不同来源甜菜品种在新疆糖区的表现,为新疆糖区甜菜品种选用提供依据。     

禽流感抗体胶体金半定量检测方法的建立

针对目前禽流感抗体主要采用的HI检测方法操作步骤繁琐,耗时较长且必须在实验室内进行判定的缺陷,为了提高检测效率和通关速度,借助胶体金半定量检测技术,以禽流感HI抗体滴度2^4为临界值,研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡。首先复苏了含A／Chicken／Hongkong／SZ-HI／1997（H5N1）病毒株HA基因重组质粒pETHA的阳性菌,IPTG诱导表达4h后,SDS—PAGE电泳对HA重组蛋白进行了确证。以纯化的HA重组蛋白和灭活的禽流感病毒为主要材料,采用夹心法原理研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡,确定了检测卡的最佳组合反应模式、最佳上样量、最佳反应时间、最适的胶体金颗粒、最佳硝酸纤维素膜和吸水垫。所建立的禽流感抗体胶体金半定量检测卡特异性强,与其他家禽抗原阳性标准血清交叉反应小。检测卡的检测结果与HI检测结果基本一致,检测HI抗体滴度为2^4鸡血清时结果符合率达94％。     

H5N1亚型禽流感疫苗对供港鸡免疫效果评价

针对供港活鸡饲养周期长(85日龄～105日龄),禽流感抗体滴度要求高(21/28检测样品抗体滴度需≥4 log2)的特点,在原有H5N2疫苗对供港活禽免疫效果不理想的情况下,对哈尔滨兽医研究所研制的H5N1亚型禽流感疫苗进行了免疫效果评估.结果显示,H5N1疫苗免疫效果明显高于原有的H5N2疫苗,初步推荐该禽流感灭活疫苗对供港鸡场的免疫程序为:首免7日龄～10日龄,0.3 mL/只,皮下注射;二免45日龄,0.5 mL/只,肌肉注射.     

猪细小病毒和猪伪狂犬病毒复合PCR检测方法的建立

在已经建立的PPV和PRV的单项PCR诊断方法的基础上。通过对扩增条件的筛选，成功地建立了PPV和PRV诊断方法，并应用于临床，利用一次PCR反应，即可同时扩增PPV的445bp和PRV217bp的特异性片段。该方法的建立对临床上进行这2种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。     

猪细小病毒PCR检测方法的建立与应用

根据已报道的猪细小病毒基因组序列，设计并合成了1对寡核苷酸引物，通过对影响PCR扩增因素的筛选，成功地从猪细小病毒感染的组织和细胞中扩增出445bp片段，回收该片段用EcoR I酶切得到了预期的结果，证实了该扩增片段的特异性。敏感性试验表明，该方法可以检测出10^-4个TCID50的病毒含量。利用该方法对临床上24份流产病科的检测，查出阳性16份，而同时利用HA检测阳性只有10份。这些结果说明本试验建立的PCR诊断方法灵敏度高、特异性强。     

小反刍兽疫病毒竞争ELISA检测试剂盒生产工艺研究

为研究小反刍兽疫病毒（PPRV）竞争ELISA试剂盒的生产工艺,本试验利用昆虫细胞表达的PPRV核蛋白及其单克隆抗体,建立一种特异性高、敏感性强的PPRV竞争ELISA检测方法,并对该方法的各个步骤进行优化,确定该方法的最适条件,从而确定竞争ELISA的操作程序。并用该方法与OIE推荐的PPRV rC-ELISA抗体检测试剂盒同时检测来自西藏、内蒙古共977份临床羊、牛血清样本,结果显示特异性、敏感性、符合率分别达99.89%、93.82%、99.38%。本研究建立的PPRV竞争ELISA方法为该病毒检测试剂盒的研制奠定技术基础,为小反刍兽疫的防控提供科学依据。     

猪细小病毒VP2基因的克隆、测序与原核表达

利用PCR技术从猪细小病毒的RF DNA模板中扩增了含有VP2全基因的2.0kb的基因片段，将PCR产物克隆至pMD18-T载体，利用双脱氧末端终止法测定了VP2全基因的核苷酸序列。将所得的核心苷酸序列和推导的氨基酸序列分别与GenBank中的相应序列进行同源性比较，同源性均在99%以上，从而说明该蛋白的碱基序列和氨基酸序列均具有高度的保守性。将VP2全基因分别克隆入原核表达载体pET15(b)、pET17(b)和pET28(b)构建成表达质粒pET15bVP2、pET17bVP2和pET28bVP2；将含有VP2基因起始位点至EcoRⅠ切点间的0.8kb片段克隆入pET17(b)中构建成表达质粒pET17bVP2f。利用上述四种质粒转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导后SDS-PAGE检测表达情况，结果发现pET17bVP2f质粒在45kD处有一特异性表达带，而其它几种质粒均未看到特异性表达带，推测VP2基因3‘端的某些结构可能对VP2全基因的表达有一定影响。这一结果对研究VP2基因的结构与功能具有重要意义。     

PRRSV云南A06株ORF5和ORF7基因的克隆与序列分析

设计2对引物分别扩增PRRSV的ORF5和ORF7基因,对从云南某猪场分离到的毒株A06进行RT-PCR检测,得到2条特异性扩增带,克隆至pMD18-T载体并测序。将A06株的ORF5和ORF7基因及其推断氨基酸序列分别与PRRSV欧洲型代表株LV、美洲型代表株VR2332和7株中国分离的美洲型毒株相应基因进行核苷酸和氨基酸序列比对分析。结果显示,A06株属于美洲型,其ORF5和ORF7基因及推断氨基酸与我国2006年分离的4株HP-PRRSV代表株的相似性高达98%～99%,与欧洲型代表株LV的相似性只有56%～64%。分别构建了以上毒株ORF5和ORF7基因的亲缘关系图谱,反映了A06株ORF5和ORF7基因的进化位置,完成2个基因的遗传变异分析。     

二重实时荧光PCR方法检测山羊和绵羊源性成分

本研究根据山羊、绵羊线粒体中的cyt b基因序列,利用ABI primer express 3.0和DNAStar软件设计了特异性引物和探针.通过对引物和探针浓度、Mg2 浓度、dNTP浓度和Taq酶用量以及反应条件等因素的优化筛选,建立了能同时鉴别山羊和绵羊源性成分的二重实时荧光PCR方法.所建方法灵敏性高、特异性好,对17种不同源性的动物DNA和50份不同来源的样品DNA进行实时荧光PCR检测,结果表明引物与探针能特异地鉴别检测出山羊和绵羊源性成分.实验结果表明该检测方法适用于饲料、肉制品、奶制品和生皮等动物源性产品的山羊和绵羊源性成分鉴定.     

秸秆沼气池机械化出料及运动分析

农村户用秸秆沼气池使用中需要进行定期清池换料,以保证沼气池正常产气使用。其中,清池出料工作尤为重要,其工作过程繁琐,人工作业苦、脏、累、危。农村户用秸秆沼气池清池出料操作中需要进行浮壳破碎、秸秆纤维沼渣清除和沼液、沼渣抽吸去除等工作步骤。针对农村户用秸秆沼气池清池出料工作的特点,介绍了相应作业机械的设计,旨在通过机械作业解决农村户用秸秆沼气池的清池出料问题,提高工作效率,减轻劳动强度,促进农村户用秸秆沼气池的推广使用。同时,针对清秸秆抓斗工作的特殊性,对抓斗的形状及运动应用三维软件进行运动仿真分析,优化了抓斗的形状和工作轨迹,以防止抓斗在工作中损坏沼气池内壁。