猫传染性腹膜炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为快速、灵敏、准确检测猫传染性腹膜炎病毒（feline infectious peritonitis virus,FIPV）,以FIPV N基因为靶序列设计合成特异性引物及TaqMan探针,建立了一种FIPV实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行了试验。结果表明：该方法灵敏度高,最低检测限为3.4 copies/μL;特异性强,与狂犬病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒、猫细小病毒、犬流感病毒、犬瘟热病毒等均无交叉反应;重复性好,批内变异系数为0.99%~4.13%,批间变异系数为1.29%~4.64%。以上结果说明,本试验建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法特异、敏感、重复性好,适用于FIPV的快速检测。     

用好乡贤档案 助力乡村振兴

<正>乡贤档案的开发和利用,对于乡村振兴和乡村文化传承、推动乡村经济发展等具有现实而深远的意义。1．开发利用乡贤档案的意义凡是在乡村有一定声望和影响力的学者、能人等都被称为乡贤。乡贤档案记录着他们的事迹、信息和文化传承等内容。（1）传承乡土文化和历史乡贤的瑰意琦行、道德风范、精神追求等是宝贵的民族财富。乡贤们的著述、信札、     

两种培养条件下重组杆状病毒表达小反刍兽疫病毒N蛋白的丰度

为了在重组杆状病毒上获得高丰度表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白,利用细胞贴壁培养和悬浮培养法培养重组杆状病毒Vbacmin-PPRV-N 120 h,用显微镜观察不同时间点细胞形态变化,随后在培养24、48、72、96、120 h时分别收集培养液,以ELISA方法检测PPRV N蛋白表达量,并用SPSS软件对数据...     

赤羽病病毒单克隆抗体的制备及c-ELISA抗体检测方法建立

为建立一种用于快速检测赤羽病病毒抗体的竞争ELISA法。用AKV病毒免疫Balb/C小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞进行免疫融合,以获得抗AKV的单克隆抗体;利用Bac-to-Bac杆状病毒表达的SBV N蛋白作为诊断特异性抗原,山羊抗鼠HRP-IgG为二抗,建立并优化AKV抗体检测的竞争ELISA方法。得到一株持续稳定繁殖的能够分泌单抗AKV核蛋白抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚型鉴定为：重链IgG1,轻链kappa,仅能与AKV病毒呈阳性反应,与BTV、FAMD、EHDV病毒等病毒抗原不发生特异性反应;建立的检测AKV抗体ELISA检测方法,诊断抗原最佳包被浓度为0.5μg/mL,1∶1 000抗体稀释比,1∶50血清稀释比,1∶2 000二抗稀释比,封闭条件为5%BSA,37℃封闭2 h,确定了血清抑制率大于等于44%时为阳性,小于44%为阴性;所建立的ELISA方法敏感性和特异性鉴定结果与ID Screen AKV Competition检测试剂盒一致。本试验成功制备出一株分泌针对AKV N蛋白的杂交瘤细胞系,建立的ELISA检测方法能够用于检测动物AKV抗体,为进一步开展AKV抗体...     

COVID-19病毒N基因在昆虫细胞内的表达

为获得具有和天然蛋白质类似功能与活性的COVID-19核衣壳蛋白并应用于实际检测中,首先根据Bac-to-bac昆虫表达系统和人工合成的COVID-19核衣壳蛋白(N蛋白)序列,将pFastBac^TMHTB载体上的酶切位点BamHⅠ和XbaⅠ分别加入上下游引物,利用PCR技术对N基因进行扩增,先后连接T-Vector pMD19(simple)载体与pFastBac^TMHTB载体,并获得重组质粒pMD19-T(simple)-COV19-N和pFastBac^TMHTB-COV19-N,最终在DH10Bac细胞中构建重组杆粒DH10Bac-pFastBac^TMHTB-COV19-N并使其在昆虫细胞Sf9内进行表达,获得重组蛋白后进行SDS-PAGE和WB分析。通过PCR方法成功扩增N基因,构建的重组质粒pMD19-T(simple)-COV19-N经PCR和双酶切鉴定均证明正确,在DH10Bac细胞内构建的重组杆粒DH10Bac-pFastBac^TMHTB-COV19-N通过PC...     

关于建立动物疫病网上诊断系统数据库的思考

本文主要阐述了建立动物疫病网上诊断系统数据库的基本原则,和如何对动物疫病的症状、病理变化进行编码及本数据库在建立过程中所遇到的问题。动物疫病数据库的建成对最终建成动物疫病网上诊断系统有着很大的帮助,但在后期制作系统的过程中还需对本数据库进行进一步的完善。     

小反刍兽疫病毒N基因的克隆及原核表达

根据小反刍兽疫病毒疫苗株Nigeria75/1的全基因序列,通过PCR方法,将N基因亚克隆入pBAD/TOPO表达载体,构建了原核表达质粒pBAD-PPRN。该重组质粒转化至大肠埃希菌TOP10中,经L-Arabinose诱导,SDS-PAGE和Western blot检测,表达的重组N蛋白分子质量与预期的73.6ku一致,为以小反刍兽疫N蛋白为抗原的诊断试剂盒研制奠定了基础。     

退耕还林地黄芪间作套种栽培技术

对退耕还林地黄芪间作套种栽培的育苗技术(选种、处理、择地、整地、施肥、播种)、田间管理(除草、浇水、追肥、后期管理)、病虫害防治(白粉病、红根病、蚜虫、豆荚螟)进行了介绍。     

云南省部分规模猪场猪瘟抗体水平调查

为评估云南省规模猪场的猪瘟免疫状况,用猪瘟ELISA抗体检测试剂盒,对云南省不同地区38个规模化猪场的种公猪、种母猪、后备猪和商品猪,共2 663份血清进行猪瘟抗体检测。结果显示:38家猪场平均猪瘟抗体合格率为78.82%,其中滇东、滇中、滇西南、滇西北、滇西、滇南、滇东北地区抗体合格率分别为82.2%、72.4%、78.87%、81.58%、83.61%、84.72%、64.63%;种公猪、种母猪、后备猪和商品猪的抗体合格率分别为89.79%、92.58%、85.38%、65.12%。结果表明,本次调查的38家猪场的猪瘟免疫保护水平较高,整体上达到了国家免疫方案中要求的不低于70%的标准,但存在一定的地区差异和猪群差异,其中滇东北地区以及商品猪群免疫保护水平较低,存在发生疫情风险,需要加强免疫和检测。本调查为云南省规模化猪场的猪病防控策略制定提供了参考。     

出口秦岭羚牛检疫

按照《中华人民共和国向日本出口展览用羚牛的卫生要求》,我们对赠送日本的4头秦岭羚牛实施为期90天的隔离检疫,并完成了对口蹄疫、蓝舌病、牛肺疫等12种疫病实验室检疫工作,4头羚牛检疫合格,均符合日本提出的要求,于2011年1月25日由西安咸阳机场启程到日本落户。