细胞培养及避免细胞污染的方法

1细胞培养1.1细胞传代培养当细胞生长至高密度时,即需分瓶至新的培养瓶中,否则就会影响细胞的生长,甚而引起死亡。一般分瓶的稀释比例为1∶3～1∶6,依细胞种类而异。一般步骤是先去除原培养瓶中旧的培养液,用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤细胞2次,加入0.25%胰酶溶液37℃作用数秒至数分钟（时间依不同细胞而异）后,倒置显微镜下观察,当细胞呈圆粒状时,去掉胰酶溶液,加入适量新鲜培养基,以吸管反复吹打瓶壁数次,使细胞脱离瓶壁,均匀悬浮于培养液中。     

酒石酸泰乐菌素的体外抗病原菌活性测定

本研究进行了国产酒石酸泰乐菌素在体外对几种常见病原自活性及最小抑菌浓度测定，并与进口酒石酸泰乐菌素进行对比。结果表明，国产酒石酸泰乐菌素对金黄色葡萄球菌，猪丹毒杆菌、多杀性巴氏杆菌、致病性大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌、嗜水气单胞杆茵和鸡败血支原体的ＭＩＣ（μｇ／ｍｌ）分别是４．８９，９．７７，９７．６６，１５６２．５，３１２５和０．０５，其中对鸡败血支原体最好，与有关文献报道基本一致，同时与进口酒石酸泰乐菌素有相似的抗菌谱及抗菌效力。     

稻田养鸭要防肉毒梭菌毒素中毒

稻田养鸭,是利用稻鸭共生的原理,利用鸭水陆两栖、食性广、觅食能力强的特性,为水稻除草、治虫、活化土壤以及鸭粪肥田,促进丰产。是优质稻米生产的新创举,也是农民养鸭增收的新路子。稻田养鸭由于空气新鲜（负离子增多）,阳光充足（紫外线消毒）,饲养密度低（常规每亩15-20只）,自然净化排泄物能力强等,很少染疫生病。但饲养实践告诉我们,在大力推广稻田养鸭技术的同时,鸭肉毒梭菌毒素中毒因多群发性、发病突然、死亡率高和无特效药救治,是不可不防的疾病。     

东北豆科山羊豆族4属植物叶形态特征及数量分类学研究

本研究采用GMA切片、扫描电镜及叶片透明法,深入研究了东北豆科山羊豆族4属25种植物叶的形态结构。选取与叶相关的23个形态性状,参考8个非叶的特征,进行了聚类分析与主成分分析。结果表明,相似系数在0.58处时,4属植物被分为3组,黄耆属与米口袋属为一组,棘豆属和甘草属各自为一组。小叶是否具腺体、叶柄横切面形状及叶柄细胞是否具单宁等特征具有较高的绝对权重值,可以作为区分刺果甘草与甘草和其他山羊豆族植物的依据。托叶质地、托叶与叶柄联合程度及小叶叶缘是否反卷等特征可作为棘豆属的识别特征。托叶形状在属下种间具一定的分类学价值。本研究为山羊豆族植物分类学及豆科植物系统学研究提供了叶形态学依据。     

发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立

建立依赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA）快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因,设计特异性引物,优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量,建立最优反应体系。通过HDA方法直接检测发酵乳中沙门氏菌,扩增其产物后进行电泳检测,验证方法特异性。结果表明：采用HDA快速检测法检测发酵乳中沙门氏菌特异性良好,优化后反应体系体积50 μL时,UvrD解旋酶添加量为0.10 μg,T4 gp32添加量为5.0 μg,得到与设计序列长度（304 bp）一致的扩增产物,检出限为2.6×102 CFU/g;该方法用于快速检测发酵乳中沙门氏菌能够满足检测需求,具有较高的灵敏度、易操作,可作为一种基础且快速的方法检测发酵乳中沙门氏菌。     

牛支原体感染动物模型的建立及其在评估灭活疫苗免疫效力上的应用

为了找到能够成功模拟牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)感染的方便可行的替代动物,并为灭活疫苗的初步探索做出贡献,采用原代次、第80代次、第160代次的M.bovis,每代分别设1.0×109、1.0×1010和1.0×1011CFU/m L 3个浓度对健康家兔进行感染试验,通过临床表征、剖检观察、病理组织切片镜检、分离培养、PCR法进行验证,显示每个代次M.bovis均呈阳性,且浓度越高、代次越低,症状越明显。家兔可成功模拟M.bovis感染情况,并确定M.bovis在体外连续传代培养过程中毒力明显减弱但仍具有致病性,第160代次M.bovis可作为疫苗备选株;将160代次M.bovis灭活后与铝胶盐佐剂1∶1混合制成灭活疫苗对家兔进行免疫试验,在第1次免疫后第14天进行第2次免疫,在第28天时对免疫组和空白对照组家兔进行攻毒试验,结果显示免疫组家兔经血清抗体法检测出体内具有较高水平的抗体,且经上述方法检测免疫组结果均呈阴性,空白对照组检测结果均呈阳性。结果表明:弱毒的M.bovis灭活疫苗也能够起到免疫防御的作用,为M.bovis疫苗回归本动物试验的研究提供了有力的数据支撑。     

肉鸡球虫病控制方法现状

Happily, I can say that we have more approaches to coccidiosis control than ever before.Unfortunately,coccidiosis still is and will continue to be a major concern both in bird health and economics. The main reasons coccidiosis is still a problem include : 　　1. Our inability to manage all factors that contribute to the incidence of coccidiosis. 　　……     

日本脑炎病毒弱毒疫苗株全长cDNA的体外合成及恢复病毒的拯救

将病毒的全基因组分成3个重叠的区段分别扩增出来,把这3个片段连接到载体中。以这3个片段为模板,通过融合PCR方法,获得JEV的全长cDNA。以cDNA为体外转录的模板,体外转录获得病毒mRNA,转染BHK-21细胞,拯救JEV病毒。通过生物学特性、分子生物学、蛋白水平等几个方面对恢复病毒进行鉴定,并测定恢复病毒的生长曲线和LD50。结果显示,获得了全长cDNA,体外转录获得的病毒RNA转染BHK-21细胞后,二代恢复病毒可引起明显的细胞病变,间接免疫荧光试验和RT-PCR均为阳性。空斑试验表明,拯救病毒与原病毒空斑表型类似;恢复病毒与亲本毒相比在BHK-21细胞上生长更快;恢复病毒的LD50与亲本毒类似。