高致病性猪蓝耳病、猪瘟和沙门氏菌混合感染的诊断

通过流行病学调查、病猪剖检病变观察和实验室诊断,得出贵州省某猪场发病猪为高致病性蓝耳病、猪瘟和沙门氏菌混合感染.其中,高致病性蓝耳病感染率为100%,猪瘟感染率50%,沙门氏菌感染率25%.     

血管瘤型禽白血病的实验室诊断

采用血清学方法和分子生物学技术对某蛋鸡场感染鸡进行实验室诊断,采用禽白血病A或B亚群抗体检测试剂盒对该鸡场的血清样本进行检测,抗体阳性率达到70%(7/10);针对ALV群特异性抗原P27基因进行PCR扩增,血液、肝脏病料样本中核酸的检出率分别为66.7%(4/6)、75%(3/4);取ALV 囊膜糖蛋白gp85 基因的扩增产物进行酶切分析,扩增的目的片断中存在BglⅡ和 SspⅠ酶切位点,BamHⅠ不能切割PCR 产物.试验结果证实本次疫病是由ALV-A 亚群病毒引起的血管瘤型白血病.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州PT分离株Nsp2基因克隆及序列变异分析

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)贵州PT分离株Nsp2基因序列特征,选择PRRSV JXA1株Nsp2基因保守区域设计并合成特异性引物,用RT-PCR方法扩增出PRRSV贵州PT分离株Nsp2基因片段,克隆至pMD18-T载体并测序,应用DNAStar、PSORTⅡ、TMHMM、MLRC等软件对Nsp2序列的理化参数、同源性、亲水性、表面可及性、抗原性和亚细胞定位等进行分析和预测。结果显示,该基因cDNA长588 bp,蛋白理论分子质量为21.5674 ku,理论pI值为5.02,为不稳定蛋白,具有良好的形成抗原表位的条件。亚细胞定位结果表明该蛋白极有可能位于细胞核,其Nsp2基因与所选18个毒株相应片段的同源性为80.0%~99.8%。预测Nsp2蛋白具有良好的抗原性,在PRRSV的流行过程中,Nsp2基因不断发生遗传变异,产生新的变异序列。     

贵阳市规模化牛场附红细胞体感染调查

为了解附红细胞体在贵阳市大型规模化养牛场牛群中的分布情况,采取血样,通过姬姆萨染色法和悬滴镜检法调查了贵阳市4个规模化牛场附红细胞体感染情况,再采集阳性牛抗凝血接种小白鼠作动物感染试验。结果表明:4个养牛场均存在附红细胞体隐性感染,感染率为23.5%~45%;对不同检测方法进行比较,姬姆萨染色法检测附红细胞体阳性率高于悬滴法;阳性血液能感染小白鼠出现附红细胞体。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药物筛选防治试验

在贵州天柱、花溪、南明、毕节、龙里、福泉等县市一些养殖场和养猪户进行副猪嗜血杆菌病流行病学调查,对疑似副猪嗜血杆菌感染的病猪进行病理剖检,无菌条件下抽取心血、心包积液和胸腹水,并采集病变明显的肺、肝等病料进行分离培养鉴定.分离出的菌株按常规纸片法采用常用抗生素和中草药方剂进行药敏试验,结果表明该分离菌株对左旋氧氟沙星、磺胺二甲嘧啶、中草药方剂等高敏,抑菌圈直径＞15 mm;采用中草药方剂与磺胺二甲嘧啶对某猪场18头45日龄、体重相近、PCR检测阳性病例进行疗效对比试验,中草药方剂组和中草药方剂+磺胺二甲嘧啶组有增强机体抗病力功效;在12个猪场对疑似病例2 334头随机抽样开展PCR检测,对受到副猪嗜血杆菌病阳性感染的猪群使用筛选的药物进行综合防治试验,治愈率达到89.7％.     

2013－2019年贵州省副猪嗜血杆菌分离株耐药性及其演变

试验旨在揭示贵州省副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,Hps）的耐药性及其变化趋势,指导Glasser's病临床防控用药,减缓Hps耐药菌株出现。通过K-B纸片琼脂法,检测2013－2019年分离自贵州省9个地区517株Hps对15种常用抗菌药的耐药性,分析不同分离时期和分离地区的菌株的耐药性差异。结果显示,针对15种抗生素分别有14.36%~70.58%的分离菌株表现耐药,其中耐头孢噻呋菌株的比例最低,耐复方新诺明菌株的比例最高;与2013年相比,2019年分离的Hps菌株对13种抗生素的耐药率分别升高了4.52%~324.68%,其中耐头孢噻呋菌株比例上升速度最快,达324.68%,耐链霉素菌株比例上升最慢,仅4.52%,耐土霉素和四环素菌株的比例分别下降2.21%和8.63%,出现负增长。相对于凯里、毕节和兴义地区,安顺、遵义、贵阳地区流行的菌株对头孢噻呋、替米考星、多西环素等在全省范围内耐药菌株比例较低的药物耐药率相对较高,而对复方新诺明、阿莫西林、链霉素等在全省范围内耐药菌株比例较高的药物耐药率相对较低。这一结果说明,贵州省Hps菌株对15种常用药物的耐药性较为严重,且总体呈现上升趋势,不同地区分离株对部分抗菌药的耐药率呈现明显的地区差异性。     

猪繁殖障碍疫病的三重PCR法鉴别诊断

为建立一种简便、快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪细小病毒（PPV）和猪伪狂犬病病毒（PRV）3种病原的多重PCR方法,针对PRRSVN基因、PPVVP2基因及PRVgp50基因分别合成了1对特异性引物,通过PCR均扩增出分子长377bp、445bp和217bp的DNA条带,与预期扩增片段相符。以3对引物同时对PRRSV、PPV和PRV疫苗株进行多重PCR扩增及反应条件的优化,同时扩增出3条特异性条带。利用所建立的多重PCR方法,对贵州省11个养猪场的40份疑似病料进行检测,结果显示,PRRSV、PPV和PRV的阳性检出率分别为62．5％、17．5％和0％。     

虹彩病毒和柱状黄杆菌混合感染大鲵的诊治

2012年7月,贵州省某大鲵养殖场发生了以大鲵体表和四肢多处溃烂、内脏器官出现充血、出血为特征的疾病,经过临床症状观察、病理剖检及实验室诊断,诊断为虹彩病毒(Iridovirus)和柱状黄杆菌(Flabobacterium columnare)的混合感染.通过采取综合有效的防治措施,大鲵疫情得到有效控制.     

猪细小病毒SYBR Green I荧光定量PCR诊断试剂盒的研制

根据GenBank中猪细小病毒VP2基因序列设计特异性的引物,PCR扩增获得猪细小病毒VP2基因片段,并克隆到p MD-18T载体上作为阳性标准品。通过对SYBR Green I荧光定量PCR反应条件的优化,建立了猪细小病毒的SYBR Green I荧光定量PCR诊断方法,以此为基础研制出试剂盒。试剂盒扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,对PRV、PCV-2、E.coli、CSFV、PRRSV均无阳性信号扩增,可重复性好,测灵敏度可达1.0×101拷贝/μL。结果表明,研制的猪细小病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速、重复性好等优点,适合于猪细小病毒临床样品的检测。     

猪细小病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR诊断试剂盒的研制

根据GenBank中猪细小病毒VP2基因序列设计特异性的引物,PCR扩增获得猪细小病毒VP2基因片段,并克隆到pMD-18T载体上作为阳性标准品.通过对SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR反应条件的优化,建立了猪细小病毒的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR诊断方法,以此为基础研制出试剂盒.试剂盒扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,对PRV、PCV-2、E.coli、CSFV、PRRSV均无阳性信号扩增,可重复性好,测灵敏度可达1.0×101拷贝/μL.结果表明,研制的猪细小病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速、重复性好等优点,适合于猪细小病毒临床样品的检测.