转运真核表达盒的重组T7噬菌体构建

为了构建转运真核表达盒的重组T7噬菌体,并分别在体外、体内条件下检测其标签蛋白质EGFP的表达。以T7噬菌体基因组左侧578 bp处为插入位点,取上游400 bp和下游200 bp片段作为左右同源臂,并在其中插入表达EGFP基因的真核表达盒(EEB),构建同源重组质粒p UC-L-EEB-R。将该质粒载体转化T7噬菌体宿主细菌BL21,在噬菌体繁殖过程中完成同源重组,PCR筛选重组T7-EEB噬菌体。提取该重组噬菌体基因组转染Vero细胞后体外检测EGFP蛋白质表达,纯化的噬菌体免疫小鼠后体内检测EGFP蛋白质表达。结果显示,通过同源重组方法成功构建了携带真核表达盒的重组T7噬菌体,PCR检测和酶切鉴定均证明表达盒已正确插入。T7-EEB基因组转染真核细胞可见明显的EGFP蛋白质表达,免疫小鼠后活体荧光检测到EGFP蛋白质信号,在小鼠肝脏、脾脏组织中RT-PCR检测到EGFP基因的mRNA转录。表明同源重组方法可以用于构建重组T7噬菌体,噬菌体能够转运真核表达盒并实现蛋白质表达。     

硫酸化黄芪多糖对CEF生长及抵抗IBDV感染的影响

采取一步醇沉和分步醇沉法提取4种黄芪多糖APS,、APS10、APS50和APS50,用氯磺酸-吡啶法进行硫酸化修饰,得到4种硫酸化黄芪多糖(sAPS) sAPSt、sAPS40、sAPS50和sAPS60,用MTT法比较了4种硫酸化黄芪多糖对鸩胚成纤维细胞(CEF) 的生长及抵抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV) 感染的影响,以末修饰的APSt为对照.结果显示,APS1显著促进CEF生长,细胞毒性较低,但抵抗鸡传染性法氏囊病毒感染细胞的作用较弱;sAPS抵抗鸡传染性法氏囊病毒感染的作用显著增强,显效浓度降低,但安全浓度也降低.表明通过硫酸化修饰可以提高黄芪多糖的抗病毒活性,但高浓度sAPS的细胞毒性增强.     

猪瘟耐热活疫苗节能冻干曲线的优化研究

猪瘟疫苗真空冷冻干燥工艺,可减少冻干对制品活性的影响,降低制品冻干过程的耗能,缩短冻干周期,故研制安全、耐热、节能的猪瘟减毒冻干疫苗极为重要。选用甘露醇、甘氨酸等成分设计猪瘟耐热保护剂配方,通过间接免疫荧光法比较制品在37℃、10 d的冻干和耐热损失,并用兔体热反应法复核。检测优化配方的共晶点和塌陷温度设计冻干程序,比较不同预冻方式对猪瘟耐热疫苗冻干的影响,调整冻干周期。猪瘟耐热保护剂配方A-4的冻干和耐热损失最小,分别为0.30 lg和0.45 lg。根据制品的共晶点-27.51℃,对预冻方式筛选,发现快冻冻干和耐热损失最小,分别为0.17 lg和0.38 lg,根据塌陷温度-24.3℃,成功将冻干曲线缩短至24 h。调整后的配方可使猪瘟活苗在37℃保存15 d、45℃保存7 d;内毒素和动物试验表明该疫苗安全、无副反应。上述结果表明,试验成功筛选出猪瘟耐热保护剂配方A-4,在保证疫苗质量的前提下优化冻干曲线,调整后的保护剂配方保证疫苗耐热性能,安全无副反应。     

牛磺酸对不同饲养方式蛋鸡肾脏功能、抗氧化能力和细胞因子水平的影响

选择生长发育正常的绿壳蛋鸡15 000只,随机分成笼养高密度组、笼养低密度组和散养组,每组又分为对照组和实验组,2 500只/组。对照组饲喂正常日粮,实验组饲喂添加0.1%的牛磺酸日粮。在实验期第90天,每组随机选取10只采集血液和肾脏,进行肾脏形态和相关生化指标检测。结果显示:饲养方式和日粮中添加0.1%牛磺酸对血清中SCr和UA含量没有显著影响(P0.05);笼养蛋鸡血清BUN含量无论在高密度组还是低密度组均显著高于散养组(P0.05)。iNOs活性、TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10等和炎症免疫相关的细胞因子水平在各饲养模式及处理间均无显著差异。饲养方式对肾脏组织中MDA含量、SOD和T-AOC活性无显著影响。散养组肾脏T-AOC活性显著高于笼养高密度组(P0.05);日粮中添加0.1%牛磺酸可以显著升高散养组和笼养高密度组肾脏T-AOC活性(P0.05)。结果表明,散养、降低饲养密度和日粮中添加牛磺酸可以提高肾脏组织抗氧化水平,调控机体的代谢,改善饲养应激造成的肾脏组织损伤,进而提高蛋鸡的健康水平。     

新型猪瘟耐热活疫苗冻干工艺设计及放大研究

为了筛选耐热、安全的猪瘟活疫苗冻干工艺,探索工艺放大规律,为耐热冻干工艺从实验室到生产提供理论依据和技术支撑。根据新型猪瘟耐热配方的热参数科学设计冻干程序,通过冻形、加速耐老化实验、残余水分等指标筛选冻干程序并进行工艺放大。结果表明,新型猪瘟耐热活疫苗溶液的共晶点为-26.4℃、塌陷温度-22.4～-20.4℃,筛选得到冻干程序3,当预冻温度为-42℃,主干燥温度为-10℃时为最优曲线。将程序3在0.15 m~2—0.5 m~2—2 m~2进行逐级工艺放大摸索,规模放大3倍(0.5 m~2)时程序可不变,放大到13倍(2 m~2)时需在主干燥阶段下调隔板温度、延长干燥时间。采用新型猪瘟耐热配方及程序3制备的冻干活疫苗产品可在37℃保存20 d、45℃保存14 d;动物实验安全。上述结果表明成功筛选出新型猪瘟耐热配方的配套冻干工艺,并实现了工艺的逐级放大。     

牛磺酸对急性热应激蛋鸡输卵管损伤的保护作用

为了探讨牛磺酸对急性热应激蛋鸡输卵管损伤的保护作用,将40羽60周龄绿壳蛋鸡随机分成对照组(C)和牛磺酸组(T).对照组饲喂正常日粮,牛磺酸组在饲喂正常日粮的基础上,添加0.1％的牛磺酸.饲喂14d后再将对照组和牛磺酸组随机各分为两组,分别为正常对照组( NC,n＝ 10)、急性热应激对照组(SC,n＝10)和正常牛磺...     

禽腺病毒Ⅰ群4型疫苗研究态势分析——专利布局的视角

禽腺病毒是家禽养殖的一项重大疾病,对禽腺病毒Ⅰ群4型系列疫苗的研发,将极大提升科技供给质量,对产业发展和保障畜禽产品安全具有重要意义。本文依托江苏省专利信息检索分云平台、中国兽药信息网国家兽药基础数据库等权威数据平台,运用专利布局的理念和方法,对主题技术专利授权和产品开发情况进行检索分析。研究得出主要竞争主体、总体研发进度、当前研究空白和后期可开发、具备较高开发价值领域,为禽腺病毒Ⅰ群4型技术研发和产品开发提供精准依据。     

硫酸化黄芪多糖佐剂活性的比较

14日龄雏鸡200只,随机均分为10组,在用新城疫弱毒苗免疫的同时,6个试验组分别肌肉注射高、低剂量3种修饰的硫酸化黄芪多糖(sAPS)sAPS40、sAPS50和sAPS60,2个多糖对照组注射高、低剂量未修饰的黄芪多糖(APS),无佐剂对照组注射等量生理盐水,每天1次,连续3 d.分别于免疫后7、14、21、28 d翅静脉采血测定血清抗体效价;于免疫后14、21、28、35 d心脏采血测定T淋巴细胞增殖.结果表明,3种修饰多糖均能显著提高血清抗体效价、促进T淋巴细胞增殖,作用强于未修饰多糖,并有一定的量效和时效关系,高剂量提高血清抗体效价、低剂量促进T淋巴细胞增殖的效果较好,综合评价以sAPS60最好,可以作为新型免疫增强剂的候选药.     

不同中药对奶牛乳房炎病原菌体外抑制作用的比较

选择14种中药制备水煎液和水煎醇沉液,测定各中药对奶牛乳房炎6种病原菌的体外抑制作用。结果表明,各药水煎液和水提醇沉液的抑菌效果无显著差异,其中大黄、黄柏、丹参、诃子、黄芩、山楂对6种细菌的综合抑制效果较好。进一步比较了6种中药对3种主要病原菌的体外抑制作用和最低杀菌浓度,发现黄柏、大黄、丹参、诃子对3种细菌的综合抑制效果较好。结合药剂的组方原则,丹参、黄柏可作为治疗乳房炎方剂的首选药。