FDFT1基因shRNA和过表达载体的构建及在牛胎儿成纤维细胞中的验证

构建了带有绿色荧光标记的法尼基二磷酸法尼基转移酶1(farnesyl-diphosphate farnesyltransferase 1,FDFT1)基因shRNA干扰载体以及过表达载体,将其转染牛胎儿成纤维细胞(bovine fetal fibroblasts,BFF),采用荧光定量PCR和Western blot的方法,检测FDFT1基因mRNA和蛋白的表达水平,在细胞水平验证了shRNA干扰载体的干扰效率和过表达载体的有效性。结果显示:shRNA组FDFT1-Bos-520的FDFT1基因mRNA表达水平降低至shRNA NC组的40.7%(P0.01),蛋白质表达水平降低至shRNA NC组的39.61%(P0.01);而FDFT1基因pBI-CMV3-FDFT1过表达组FDFT1基因mRNA的表达水平为pBI-CMV3空载体组的137.9倍(P0.01),蛋白表达水平升高至空载体组的2.34倍(P0.01)。本试验通过荧光定量PCR和Western blot的检测方法验证了FDFT1基因过表达载体及干扰载体转染BFF后,FDFT1基因表达量的变化,为进一步研究FDFT1基因对胆固醇代谢和脂质代谢的影响和作用机制提供了实验材料及分子依据。     

家鸭×番鸭杂种下调表达新基因r-MHD2的克隆

以北京鸭、法国番鸭及其正反交F1代杂种为试验材料,采用mRNA差异显示(DDRT-PCR)方法分析不同试验组肌肉组织基因表达差异,结合抑制性消减杂交(SSH)加以验证,发现一个杂种下调表达基因r-MHD2,对鸭r-MHD2基因698 bp片段BLASTING结果表明,该基因与鸡(Gallus gallus)、非洲爪蟾Xenopus laevis和Xenopus tropicalis同源性分别为91%、78%和77%.r-MHD2基因的具体分子功能尚属未知.     

夏洛来牛抑肌素突变基因序列分析

利用PCR法克隆了夏洛来肉牛抑肌素突变基因第二外显子,序列分析结果表明：突变基因与正常基因相比较,存在1个单碱基突变(C→A),从而使该基因表达产物——抑肌素的氨基酸序列发生变异,形成双肌性状。     

BECN1基因在绵羊皮肤毛囊上表达的研究

BECN1基因是细胞自噬的启动基因之一。检测该基因在细毛羊不同发育时期皮肤毛囊上的表达规律,可为细毛羊皮肤毛囊发育是否存在细胞自噬提供参考。利用实时荧光定量、免疫组化及免疫印迹法对BECN1基因分别在细毛羊休止期、生长期、退行期皮肤毛囊上的定位和表达进行了研究。结果表明,BECN1基因在细毛羊各个时期皮肤毛囊的内根鞘、外根鞘以及毛母质中均有阳性表达,但以退行期最为显著;在细毛羊各个时期的毛囊中均检测到BECN1基因的转录与蛋白表达,均以退行期表达量最高,且显著高于休止期和生长期（P<0.05）,而生长期与休止期间的表达量无明显差异（P>0.05）。上述结果间接表明,细毛羊的毛囊周期中均存在细胞自噬现象,并以退行期最为明显。     

奶牛weaver综合症研究进展

奶牛weaver综合症（奶中进行性脑脊髓退化症）是一种隐性遗传疾病，与产奶性能密切相关。文中综述了奶牛weaver综合征的主要病症、检测方法、weaver基因的研究进展以及从weaver基因入手检测奶牛产奶性能QTL（数量性状座位）的进展情况。     

北京鸭／番鸭杂交体系肝脏组织基因表达差异的研究

以番鸭、北京鸭及其杂交后代半番鸭为研究对象,利用mRNA差异显示技术得到肝脏组织基因表达差异图谱.mRNA差异显示表明,肝脏组织的基因表达在纯种群和杂种群之间存在着显著的质和量的差异;5对引物组合显示出41条差异带;分属于7类10种基因表达模式,其中量的差异有3类4种,质的差异有4类6种.这些基因差异表达模式说明了杂种的基因表达调控方式发生了变化,可能是mRNA水平上杂种优势形成的分子遗传基础.     

北京鸭×番鸭杂种优势相关基因表达差异研究

用抑制性消减杂交(SSH)方法研究动物杂种相关基因表达差异。选用北京鸭、法国番鸭及其正反交F_1代,以杂种组为处理,亲本组为对照,建立肌肉组织SSH基因文库,随机选取1 000个单克隆测序,并与GenBank序列进行比对分析。结果共发现40个新ESTs,93个未知功能蛋白基因,34个已知功能蛋白基因。在34个已知功能蛋白基因中,杂种表达上调的基因有23个,杂种表达下调的有11个。研究表明杂种优势分子遗传基础复杂,涉及能量代谢、信号传导及调控、转录调控、蛋白质合成加工等基因的差异表达。     

SIRT1基因对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响

【目的】探讨沉默信息调节因子1(Silent information regulator1,SIRT1)对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。【方法】选取牛卵巢上直径2～6mm的卵泡,用注射器抽取卵泡中的颗粒细胞,进行体外培养。根据牛SIRT1基因的核苷酸序列,构建了4条干扰载体(shRNA-SIRT1-1597、shRNA-SIRT1-1471、shRNA-SIRT1-1186、shRNA-SIRT1-1306)及1条阴性对照载体(shRNA-NC),利用脂质体将质粒转入牛卵泡颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR法筛选出干扰效果最佳的干扰载体用于后续试验。以转染shRNA-SIRT1-1471的颗粒细胞为干扰组,转染sh-RNA-NC的颗粒细胞为阴性对照组,不做处理的颗粒细胞为空白对照组,采用CCK-8法检测转染后24,36,48和60h各组颗粒细胞增殖情况,用流式细胞术检测转染后24,36和48h各组颗粒细胞的细胞周期变化情况。【结果】转染后48hshRNA-SIRT1-1471干扰的颗粒细胞SIRT1表达量显著低于其他处理组(P0.05),故选用shRNA-SIRT1-1471作为最佳干扰载体。转染后24,36,48和60h,干扰组颗粒细胞增殖效果显著高于空白对照组和阴性对照组(P0.05);转染后24～48h干扰组与空白对照组和阴性对照组相比G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著升高,从而使更多细胞进入M期进行正常的有丝分裂,促进细胞增殖。【结论】SIRT1能抑制牛卵泡颗粒细胞的增殖,并阻滞细胞周期的进程。