浙江省和河北省规模猪场弓形虫感染的血清学调查

为了解浙江省和河北省规模化猪场猪群弓形虫自然感染的情况,在23个规模化猪场随机采集了463例猪血清,采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)对猪血清中弓形虫抗体进行检测。结果表明:猪群总感染率为44.49%;浙江省猪群感染率为36.82%,河北省猪群感染率为50.38%;从不同年份感染情况分析,2016、2017和2018年猪群感染率分别为为37.11%、45.49%和52.20%,呈逐年上升的趋势;从胎次感染情况分析,1～6胎次、高胎次(6胎以上)母猪感染率分别为42.10%、52.94%、47.17%、45.95%、54.00%、63.64%、37.50%,母猪群总感染率为49.28%。调查检测结果表明猪群弓形虫感染很普遍,在不同猪场均有一定程度的感染,而母猪感染率较高。     

PCV2对体外培养仔猪脾细胞分泌细胞因子的动态影响

为进一步了解猪圆环病毒2型(PCV2)引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的机理,选取5头35日龄PCV2血清抗体阴性的断奶仔猪,无菌取脾脏制成单个细胞悬液,体外培养,分PCV2感染组与对照组。分别在培养后0 h、6 h、12 h、24 h收获细胞培养上清,用猪特异性ELISA试剂盒测定上清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)的含量。结果显示:病毒组IL-1β和IL-6在不同时间点的含量变化均不显著(P>0.05),IL-1β在6 h、24 h略高于对照组,12 h则低于对照组;IL-6除在6 h高于对照组外,其余时间点均低于对照组;病毒组TNF-α和IL-10的含量在6 h、12 h、24 h均高于对照组,且TNF-α在6 h和24 h极显著升高(P<0.01),而IL-10在12 h显著高于对照组(P<0.05)。上述结果表明:PCV2能影响体外培养的仔猪脾细胞某些细胞因子的分泌,而且可能通过TNF-α的高表达促使机体产生全身炎症反应综合征甚至多系统衰竭,而通过IL-10的高表达促使机体产生免疫抑制。     

猪肺炎支原体气溶胶富集检测技术的建立(英文)

[目的]建立一个高效的猪肺炎支原体气溶胶富集和检测技术,以弥补临床上猪肺炎支原体气溶胶检测技术的空白。[方法]结合液体冲击式采样器和过滤式采样器的原理,自行设计一个气溶胶双重富集装置,并在密闭环境下采集人工制备的猪肺炎支原体气溶胶,荧光定量PCR检测以确定该装置的采集效率。再通过收集不同猪群中的气溶胶进行检测以确定该装置临床应用的可行性。首先,收集人工感染Mhp阴性仔猪后不同时间猪舍内的气溶胶;其次,收集1个猪支原体肺炎发病猪场和1个阳性未发病猪场的产房、保育舍和育肥舍共11个猪舍的气溶胶,荧光定量PCR或套式PCR检测所收集的气溶胶。[结果]实验室模拟采样的采集效率达到(37.04±6.43)%,人工感染猪肺炎支原体后7天即在饲养房间的气溶胶中检到猪肺炎支原体;2个猪场共11个不同猪舍气溶胶中猪肺炎支原体检测结果均为阳性,检出率100%。[结论]成功建立了一个高敏感性的猪肺炎支原体气溶胶富集检测技术,适用于临床上猪肺炎支原体气溶胶的检测。     

以疫苗免疫为核心的猪气喘病控制与净化技术

猪气喘病的控制和净化已成为养猪产业急需解决的难题,本文简述了国外的研究动态,提出控制和净化技术须从种猪、环境、疫苗和药物四个层次依次着手,介绍了常用的药物组合和用药策略,肯定了灭活疫苗的明显效果,报告了活疫苗(168株)在突破母源抗体,占位效应和刺激粘膜免疫和细胞免疫的显著作用,提出我国从龙头企业核心种猪场实施净化猪气喘病的可行思路,并提出具体的建议措施。     

猪肺炎支原体人工感染引起易感猪各肺叶病变差异的研究

为研究猪肺炎支原体对易感猪肺脏及各肺叶部位的损伤差异性,选二元猪(大白×二花脸)和三元猪(杜洛克×长白×大白) 2个品系,共6批次的猪肺炎支原体(Mhp)阴性猪,经人工"气管定位注射"途径感染猪肺炎支原体,于感染后28 d剖检,通过肉眼观察,运用"猪支原体肺炎的肺病变28分制评分法"对肺脏及各个肺叶部位所显示的病变情况进行测算、评分、统计和分析,并对所收集的肺泡灌洗液(BAFL)中猪肺炎支原体病原进行PCR检测。结果表明:猪肺炎支原体能引起肺脏各个肺叶产生特异性"虾肉样"病变,该病变主要呈现在心叶和尖叶部位。不同肺叶所呈现的病变程度存在一定的差异,其中猪肺炎支原体对心叶造成病变最严重,且右心叶比左心叶严重。猪肺炎支原体引起的右肺的病变程度高于左肺,推测其在右肺部位的定植水平可能高于左肺。通过猪肺炎支原体人工感染引起易感猪各肺叶病变差异的研究,为丰富猪支原体肺炎的临床诊断方法和致病机制、疫苗免疫效果评价研究提供了参考依据。     

PCV2对仔猪胸腺IL-2、IL-6和IL-10及其受体mRNA的影响及NO-NOS系统的调控

为了解猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirusⅡ,PCV2)引起仔猪免疫抑制的机制,研究了胸腺中抗感染免疫相关基因的动态表达变化及其调控机制.选取19头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体阴性的普通断奶仔猪,分为对照组(4头)和试验组(15头),试验组每头仔猪接种PCV2病毒悬液,分别在感染后0、14、21和35 d扑杀采集胸腺.用硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量,用比色法检测总一氧化氮合酶(TNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性,用TQ-PCR方法检测胸腺中IL-2、IL-6、IL-10及其受体mRNA的表达变化.结果显示:感染猪胸腺中TNOS和iNOS的活性在试验期间均显著高于对照猪(P＜0.05),NO含量在感染后14 d极显著升高(P＜0.01),IL-2和IL-6 mRNA的表达在感染后各时间点均低于对照猪,尤其在感染后21 d均极显著降低(P＜0.01);IL-10 mRNA的表达在感染后14 d极显著升高(P＜0.01);IL-6和IL-10与各自受体mRNA的表达变化均呈显著负相关(P＜0.05),NO与iNOS mRNA呈显著正相关(P＜0.05).研究表明:胸腺在感染早期表现出较强且适度的抗PCV2感染的免疫应答,感染中期呈现一定的免疫抑制,感染后期有所恢复;胸腺中细胞因子及其受体与NO-NOS系统的相互调节表现出复杂性与多层次性.     

猪圆环病毒Ⅱ型和巨噬细胞对体外培养仔猪淋巴细胞白介素-6和白介素-10及其受体表达的影响

选取5头猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体阴性的普通断奶仔猪,无菌取其脾脏制成单细胞悬液后,分设淋巴细胞(L组)、淋巴细胞+PCV2(L+V组)、淋巴细胞+巨噬细胞(L+M组)和淋巴细胞+巨噬细胞+PCV2(L+M+V组)4组进行体外培养。分别在培养后0 h、6 h、12 h和24 h收获淋巴细胞及其上清液。用ELISA检测上清液中猪淋巴细胞白介素-6(IL-6)和白介素-10(IL-10)的含量,用RT-PCR检测淋巴细胞中IL-6、IL-6R、IL-10和IL-10RmRNA的表达。结果显示:与L组相比,L+V组中IL-6的含量在攻毒后24 h显著升高(P0.05);PCV2在攻毒后12 h对IL-6RmRNA的表达呈显著抑制(P0.05);PCV2在攻毒后6 h显著促进IL-10的表达(P0.05)。上述结果表明,PCV2能促进淋巴细胞中IL-6和IL-10的表达;而巨噬细胞能抑制PCV2对淋巴细胞中IL-6表达的上调作用,同时协同PCV2促进淋巴细胞中IL-10及其受体持续性高表达,导致持续的免疫抑制,在PCV2的致病过程中扮演重要角色。     

猪肺炎支原体强弱毒株感染后呼吸道特异性sIgA抗体分泌规律差异性

检验猪肺炎支原体强毒株与弱毒株感染后呼吸道sIgA抗体活性,并比较其抗体分泌规律差异。分别使用猪肺炎支原体强毒JS株和弱毒168株接种实验猪,同时设置健康猪为对照组,按时采集鼻拭子样本。通过ELISA检测0,2,4,7,14,21,28,35,42,49和56d特异性sIgA抗体滴度,比较两组抗体分泌规律。结果显示,在接种4~7d之间,强毒组已出现阳性猪,14d时所有猪呈感染阳性。而弱毒组在14~21d之间开始逐渐出现阳性猪,35d时80%左右的猪呈阳性感染,随后下降。并且强毒组抗体平均滴度高于弱毒组。结果显示,强毒转阳更早,抗体滴度更高,持续时间更长;弱毒为猪支原体肺炎弱毒疫苗株,该菌株同样保持了良好的免疫原性,可刺激呼吸道黏膜产生特异的sIgA,但黏膜抗体转阳时间较晚,滴度较低。强弱毒株在黏膜抗体分泌方面的差异有助于临床上对猪肺炎支原体的感染以及活疫苗免疫进行区别鉴定。     

猪支原体肺炎活疫苗(168株)滴鼻免疫保护效果的研究

本研究通过滴鼻免疫新途径免疫猪支原体肺炎活疫苗168株,与肺内免疫组及对照组进行比较,来确定滴鼻免疫猪支原体肺炎活疫苗(168株)的免疫保护力。将20只猪随机分为肺内免疫组、滴鼻免疫组、健康对照组和攻毒对照组。定期观察和检测各组猪免疫后的临床症状。结果表明:滴鼻免疫组免疫后,猪群体温正常,无免疫引起的局部或全身不良反应,免疫途径安全可行;滴鼻免疫组和肺内免疫组与健康对照组相比,SIgA水平显著升高,差异极显著(P0.01),但滴鼻免疫组与肺内免疫组相比,差异不显著。流式细胞仪检测显示CD4+数值未发生显著性变化。肺脏剖检评分显示滴鼻免疫组的肺脏的病变水平与攻毒对照组相比呈极显著降低(P0.01),保护率达到60%,相对低于肺内免疫组100%的保护率。猪支原体肺炎活疫苗(168株)通过滴鼻免疫方式,可以产生较好的免疫保护力。     

顶点赋权图分析法在沼气工程系统中的应用研究

利用顶点赋权反馈图分析法分析江苏某猪场沼气系统工程的效益,并建立猪场排泄物无污染的仿真学模型。根据2011年江苏某猪场与年猪粪尿和沼气效益有关的顶点赋权反馈图对其中的权值进行量化,采用量化结果和农户液化气消耗情况及耕地面积,建立猪场排泄物无污染的仿真学模型。结果表明：2011年该系统中含有3条正反馈环（沼气能源效益正反馈环、施肥面积正反馈环和沼渣效益正反馈环）及2条负反馈环（沼气浪费负反馈环和沼肥浪费负反馈环）。建立了两套排泄物无污染的仿真学模型的调整方案：一是在平均存栏量（1 728头）不变的情况下与168户农户建立输气管道,供农户使用;二是按比例扩大规模至3 721头,并建立与周边所有361户农户的输气管道,进一步健全沼液灌溉渠,扩大沼液灌溉面积。