TET去甲基化酶对猪卵母细胞发育的影响

【目的】研究TET(ten-eleven translocation)去甲基化酶对猪卵母细胞发育的影响。【方法】将收集的猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)置于不同浓度(0(对照组)、100、200和400μmol/L)Bobcat339抑制剂的体外成熟培养液中培养42 h,测量卵丘扩展直径,统计成熟率,确定最小有效浓度。在体外成熟培养液中培养27 h后,利用免疫荧光(IF)检测5-甲基胞嘧啶(5mC)与5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)信号强度以及纺锤体组装情况;利用DCFH-DA染料检测卵母细胞活性氧(ROS)水平;利用JC-1染色法检测线粒体膜电位水平(MMP);利用ATP检测试剂检测卵母细胞ATP水平;利用实时荧光定量PCR检测42 h时COCs卵丘扩展相关基因表达水平和27 h时卵母细胞抗氧化相关基因表达水平。【结果】与对照组相比,100、200和400μmol/L组卵丘细胞扩展水平均极显著降低(P<0.01),100、200和400μmol/L组成熟率显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01),确定最小有效浓度为100μmol/L,后续试验均用该浓度。IF检测...     

CRISPR/Cas9基因编辑技术介导SST基因敲除细胞的制备

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术制备了SST基因敲除的细胞。在猪SST基因第一外显子区域设计2个向导RNA (sgRNA),用PX459构建成表达质粒,电转染猪胎儿的成纤维细胞,在48 h后用嘌呤霉素筛选细胞。通过PCR扩增、测序检测,在获得的13个克隆中,有2株细胞未检测到基因敲除,4株细胞发生单等位基因敲除,7株细胞为双等位基因删除。筛选到的纯合子单克隆细胞可用于制备SST基因删除猪。     

细胞质DNA对畜牧业生产性状的影响

从细胞质DNA组成、细胞质DNA变化、异常突变的威胁和胞质DNA资源的利用等四个方面论述了细胞质DNA特殊性及对畜牧业生产性状的影响。     

转基因动物技术及其在动物育种中的应用

本文简单介绍了转基因猪育种技术的研究意义、基本概念、研究方法以及在转基因猪育种中的应用,并对转基因猪育种的前景进行了展望。     

小鼠胚胎冷冻保存条件研究

为探索在实验室条件下最佳的小鼠胚胎冷冻保存条件.对不同发育阶段小鼠胚胎按照同一个冷冻程序进行冷冻;两个不同的冷冻程序对同一个发育阶段的小鼠胚胎进行冷冻.结果表明,-7℃平衡10 min,然后以0.3℃/min的速率迅速降至-35℃,-35℃平衡5min后投入液氮中,此冷冻程序比较适合小鼠胚胎冷冻;冷冻保存对16细胞以上的小鼠胚胎影响较小.     

体细胞核移植技术生产转基因猪胚胎的研究

以转染绿色荧光蛋白基因的猪胎儿成纤维阳性细胞作为体细胞核移植的核供体,体外成熟卵母细胞为核移植受体构建绿色荧光蛋白转基因克隆猪胚胎,研究供核细胞的处理、注核部位及重构胚融合/激活时间对转GFP克隆胚早期发育的影响.结果显示,胎儿成纤维细胞血清饥饿与非饥饿培养10 d处理组,采用卵周间隙核移植重构胚的卵裂率（82.35%和79.07%）差异不显著(P >0.05);体外培养42~44 h 卵母细胞进行胞质内和卵周间隙注核的重构胚胎,其卵裂率（81.11%和76.80%）差异不显著（P >0.05）;将卵周间隙注射法构建重构胚在0~1 h,2~4 h 和6~8 h 进行融合/激活操作,前2组重构胚卵裂率（75.61%和83.07%）无显著差异(P >0.05),但显著高于第3组（60.00%）的卵裂率(P <0.05).     

猪成纤维细胞的简易分离培养

比较了不同来源、不同状态组织和不同分离方法对猪成纤维细胞的影响,结果表明,离体组织长时间乙醇预处理和长时间储运会降低细胞活力,使生长速度减慢;初始原代细胞种类比较多,生长不均匀,只有传代培养3代以上,才能得到比较纯的成纤维细胞。     

用乙醇激活与电激活研究猪卵母细胞孤雌激活

以猪的体外成熟卵母细胞为实验材料,研究了乙醇激活、电激活对猪成熟卵母细胞体外孤雌发育的影响.结果表明,2个1.6 kV/cm的60 μs的电激活法卵裂率高(88.68％,94/106);使用8％乙醇处理10 min的卵裂率为84.21％(64/76).2个1.6 kV/cm的60μs的电激活法可以获得更高的卵裂率,为下一步研究奠定基础.     

贵州香猪零天断奶人工哺乳试验研究

为探索贵州香猪零天断奶人工哺乳技术程序,配合应用剖腹取胎净化技术对其净化作初步准备,将22头无菌剖腹取胎仔猪在不同环境条件下零天断奶人工哺乳,结果在隔离饲养条件下有5头仔猪健康成活,成活率为83.3%(5/6).仔猪在21日龄改为自由采食乳猪颗粒料后,出现补偿生长现象,平均日增重超过自然哺乳仔猪,且差异显著(P＜0.05);30日龄无菌取其新鲜粪便检测各种病原菌,同时随机选2头仔猪检测猪瘟病毒、猪丹毒杆菌、猪巴氏杆菌、猪细小病毒、口蹄疫、弓形体、大肠杆菌7种致病病原体,结果全为阴性.结果表明,通过对健康母猪剖腹取胎,所得仔猪在隔离饲养条件下零天断奶人工哺乳来实现贵州香猪的净化是完全可能的.