猪瘟病毒RT-LAMP-LFD检测方法的建立与应用

【目的】建立一种新型的、能在基层场地进行实时便捷诊断的猪瘟病毒检测方法。【方法】环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)-横向流动试纸条技术(Lateral flow dipstick,LFD)相结合,针对猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)NS5B基因设计一套特异性引物及生物素标记探针,结合异硫氰酸荧光素标记的扩增产物,建立RT-LAMP-LFD检测方法。【结果】所建立的方法能够特异地检测出CSFV的存在,检测PRRSV、JEV、PCV-2等其他病毒均为阴性;所建立的CSFV-RT-LAMP方法对RNA的最低检测限为50 pg;反应快速,整个扩增反应可在1 h内完成;操作简单,不需要PCR仪等复杂的仪器,结果可经肉眼观察。【结论】应用RTLAMP-LFD检测CSFV特异性强、灵敏度高,并且操作安全、简便、快捷,可以满足基层检疫的需要。     

MLKL基因敲除对猪伪狂犬病病毒复制的影响

【目的】构建混合谱系激酶结构域样(mixed lineage kinase domain-like, MLKL)基因敲除的PK-15细胞株(PK-15 MLKL-KO),研究敲除MLKL基因对猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)复制的影响。【方法】根据MLKL序列设计特异性编辑位点,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建MLKL-sgRNA编辑载体,转染至PK-15细胞,经嘌呤霉素药物筛选获得多克隆细胞系,通过有限稀释法获得PK-15 MLKL-KO单克隆细胞株。通过靶基因组PCR、测序和Western blotting验证MLKL基因在PK-15细胞上的敲除水平;采用Reed-Muench法检测病毒增殖水平;采用PI染色和荧光显微镜观察细胞坏死情况。【结果】试验成功构建MLKL-sgRNA载体,筛选出1株MLKL基因缺失647 bp的PK-15细胞株,Western blotting未检测到MLKL蛋白的表达。与PK-15细胞相比,PK-15 MLKL-KO细胞极显著或显著提高了PRV GD-WH(感染后36 h除外)和PRV Bartha-K61的病...     

开封市菊花产业状况与发展策略

开封作为中国菊花名城拥有丰富的菊花种质资源和深厚的菊花文化底蕴。自古以来开封爱菊、种菊、赏菊、咏菊之风盛行。北宋学者刘蒙在东京(今开封市)编写了中国第一部“菊谱”。开封菊花种植历史可以追溯到南北朝时期,至今已连续成功举办了36届菊花文化节。     

拧筋槭种子甲醇浸提液生物活性测定

为了研究拧筋槭种子深度休眠的原因,以拧筋槭种子为试验材料,采用甲醇浸提液提取种子的果皮、种皮及胚中抑制物质,研究各浸提液对白菜种子发芽率、苗高及根长生长的影响。研究表明,除30%种皮浸提液对白菜苗高生长略有促进作用外,各浸提液随着浓度比例的提高,对白菜种子的发芽率、苗高、根长生长及简化活力指数的抑制作用都逐渐增强。各浸提液浓度比例相同的情况下,胚的甲醇浸提液对白菜种子的发芽率、苗高、根长的生长抑制活性最强,果皮和种皮次之。说明拧筋槭种子的果皮、种皮及胚中均含有一些抑制物质,这些抑制物质的存在可能是拧筋槭种子休眠的主要原因之一。     

温度对白茨粗角萤叶甲生长发育及繁殖的影响

本研究在6个恒温(18、21、24、27、30、33℃)条件下,观察并记录了白茨粗角萤叶甲Diorhabda rybakowi卵、幼虫与蛹的发育历期和存活率,以及成虫的寿命和繁殖力。结果表明,卵和幼虫的发育历期随温度升高而缩短,发育速率随之加快。白茨粗角萤叶甲的卵、幼虫期、蛹、成虫产卵前期和世代的发育起点温度分别为(10.4±0.8)(12.2±0.7)(8.7±0.9)(16.4±0.8)℃和(8.6±0.9)℃,有效积温分别为(97.9±4.8)(158.2±7.9)(212.1±11.5)(158.6±13.6)日·度和(838.0±43.9)日·度。在低温18℃和高温33℃条件下,白茨粗角萤叶甲幼虫的存活率均降低,成虫的羽化率在33℃高温下显著降低,而卵的存活率高于幼虫期的存活率。白茨粗角萤叶甲生长发育和繁殖的最适温区为21℃相似文献   

猪伪狂犬病病毒野毒LNA探针real-time PCR检测方法的建立

本研究根据猪伪狂犬病病毒gE基因保守区域设计特异性引物和LNA-TaqMan探针,建立了基于LNA-TaqMan探针的猪伪狂犬病病毒野毒株荧光定量PCR检测方法.结果显示:所建立的方法能够特异性的检测出猪伪狂犬病病毒野毒株;灵敏度更高,最低检测下限为10个拷贝/μL;批内变异系数和批间变异系数分别为0.43％～0.64...     

河北省保定市兽医社会化服务体系建设探析

为了解保定市兽医社会化服务机构建设现状,完善兽医社会化公共服务职能,通过深入辖区内动物诊疗机构、规模养殖场、大专院校等单位进行调研,梳理了保定市在兽医公益性服务、兽医经营性服务等兽医社会化服务体系发展的概况。认为应通过全面加强公共服务体系建设,引导兽医社会化服务力量发展等措施,积极推进社会化服务体系建设;指出保定市面临公益性服务经费和保障力度不足、畜牧生产一线难以吸引年轻力量、执业兽医脱离畜牧生产一线严重的发展难题;为此提出了做好顶层设计、寻求有关部门与大型企业集团的有机结合、完善人才选用机制、提高乡村兽医服务能力等发展建议。     

基因重组技术在猪伪狂犬病毒基因工程疫苗中的研究进展

猪伪狂犬病是一种由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染引起的急性高度接触性传染病,可造成不同日龄的猪发病,给养猪业造成了严重的经济损失.预防、控制甚至消灭猪伪狂犬病的主要措施之一是疫苗免疫接种.通过基因重组技术对PRV关键毒力基因进行改造,敲除毒力基因或插入免疫增强基因,是降低PRV毒力或提...     

一株具有杀虫活性链霉菌的研究

通过卤虫初筛和花布灯蛾幼虫复筛,从土壤中获得1株具有较高杀虫活性的链霉菌,编号为LKY208,为明确该菌株的生防效果及分类地位,采用叶片浸渍法、饲料染毒法、玻片浸渍法及常规浸虫法分别测定了其对花布灯蛾、美国白蛾、小菜蛾、菜青虫、亚洲玉米螟、二斑叶螨、马铃薯瓢虫、桃蚜8种农林害虫的杀虫活性;并对该菌株发酵液的稳定性进行了初步研究,同时通过形态学和16S rDNA序列分析初步确定了其分类地位。结果表明:该菌株对8种试虫均有致死作用,杀虫谱广,其中对花布灯蛾的致死作用最强,48 h的校正死亡率达72.1%,菌株发酵液对温度耐受性强,在25～50℃杀虫活性稳定;pH 4～7范围内菌株杀虫活性较好,发酵液有较好的光稳定性、贮存稳定性和菌株遗传稳定性,具有较好的开发应用价值;经形态学和16S rDNA序列分析,初步鉴定菌株LKY208为雷格链霉菌Streptomyces regensis,此乃国内外首次报道将链霉菌应用于花布灯蛾的防治。     

椴树属植物无性繁殖研究进展

本文从嫁接、扦插和组培技术等方面总结了椴树属植物无性繁殖的研究进展,展望椴树属植物无性繁殖今后的研究重点及趋势.