实时荧光定量PCR在植物病害中的应用

实时荧光定量PCR技术作为一项新兴技术,越来越受到人们的重视。它以快速、准确定量、便捷等优点广泛应用于科学研究各个领域,近年来, 实时荧光定量PCR技术在植物病害研究上不断深入,大大提高了植物病害的检测效率和监测防治水平。本文重点就对实时荧光定量PCR技术在由真菌、细菌、病毒、线虫引发的植物病害的检测与应用;并结合了最近几年来应用于检测和鉴定植物病原病害的实时荧光定量PCR过程中引物与探针的设计、反应过程、结果评价情况做综合论述。     

烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv. tabaci)诊断试剂盒的制备及应用

 本研究通过筛选致病力强的烟草野火病菌株作为抗原,制备了烟草野火病菌特异性的抗血清,研制出SPA-ELISA、间接-ELISA 2种诊断试剂盒,使检测真正作到了简便、快速、灵敏、准确。同时,应用这2种诊断试剂盒对从田间及温室中采集的土壤、烟株根围、田间杂草、种子进行检测,明确了云南烟草野火病的初侵染源主要为种子和根围。     

番茄斑萎病毒属病毒检测技术研究进展*

 番茄斑萎病毒属病毒属于布尼亚病毒科,是一类世界性分布、寄主范围很广的植物病毒,可引起许多重要的园艺植物和农作物的严重病害,造成严重的经济损失。而高效的病毒鉴定或检测技术是防治病毒病害的关键基础之一。因此,本文就近年来番茄斑萎病毒属病毒鉴定与检测技术的研究进展作一综述,介绍生物学技术、电镜技术、血清学技术以及分子生物学技术在番茄斑萎病毒属病毒检测方法上的特点、发展应用方向等。     

芝麻菜下胚轴原生质体的分离培养及再生植株

以芝麻菜 Eruca sativa Mill 无菌苗下胚轴为材料,研究了光照条件、苗龄、酶液组合、酶解时间、酶液中甘露醇浓度及纯化条件对其原生质体分离制备的影响.以附加不同激素组合的改良KM8p培养基进行液体浅层培养.结果表明,无菌苗的下胚轴酶解10 h,用"过滤-离心-漂浮法"进行纯化后,可高效分离出有活力的原生质体;在改良的KMSp培养基的进行原生质体培养,当密度为7×104mL-1时,分裂频率最高,为24.8%.4周后形成大量的细胞团和肉眼可见的小愈伤组织,植板率为5.6%.然后转移到培养基上使其增殖,当愈伤组织长至3～5 mm时,将其转到分化培养基上诱导芽的分化,芽分化率为33.6%.当芽长2～3cm 时,将其切下插入生根培养基上诱导生根,可获得完整植株.     

华东4地区灰飞虱对8种杀虫剂的抗性监测

为明确2021—2022年华东4地区灰飞虱田间种群对常用杀虫剂的抗性现状及抗性机理,采用稻苗浸渍法分别测定了江苏仪征、盐城,浙江长兴和安徽庐江4地区灰飞虱田间种群对8种杀虫剂的抗性水平,并测定了3种解毒酶抑制剂增效醚(PBO)、顺丁烯二酸二乙酯(DEM)和磷酸三苯酯(TPP)对噻嗪酮防治灰飞虱的增效作用。结果表明：4个灰飞虱田间种群对噻嗪酮产生了中等至高水平抗性(抗性倍数RR=61.5～148.8);对毒死蜱产生了中等水平抗性(RR=14.9～28.3);对烯啶虫胺(RR=0.7～9.9)、噻虫嗪(RR=1.6～8.3)、呋虫胺(RR=2.9～10.0)和氟啶虫胺腈(RR=2.5～8.7)处于敏感至低水平抗性;对吡蚜酮(RR=1.0～5.0)和三氟苯嘧啶(RR=0.5～2.3)均仍处于敏感水平。增效试验结果显示,3种解毒酶抑制剂对噻嗪酮均无显著增效作用,表明3种解毒酶可能不参与灰飞虱对噻嗪酮的抗性。研究结果可为灰飞虱的田间抗性治理提供科学指导。     

温室非洲菊上西花蓟马种群动态和空间分布

 通过对云南省昆明市某花卉基地大棚非洲菊不同花期、不同时间西花蓟马种群动态和空间分布的调查,运用聚集度指标、Iwao和Taylor回归方程进行了其空间分布图式的测定。结果表明：西花蓟马为非洲菊上蓟马优势种,盛花期共数量占蓟马总数的96%,成虫数量随非洲菊开放花朵的增加而增加,到盛花期达最高密度15头/朵,而若虫主要集中在即将凋谢的花朵中,最高密度达36头/朵。5月中旬为蓟马的危害高峰期,且蓟马的总量随温度的增减变化明显。西花蓟马成虫和若虫在非洲菊上的空间分布格局为聚集分布,且聚集度随种群密度的升高而增加,成虫的聚集原因主要是环境因素和自身的习性,而若虫的聚集原因主要是环境因素。利用Iwao回归法中的α,β参数计算出在允许误差范围内的理论抽样数,为田间调查取样提供了有效方法,并为西花蓟马的预测及防治提供了理论依据。     

病毒载体介导的基因沉默体系对朱顶红褪绿环斑病毒NSm基因的沉默效应

为探讨烟草脆裂病毒（tobacco rattle virus,TRV）载体介导的基因沉默技术对朱顶红褪绿环斑病毒（Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV）运动蛋白基因NSm的沉默效应,以本氏烟Nicotiana tabacum为材料,构建靶向HCRV NSm序列的基因沉默表达载体pTRV2-NSm,经农杆菌Agrobacterium介导侵染烟苗,检测其侵染效率,人工接种HCRV到沉默表达载体处理过的烟苗,通过观察发病症状、统计病情并应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测TRV介导的基因沉默体系对HCRV侵染的沉默效应。结果表明,pTRV2-NSm沉默表达载体对本氏烟植株的侵染率达到95.00%,并且对本氏烟的生长无明显影响;与对照相比,经沉默载体处理的烟草植株接种HCRV后发病率显著降低,在接种后14 d发病率下降了90个百分点,病毒积累量明显下降,随着时间延长pTRV2-NSm对病毒的抑制效果持续升高,在接种后14 d对病毒病的防治效果最高,达93.13%;qRT-PCR检测发...     

云南不同地区蜘蛛兰上朱顶红褪绿环斑病毒RNA S序列分析

目的比较分析侵染昆明园林植物HCRV核壳体蛋白氨基酸序列,探究地理分布和寄主来源与病毒变异的相关性。方法2016年,在云南省昆明市园林景区采集疑似感染番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒样品,利用RT-PCR技术测定出葱莲(Zephyranthes candida)、文殊兰(Crinum asiaticum)、喜林芋(Philodendron schott)和酢浆草(Oxalis corniculata) 4份感染朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)的样品,通过克隆、测序获得4份样品的 S RNA序列,利用ORF Finder获得核壳体蛋白(nucleocapsid protein,N)并进行序列分析。结果文殊兰、喜林芋和酢浆草是首次报道的HCRV新寄主;4个HCRV分离物的N蛋白与NCBI首次报道的HLS1-2 N蛋白(登录号：AFX74694)一致性达到99.34%;系统进化树分析显示：4个HCRV分离物与GenBank公布的同样来自云南的株系聚为1支。结论病毒的地理分布相关性强于寄主相关性。     

云南烟草病虫害绿色防控实践技术探究

目的探究不同正番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV）分离物中NSs与其地理来源和寄主二者之间的相关性,阐明云南不同地区8个烟草样品TSWV NSs适应性进化情况。方法利用RT-PCR、克隆、转化和测序技术,从云南不同地区已经确定感染TSWV的8份烟草样品中获得NSs氨基酸序列。采用DNAMAN 8.0和MEGA 7.0软件,对云南不同地区8个烟草样品与GenBank公布的烟草、番茄和辣椒上31个TSWV NSs氨基酸序列进行比对分析。通过The Selecton Server软件,对云南不同地区8个烟草样品TSWV NSs氨基酸序列进行选择压力分析。结果云南不同地区8个烟草样品与同样来自中国云南烟草、番茄和辣椒上TSWV NSs氨基酸序列在系统发育树中处于同一支,亲缘关系最近;与来自韩国的番茄和辣椒上TSWV NSs氨基酸序列位于同一大支,亲缘关系较近;而与来自欧洲保加利亚烟草上TSWV NSs氨基酸序列处于不同分支,亲缘关系最远。在云南不同地区8个烟草样品TSWV NSs氨基酸序列中未检测到正选择位点。结论不同TSWV分离物中NSs与其地理来源有明显的相关性,但跟寄主的相关性不大。云南不同地区8个烟草样品TSWV NSs稳定的保持其增强病毒症状、抑制沉默等功能。     

朱顶红褪绿环斑病毒在细角带蓟马中的增殖规律研究

【目的】朱顶红褪绿环斑病毒(Hippeastrum chlorotic ringspot virus,HCRV)危害严重,细角带蓟马(Taeniothrips eucharii)是其主要的传播媒介。明确HCRV病毒粒子在细角带蓟马体内的增值规律,为HCRV防控提供理论依据。【方法】应用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR),结合HCRV N基因和细角带蓟马β-actin基因特异性引物,选用SYBR Green方法对获毒后不同虫龄细角带蓟马体内的HCRV含量进行定量分析。【结果】所建立的实时荧光定量方法可以准确特异地对细角带蓟马中的HCRV进行相对定量,发现1龄若虫的HCRV核酸含量最低,1龄若虫、2龄若虫及蛹中的病毒含量没有统计学差异,成虫的HCRV核酸含量最高。【结论】细角带蓟马在获毒后,体内HCRV核酸含量随着细角带蓟马的发育而增加。