新型阿卡斑病毒SYBR Green I荧光定量RT-PCR建立及广西边境地区蚊携带新型阿卡斑病毒调查

【目的】建立检测新型阿卡斑病毒（AKAV）的SYBR Green I荧光定量RT-PCR,并结合序列测定开展广西边境地区蚊携带新型AKAV调查,了解其流行趋势及遗传进化特征,为建立重要蚊媒病毒病预警机制提供技术支持。【方法】分别针对新型AKAV的S基因和M基因主要变异位点设计引物,建立SYBR Green I荧光定量RT-PCR并通过Ct值、标准曲线斜率、相关系数、扩增效率及扩增准确性等指标确定最佳反应体系及扩增程序;以优化的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测2019年6—10月在广西边境地区采集的139份蚊样品,获得的新型AKAV经测序后采用ClustalW构建遗传进化树。【结果】 SYBR Green I荧光定量RT-PCR最佳反应体系: SYBR Premix Ex Taq II 10.0 μL,上、下游引物（4 μmol/L）各1.0 μL,标准品或反转录产物2.0 μL,双蒸水补齐至20.0 μL。扩增程序: 95℃预变性30 s; 95℃ 30 s,64℃（S基因）/66℃（M基因）30 s,72℃ 30 s,进行40个循环。SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测新型AKAVS基因和M基因的极限为1.0×101 copies/μL和1.0×102 copies/μL,对应的扩增效率分别为98.61%和105.81%,但不能扩增蓝舌病病毒、鹿流行性出血热病毒、竹鼠圆环病毒和布鲁氏杆菌;检测S基因和M基因的批内重复试验、批间重复试验变异系数（CV）均低于5.00%。采用建立的SYBR Green I荧光定量RT-PCR成功从广西边境地区防城港市、东兴市、宁明县、大新县及北海市的阿蚊和库蚊中检出新型AKAV,且均属于基因Ia型,尤其与广东和湖南蠓虫、中华按蚊、致倦库蚊分离毒株具有较高的相似性。【结论】针对新型AKAV S基因和M基因建立的SYBR Green I荧光定量RT-PCR具有特异性强、灵敏度高、重复性好的特点,更适用于检测病毒拷贝数低的样品。此外,从广西边境地区蚊样品中检出的AKAV毒株均为新型AKAV,属于基因Ia型,与广东和湖南蠓虫、中华按蚊、致倦库蚊分离毒株具有较高的相似性,推测新型AKAV已在广西周边省份流行。     

一起鸭甲肝病毒1型和3型混合感染的研究报道

自山东省某疑似鸭肝炎发病鸭肝脏中分离到两株病毒,命名为TA1和TA2,分离毒分别回归3日龄雏鸭,可复制出鸭肝炎的典型症状和病理变化。利用鸭甲肝病毒1型（DHAV-1）和3型（DHAV-3）特异性引物进行RT-PCR 扩增,结果为阳性,经测序证实为DHAV-1和DHAV-3。分别扩增分离毒的VP1基因,经序列测定及遗传进化关系分析发现,分离毒TA1和DHAV-3毒株之间有较高的核苷酸序列相似性,与DHAV-3遗传距离最近,属于基因C型;分离毒TA2和DHAV-1毒株之间有较高的核苷酸序列相似性,与DHAV-1的遗传距离最近,属基因A型。     

藤稔葡萄春暖式大棚优质丰产栽培技术

藤稔葡萄进行春暖式大棚促早栽培,成熟期由露地栽培时的8月提前到6月下旬至7月上旬,提高了收益.总结出一套适合当地气候特点的大棚优质丰产栽培管理技术,包括栽培架式、整形修剪、扣棚管理、花果管理、温度调控、土肥水管理和病虫害防治等.     

产蛋鸡猝死症的诊断与防治

蛋鸡猝死症又称笼养蛋鸡疲劳症,多发生于高产鸡群尤其以夏季发病相对较高,该病主要引起高产鸡瘫痪、猝死以及产蛋减少。近年来该病在我市发病呈上升趋势。严重鸡群死亡率在10%以上。1发病情况2003年8月,我市高新区一养鸡专业户反映,其所饲养的2000只罗曼褐壳蛋鸡,在进入8月份雨季以来,鸡只死淘汰率一直偏高。每天少则死亡4～5只,多则死亡8～10只。该批鸡日龄在180d左右,产蛋率约90%,大群鸡采食、饮水正常,粪便较稀。陆续死亡已达107只。根据临床症状、剖检变化和治疗结果诊断为产蛋鸡猝死症,现将诊疗情况报告如下:2临床症状2郾1最急性型发病…     

磷酸泰乐菌素促进肉鸡生长的研究

本文报道在同一饲养条件下，饲料中添加50mg／kg（I）、20mg／kg（Ⅱ）和10mg／kg（Ⅲ）3个剂量的磷酸泰乐菌素组，同时设20mg／kg杆菌肽锌组（IV）和空白对照组（V），对450只AA肉鸡进行对比饲养试验。在整个试验期间，与空白对照组（V）比较，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和IV组肉鸡的增重分别提高了7.75％、6.84％、4.12％和3.01％；饲料／增重分别降低了9.1％、7.3％、4.1％和3.3％；肉鸡死亡率分别下降了4.8％、4.8％、1.1％和2.2％；经济效益分别提高了47.4％、43.0％、22.8％和16.7％。而且试验I组和Ⅱ组肉鸡的增重、饲料转化率和经济效益均明显（P＜O.05）高于试验IV组。试验各组肉鸡的屠宰指标无明显差异（P＞O.05）。试验结果表明，肉鸡饲料中添加磷酸泰乐菌素或杆菌肽锌均能降低肉鸡死亡率，提高肉鸡增重、饲料转化率和经济效益，且20mg／kg和50mg／kg磷酸泰乐菌素组的饲养效果优于20mg／kg杆菌肽锌和10mg／kg磷酸泰乐菌素组。     

静注与内服氟苯尼考在大肠杆菌感染肉鸡体内的药代动力学

以30 mg@kg-1单剂量静注(设健康对照)和内服氟苯尼考(florfenicol),研究了其在人工感染大肠杆菌肉鸡体内的药代动力学.给健康和感染肉鸡静注氟苯尼考后,血药浓度与时间关系均符合二室开放模型,选择的权重为1/C2,其主要药代动力学参数如下t1/2a为(44.67±9.42)min和(40.79±9.90)min,t1/2β为(161.02±27.30)min和(118.91±14.17)min,Vd(ss)为(1.15±0.41)L@kg-1和(1.02±0.22)L@kg-1,ClB为(0.73±0.12)L@kg-1@h-1和(0.76±0.14)L@kg-1@h-1,AUC为(41.65±6.94)mg@L-1@h和(40.88±6.03)mg@L-1@h.与健康肉鸡药动学参数比较,感染鸡的β(P＜0.01)、K21(P＜o.05)和K10(P＜0.01)显著性提高,t1/2β(P＜0.01)显著性下降,其他参数没有显著性改变(P＞0.05).给感染肉鸡内服氟苯尼考后,血药浓度与时间关系符合一室开放模型,其主要药代动力学参数如下t1/2ka为(25.49±14.04)min,t1/2ke为(104.31±14.55)min,tmax为(65.91±26.24)min,Cmax为(7.90±3.00)mg@L-1,AUC为(29.01±6.59)mg@L-1@h,F为(70.94±1.09)%.以上结果表明,鸡感染大肠杆菌后,氟苯尼考仍表现出分布迅速、广泛和消除较快的特点.内服给药后,氟苯尼考在大肠杆菌感染肉鸡体内生物利用度较高.     

高阿丁枫苗木分级研究

采用逐步聚类分析方法,对高阿丁枫苗龄为100天的苗木分级标准进行了研究,提出了以苗高和地径作为苗木分级的质量指标,通过计算分析得出了此苗龄下的高阿丁枫苗木分级标准:Ⅰ级苗,苗高≥13.0 cm,地径≥0.26 cm;Ⅱ级苗:13.0 cm>苗高≥10.6 cm,0.26 cm>地径≥0.21 cm;Ⅲ级苗:苗高<10.6 cm,地径<0.21 cm。     

高效液相色谱法测定饲料中三种β-兴奋剂

对饲料中三种β-兴奋剂类药物沙丁胺醇、非诺特罗和莱克多巴胺的高效液相色谱检测方法进行了研究.采用0.1 mol/L HCl-甲醇(9/1,V/V)提取药物,旋转蒸发至干,4 mL 0.3%乙酸复溶,依次用二氯甲烷和正己烷洗涤杂质.再用MCX固相萃取柱进一步净化样品.以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相,采用反相高效液相色谱-荧光检测法进行测定,激发波长220 m,发射渡长306 nm.结果表明,三种β-兴奋荆类药物方法的检测限均为17μg/kg,定量限均为50 μg,kg,平均回收率为88.6%～107.1%,变异系数为0.5%～9.7%.     

钟山寺水利枢纽装机容量选择

为了充分开发利用西枝江的水力资源，对钟山寺水利枢纽工程进行设计复查。针对钟山寺坝址以上１３ ．５ ｋｍ处平山水文站流量资料前后不一致的情况，采用相关性良好的其他两站的径流资料作为参证站资料，与平山站１９８５ ～１９９２ 年的径流资料进行相关分析，并据此展延平山站的各月径流，得出平山站的完整径流资料。然后，据此计算通过电站的实际流量和选择装机容量