豫陕两省14株鸡杆菌的gyrB、16S rRNA和rpoB基因序列比较分析

分析河南、陕西分离的14株鸡杆菌(Gallibacterium)之间的进化关系,及gyrB基因序列比较在该菌进化分析中的作用。PCR扩增鸡杆菌分离株的gyrB、16SrRNA和rpoB3个看家基因,PCR产物纯化后直接测序。将鸡杆菌分离株、国外参考株的3个看家基因序列进行比较分析,用Phylip 3.67软件构建进化树。结果表明,14株鸡杆菌与鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)模式株间的相似性为96.3%～98.0%(gyrB)、97.7%～99.6%(16SrRNA)和97.7%～99.0%(rpoB);14株鸡杆菌与鸡杆菌复合群1(Gallibacterium genomosp.1)参考株间的相似性为88.8%～89.9%(gyrB)、96.2%～97.5%(16SrRNA)和92.6%～93.6%(rpoB)。基于3个看家基因序列的进化分析,均显示14株鸡杆菌和鸭源鸡杆菌模式株形成单独的一个群。14株鸡杆菌分离株均属于鸭源鸡杆菌种;在3个看家基因位点,鸡杆菌河南株与陕西株之间、鸡杆菌输卵管炎病鸡分离株与健康鸡分离株之间均无明显遗传上的差异;gyrB基因序列分析可用于鸡杆菌分离株的种类鉴定,且对14株鸡杆菌与复合群1参考株的区别能力优于另外2个看家基因。     

雏鸡肠组织β1基因的鉴定及时空表达特性

设计1对引物,建立RT—PCR方法对β1基因mRNA进行鉴定;以GAPDH基因为内参,建立检测鸡β1基因表达水平的sYBRGreenI实时荧光定量PCR方法,并用此方法测定1～20日龄雏鸡不同肠段组织81基因表达水平。结果显示,从鸡肠组织成功鉴定出β1基因mRNA;检测内参基因GAPDH和目的基因β1的实时荧光定量PCR方法扩增效率一致（扩增曲线斜率差〈0．1）,满足使用比较Ct值法对B1基因mRNA进行相对定量分析的前提;扩增曲线、熔解曲线及凝胶电泳结果提示该方法特异性好。实时荧光定量PCR检测结果表明,1日龄雏鸡十二指肠和盲肠、10日龄雏鸡空肠和直肠、5日龄雏鸡回肠组织中β1基因相对表达量最高。结果表明,鸡肠组织中存在β1基因表达,并在不同日龄不同肠段表达水平存在差异。     

动物源E.coli O157∶H7 stx基因的检测与系统进化分析

为了解2009-2010年间在河南、甘肃地区分离鉴定的5株大肠埃希菌O157(E.coli O157)携带stx的情况及不同分离株间stx分子进化与变迁的情况,本研究利用PCR方法对分离株进行了stx基因检测,并完成了序列测定与系统演化分析.结果表明,5株不同动物源的分离株均含有stx1及stx2基因.序列分析结果显示5株分离株间stx1、stx2的核苷酸及氨基酸同源性均较高;stx1基因均与参考株中的山羊源和食品源E.coli O157菌株的同源性较高,进化树中遗传距离最近;分离株的stx2基因与多株牛源及少数人源参考株也具有较高的同源性,进化树中虽然5株分离菌均在一个大主干分支中,但分离株27与其他各分离株及参照株遗传距离最远,独自处于一次级分支中;分离株L37与W、12与50分别分布于牛源、人源E.coli O157小次级分支中;由此可推测,分离株所携带的stx1很有可能是经食品源或羊源E.coli O157传递而来;分离株L37与W、分离株12与50的stx2可能是由牛源、人源E.coli O157菌株传递而来,分离株27的stx2来源不清楚.研究结果表明,5株E.coli O157分离株均含有stx1、stx2基因,但两个基因的起源存在差异.     

猪魏氏梭菌病的实验室诊断

对4个规模化猪场不同日龄发病猪进行了病原学、毒力及毒素测定,并结合临床综合诊断确定为猪魏氏梭菌病。按细菌质粒特点对细菌分型作相关研究,但利用常规的质粒提取方法未能从所有参试菌株中提取到细菌质粒。说明对魏氏梭菌的质粒提取方法还有待进一步探索。     

微波辅助酸水解褐藻糖胶的研究

[目的]研究微波辅助酸解在低分子量海带褐藻糖胶制备中的可行性。[方法]采用酸提取法制备海带褐藻糖胶，测定在不同HCl浓度(0、1、2 mol/L)、不同降解时间(40、50、60 min)、不同降解温度(70、80、90℃)条件下微波辅助酸解得到的褐藻糖胶的分子量，分析不同降解条件对褐藻糖胶分子量的影响，并与水浴辅助酸解的结果进行对比分析。[结果]随着HCl浓度、降解时间、降解温度的升高，酸解产物的分子量降低，且温度对降解产物分子量的影响最大。与水浴加热相比，微波辅助酸解降解产物的分子量更低。在80℃,HCl浓度为1 mol/L,降解40 min以上，比较容易制备低分子量褐藻糖胶。微波比水浴加热更容易对褐藻糖胶的硫酸基造成破坏。在2 mol/L HCl条件下，微波和水浴辅助酸解60 min,分别在70和90℃观察到明显的硫酸基脱除现象。[结论]采用微波辅助酸解法制备低分子量褐藻糖胶时，要注意硫酸基脱除的问题。     

乙醇-硫酸铵双水相体系萃取虾壳中虾青素研究

采用乙醇-硫酸铵双水相制备虾壳中的虾青素，探索虾壳中虾青素提取的条件。结果表明：采用乙醇溶液，料液比1∶15,每次提取3 h,提取2次，提取效果较好。采用乙醇-硫酸铵双水相萃取虾青素，虾青素主要集中在上下两相之间，最佳条件：20%硫酸铵∶虾青素乙醇提取液(v/v)=2.5∶2.0,沉淀率为89.09%。经薄层色谱法和高效液相色谱法检测，双水相萃取可使虾青素提取液中的各类型虾青素都沉淀。     

仔兔大肠杆菌和志贺氏菌混合感染性肺炎病例

<正>1发病情况2021年9月13日，河南省荥阳市某农家乐主带死亡的比利时杂交兔到河南农业大学动物医学院就诊。该农户共养殖杂交兔约800只，其中种兔200多只。种兔免疫过兔瘟疫苗、多杀巴氏杆菌病疫苗和魏氏梭菌灭活苗。7月20日前，兔群基本正常。“郑州7.20”洪水冲塌兔舍，直接冲走100多只兔。洪水过后，兔舍潮湿，约8月初开始发生杂交兔死亡，死亡兔多为1～2月龄。种兔(成年兔) 2～3 d死亡1只，种兔3～12 d产仔一批。阴雨天持续一月余，期间杂交兔持续死亡，平均每天死亡5～8只。受新冠疫情影响未及时就诊。在兔发病初期，畜主曾给予抗生素、黄芪多糖等药物进行治疗，发现及时治疗的杂交兔，药物治疗有效。截至就诊时，种兔共死亡50多只，仔兔共死亡300多只。畜主每天仅早上喂一次兔全价料，其余时间全部喂草。种兔圈养，幼兔散养，水灾后饲养方式均改为笼养。农家乐养有鸵鸟，但鸟舍与兔舍中间有2 m隔离墙。