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旨在构建敖汉细毛羊BMP4基因的质粒及转染成纤维细胞后研究基因表达量的变化。以30日龄的敖汉细毛羊胚胎为研究对象。首先,通过RNA的提取反转录成cDNA参照GenBank中BMP4基因序列信息设计1对引物,通过PCR反应扩增获得BMP4基因片段、将得到的BMP4基因连接到pEASYTM-T1载体,构建pEASYTM-T1-BMP4重组质粒并转化大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建pcDNA3.1-BMP4重组质粒,转化大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将重组pcDNA3.1-BMP4表达载体转染成纤维细胞,后检测BMP4基因在mRNA和蛋白水平上表达量的变化。结果显示:pcDNA3.1-BMP4构建成功后转染成纤维细胞BMP4基因的mRNA和蛋白表达量均显著上升,且转染组的表达量极显著地高于对照组(P0.01)。成功构建了敖汉细毛羊BMP4基因的质粒,并且成功转染成纤维细胞,基因在细胞中过表达,结果可为进一步研究其功能奠定基础。 相似文献
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牛的体外受清所使用的卵巢一般需要从屠宰场运送到实验室,本试验探讨未受精卵长时间运送时的保存方法.试验1:经6小时运送保存时,体外受精后胚的发生率;试验2:在不同温度条件下培养,温度对未成熟卵成熟培养的影响;试验3:在试验2的基础上,采用细胞培养输送器,进行未成熟卵的边培养、边运送.对体外受精后胚的发生率的影响,结果表明:卵巢在2小时及6小时保存时,胚盘胞的发生率分别为16.1%,18.9,差异不显著.温度对未成熟卵的成熟率影响35,37,38.5,40℃分别为21.7%,74.1%.94.1%和86.7%,35~37℃没有获得高成熟率,使用细胞培养输送器胚盘胞的发生率为17.8%,比对照组的18.6%差异不显著.由此表明,在卵巢运送条件下,至少可保存6小时而不影响体外受精后胚的发生率,在更长时间运送时,可将卵子采取,边成熟熟培养过运送,最长运送时间可达24小时. 相似文献
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为了评估牙山黑绒山羊的健康状况,了解和掌握牙山黑绒山羊的品种特性,试验测定并比较了不同性别和不同月龄牙山黑绒山羊母羊的血液生理指标。结果表明:24月龄时,血小板总数、淋巴细胞绝对值公母羊间差异显著(P0.05);红细胞数、血红蛋白浓度、血细胞比容、血小板平均体积、血小板分布宽度公母羊间差异极显著(P0.01);其他指标间均无显著差异(P0.05)。血红蛋白浓度、凝血酶原时间、淋巴细胞绝对值不同月龄间差异不显著(P0.05),其他指标均差异显著或极显著(P0.05或P0.01)。说明牙山黑绒山羊血液生理指标在不同性别间和不同月龄间也存在着不同程度的差异。 相似文献
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