鸡传染性法氏囊病二价活疫苗与国外囊病活疫苗免疫效力比较试验

鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）是一种引起３～１２周龄雏鸡和青年鸡的高度接触性病毒传染病,疫苗免疫接种仍是防制该病的最主要手段,但近年来,鸡传染性法氏囊病病毒血清亚型或变异株和超强毒株的出现,使常规的Ｉ型疫苗常常造成免疫失败［２,３,４］,针对这种情况,我...     

猪流行性腹泻病毒S蛋白原核表达及其单克隆抗体制备

本研究以猪流行性腹泻病毒(PEDV)全基因组为模板,利用RT-PCR方法扩增PEDV S基因的亲水区,将其克隆至pMAl-c2E原核表达载体,获得重组质粒pMAl-c2E-PEDV-S。经EcoRⅠ/SalⅠ双酶切测序鉴定后,转化BL21菌,经IPTG诱导,成功表达了约74 kDa的重组蛋白MBP-PEDV-S,亲和层析法纯化重组蛋白。将重组蛋白免疫3只健康的6～8周龄雌性BALB/c小鼠,将小鼠脾脏B淋巴细胞与SP2/0瘤细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,获得了4株能稳定分泌抗PEDV S蛋白抗体的杂交瘤细胞株1B11、1B10、1C8、3L3,其腹水效价都高于1∶100 000。获得的4株单克隆抗体与PEDV经IFA和Western blot检测,结果显示均具有良好的反应性。而且3株单克隆抗体重链为IgG2a,1株重链为IgG2b;3株轻链为Kappa,1株轻链为Lambda。本研究表达了PEDV S蛋白并制备了单克隆抗体,为研究S蛋白的结构和功能提供了条件,为揭示PEDV致病机制奠定了基础。     

A型禽偏肺病毒F蛋白的原核表达与抗原性分析

利用大肠杆菌表达A型禽偏肺病毒(aMPV)F融合蛋白,并检测其抗原活性。通过扩增aMPV F融合蛋白的编码基因,与原核表达载体pBCX(pet43.1改造载体)连接构建重组表达载体pBCX/aMPV/A/F,从上清中非变性纯化重组蛋白,并进行Western-blotting分析。结果表明,该融合蛋白相对分子质量为74 kDa,具有与aMPV单克隆抗体良好的结合能力,说明此融合蛋白具有良好的抗原性,可用于抗体检测。     

间接法Dot－ELISA检测传染性法氏囊病病毒的研究

本文应用间接法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ进行鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）抗原的检测，其最低检出量为０．４３μｇ／ｍｌ。对人工感染／自然病例的各组织脏器进行检测，结果法氏囊的ＩＢＤＶ检出率为１００％，脾脏的检出率为８０％／８４．９％，其它器官组织如肾、胸腺、心、肝、肺、盲肠扁桃体、胸肌等均含有一定量的病毒（１１～６０％）。经统计学分析，法氏囊与脾脏的病毒检出率之间具有显著性差异（人工感染差异极显著Ｐ＜０．０１，自然病例差异显著Ｐ＜０．０５），进一步证实法氏囊是ＩＢＤＶ最主要的靶器官。试验结果表明，该法检测ＩＢＤＶ抗原，敏感性高、特异性强、重复性好，并且经济、方便、快速，适于大批量样品检测，可作为一种诊断ＩＢＤ的比较理想的方法。