供体细胞系基因座位特异DNA 甲基化多态性 及其与猪克隆效率的关联分析

利用甲基化限制性酶切试验(Combined bisulfite restriction analysis, COBRA）和亚硫酸盐转换PCR (Bisulfite sequencing PCR , BSP）后测序的方法,筛选猪体细胞克隆优势供体细胞提供基因座位特异的DNA 甲基化 遗传标记。比较8 个发育重要基因的差异甲基化区域(Differentially methylated regions,DMRs）在不同克隆供体细胞系 中的DNA 甲基化多态性,并与猪克隆成绩进行关联分析。结果表明院除了XIST-DMR2 和H19-DMR3 DNA 甲基化变 异幅度较小(低于10%）外,其他基因的相关座位均存在一定的COBRA 多态性,其中,LINE1-DMR1、POU5F1-DMR1 和NANOG-DMR1 等3 个差异甲基化化区域在克隆效率最高细胞系中处均处于最低程度的DNA 甲基化状态,因此, 可作为筛选猪体细胞克隆优势供体细胞系的潜在的DNA 甲基化遗传标记。     

华南地区不同耐热性荷斯坦奶牛血液生化指标比较

正应激是机体受到各种内外环境因素及社会、心理因素刺激时所出现的全身性非特异性适应反应,又称为应激反应。引发应激的因素——应激源有多种,主要有寒冷、酷热、潮湿、强光、雷电、气压、噪音、营养缺乏、感觉剥夺、刺激过量、心理社会因素等。热应激的应激源为高热高湿。热应激是指在高环境温度中的机体对热环境机体提出的任何要求所做的非特异性的生理反应的总和,表现为热喘息、心率加快、体内氧     

初生和有效乳头数与生产性状之间的相关性分析

本研究旨在评价在独立淘汰方法下初生和终测(有效)乳头数性状是否受到其他生产性状选择的影响。实验选取某大白猪核心育种场约6年的乳头数性状和主要生产性状数据,利用DMU软件和单/双动物模型计算乳头数性状的遗传力及其与主要生产性状之间的遗传相关,并作遗传趋势图。结果表明:在独立淘汰法下,初生乳头数可能因表型收集不准确而存在隐患;初生和有效乳头数遗传力分别为0.38和0.23,为中等遗传力性状;总产仔数和健仔数与乳头数性状呈弱遗传负相关(约-0.15左右),对产仔数性状高强度选择会对乳头数呈不利影响;对背膘厚和体长的选择会对乳头数有利。因此,从长远来看,在母系猪育种中,可能会由于对产仔数性状的高强度选育使母猪泌乳性能降低,提高仔猪饲养难度。     

猪群工艺管理新技术——我国的养猪生产模式及现代养猪生产工艺技术

近年来,随着我国国民经济的迅速发展和人民生活水平的不断提高,推动了养猪业的持续稳定增长,养猪业已成为我国国民经济的重要组成部分。     

外泌体在哺乳动物胚胎附植中的作用研究进展

外泌体的分泌是不同类型的细胞间信息交流的一种重要方法,近几年发现外泌体在胚胎附植中介导胚胎与母体的信息交流起重要作用。本文综述了外泌体的主要释放机制和分离鉴定方法、子宫内膜细胞和胚胎来源的外泌体在哺乳动物中调节胚胎附植的重要作用,为提高动物胚胎附植的成功率提供新依据,也为人类体外受精、辅助生殖技术的改进提供参考资料。     

不同添加剂对凉茶渣发酵品质的影响

广式液体凉茶经过浸提工艺之后,产生数量巨大的凉茶原料残渣,处理费用成本高,易造成环境污染。目前,关于凉茶残渣作为动物非常规饲料的相关研究较少,文章以蔗糖、尿素和纤维素酶为添加剂,研究其对凉茶渣发酵品质的影响。结果表明,未发酵凉茶渣中粗蛋白(CP)、粗脂肪(EE)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)和水溶性碳水化合物(WSC)含量分别为:11.94%、3.47%、74.95%、53.96%和0.52%。添加尿素、纤维素酶、蔗糖和尿素+蔗糖+纤维素酶组中NDF含量显著低于对照组(P<0.05),发酵后的凉茶渣ADF含量在49%~59%范围之间,单独添加尿素、纤维素酶和蔗糖的处理组能够显著降低半纤维素含量(P<0.05),添加0.6%尿素使发酵后凉茶渣水溶性碳水化合物(WSC)、乳酸(LA)和乙酸(AA)含量增加,并且丁酸(BA)含量最低,为0.17%。研究结果可为凉茶渣的有效利用提供参考。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1)的克隆及其在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达

β-葡萄糖苷酶是纤维素酶系三大成员之一,被认为是纤维素糖化的限速酶。本研究克隆黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1),并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中进行表达分析。以GenBank上黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因(bgl1)序列为模板,设计特异性引物,从黑曲霉(Asperjillus niger)基因组DNA中扩增目的片段,通过SOE-PCR的方法将猪腮腺分泌蛋白信号肽序列sp和bgl1相连,成功构建分泌型真核表达载体pc6-sp-bgl1,利用脂质体介导法瞬时转染哺乳动物CHO细胞,通过RT-PCR和Western blot检测,最后通过DNS(dinitrosalicylic acid)法测定表达产物酶学活性。PCR扩增得到的目的序列与文献报道序列的相似性为91%,预测的蛋白氨基酸序列相似性为99%。RT-PCR和Western blot检测证明,外源基因bgl1在CHO细胞中得到表达;分泌到细胞培养上清中的重组蛋白对水杨素的水解活性为1.74U/mL,说明重组蛋白具有β-葡萄糖苷酶活性。本研究克隆得到黑曲霉bgl1基因并在哺乳动物CHO细胞中进行表达,为β-葡萄糖苷酶在单胃动物中的利用提供了基础研究资料。     

蓝塘猪和长白猪生长发育的比较研究

以同期怀孕的6头经产蓝塘母猪和6头经产长白母猪所产纯种仔猪为研究对象,进行饲养对比试验.分别在1日龄、27日龄、90日龄、150日龄和180日龄5个阶段进行生长性能测定,并每品种随机挑选6头(公母各半)做屠宰测定试验.结果表明,长白猪在体高、体长、体重.生长速度、胴体率以及眼肌面积等生长性能指标上明显高于蓝塘猪,差异极显著;而蓝塘猪在肉色、剪切力、大理石纹、肌内脂肪含量等肉质性状指标上明显优于长白猪.     

我国设施养猪业的发展现状与问题

近年来,规模化养猪发展迅速,在一些经济发达地区,按产业化组织的现代养猪生产正在蓬勃发展。现代化养猪生产就是利用现代科学技术和现代工业设备来进行生产,要求生产过程中充分利用先进的机械设备来提高养猪生产效率。在这一发展过程中,养猪投资成本越来越高,人畜争粮矛盾日益突出,环保和疫病控制压力越来越大,     

转β-甘露聚糖酶基因克隆猪的制备与分析

【目的】将前期构建的含有黑曲霉β-甘露聚糖酶基因manA的质粒p PSPBGP-manA转染杜洛克猪胎儿成纤维细胞,利用G418筛选出转基因细胞系,通过体细胞核移植方法生产出转manA基因猪,利用分子生物学方法对转基因猪进行阳性鉴定、基因及蛋白表达水平的检测,同时测定转基因猪唾液β-甘露聚糖酶酶活、粪便营养物质含量,旨在为生产及进一步研究转manA基因猪提供一些科学依据。【方法】用限制性内切酶Not I将质粒p PSPBGP-manA线性化并通过脂质体法将其转入杜洛克猪胎儿成纤维细胞,然后用不同浓度的G418进行筛选、维持培养,将筛选后的细胞进行体细胞核移植生产克隆猪;克隆猪出生后采取尾组织样用酚-氯仿法提取基因组DNA进行PCR及Southern blotting鉴定阳性转基因猪;收集转基因猪唾液并利用DNS法进行β-甘露聚糖酶活性测定,同时收集转基因猪粪便测定粪便中营养物质含量;取转基因猪的腮腺、颌下腺、舌下腺、心脏、肝脏等组织并用Triol法提取RNA,然后进行RT-PCR鉴定manA基因的表达,再进行相对定量PCR检测manA基因在不同个体及组织间的表达差异;通过Western blotting技术分析转基因猪外源性manA基因的蛋白表达水平。【结果】经G418筛选后进行PCR鉴定得到阳性转基因细胞系;通过体细胞核移植方法生产出21头克隆猪,经PCR及Southern blotting鉴定出16头转基因猪,阳性率为76%;转基因猪唾液中β-甘露聚糖酶的活性为(0.092±0.003)U·m L-1,粪便中粗蛋白含量明显降低;经RT-PCR、相对定量PCR鉴定,manA基因在转基因猪腮腺和舌下腺组织中特异表达,其它组织不表达,腮腺组织表达量高于舌下腺组织;Western blotting检测发现在腮腺和舌下腺组织中有manA的表达。【结论】通过G418筛选得到转manA基因细胞系并成功得到转manA基因猪,外源manA基因能够在转基因猪中腮腺和舌下腺组织特异性表达,为转manA基因猪的生产及进一步研究奠定了基础。