应用竞争PCR检测丙酸盐对体外培养牛肝细胞丙酮酸羧化酶mRNA水平的影响

根据牛肝细胞内PC(丙酮酸羧化酶)基因组与PCcDNA相比多含有一个内含子序列．在其中再插入一外源DNA序列．从而使最终构建的突变体片段的长度大于PCcDNA的长度，成功构建了PCcDNA的竞争DNA模板，然后应用竞争PCR方法研究了丙酸盐对体外培养新生牛单层肝细胞PCmRNA水平的影响。使单层肝细胞培养液中丙酸钠浓度分别为0、1．5、2．5、3．5、4．5、8．5、11．5mmol／L，处理24h，提取总RNA、逆转录，在同一体系中用相同引物扩增目的带和竞争模板带。结果表明．随着丙酸钠浓度的升高．PCmRNA水平呈上升趋势，提示肝细胞内PCmRNA的表达水平受培养液中丙酸钠浓度的影响。     

鸡热应激的表现及其缓解措施

应激是机体对外界或内部的各种非常刺激,如高温,寒冷,饥饿,运输,缺氧,转群,饲料突变等所产生的非特异性应答.热应激足指外界环境温度过高(蛋鸡超过25℃,肉鸡超过28℃),由于体温调节及生理机能趋于紊乱而发生的一系列异常反应,并出现生产性能下降,甚至出现休克或死亡等现象.     

Ⅰ型和Ⅱ型酮病奶牛系统性炎症和肝损伤状态的分析与比较

通过比较工、Ⅱ型酮病奶牛血液中炎性因子和肝损伤等相关指标的差异,为奶牛不同类型酮病的诊断和防治提供数据支持.本研究选取Ⅰ、Ⅱ型酮病奶牛和健康奶牛各20头,采血后分离血浆或血清,分别检测炎性以及肝损伤相关指标.结果 显示,Ⅰ、Ⅱ型酮病奶牛血液非酯化脂肪酸(NEFA)含量,促炎因子如白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL...     

TNF-α诱导酮病奶牛脂肪组织脂解和胰岛素抵抗

选择15头健康奶牛与15头酮病奶牛,采集血液与脂肪组织.检测两组奶牛血清中非酯化脂肪酸(nonestester-ified fatty acid,NEFA)、β-羟基丁酸(BHBA)、葡萄糖(glucose)含量.利用Western blot检测脂肪组织中脂解酶HSL的磷酸化水平以及ATGL蛋白表达,胰岛素信号通路关键...     

微量元素铜对软骨细胞胰岛素样生长因子mRNA基因表达的影响

分离培养仔猪关节软骨细胞，从中提取总RNA，采用RT-PCR法扩增出关节软骨细胞中胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF—Ⅰ)的cDNA，与pMD18-T载体相连，转化JM109大肠埃希氏菌，提取质粒，经鉴定，所扩增的片段为目的片段。在此基础上培养仔猪关节软骨细胞，并在培养液中添加不同水平的铜，分别在第0、12、24、48h收集软骨细胞，提取总RNA，采用RT—PCR法扩增出IGF—Ⅰ的cDNA，以β-actin为内参，用凝胶分析系统对扩增出的cDNA进行扫描分析，计算IGF—Ⅰ mRNA基因表达的相对水平。结果，在细胞培养液中添加不同水平的铜能促进软骨细胞中IGF—Ⅰ mRNA基因表达，其中以铜浓度31．2μmol／L的效果最好。表明铜对软骨细胞的增殖作用是通过促进IGF—Ⅰ mRNA的表达来实现的。     

饲料铜水平对生长猪血清铜、血清锌和血清铁的影响

选 60头生长白猪 ( 1 9.2 6± 1 .2 0 kg)随机分成 6组 ,每组公母各半 ,使用硫酸铜作为铜源 ,在饲料中添加不同浓度的铜 ,对照组铜添加浓度为 0 mg/kg,高铜试验各组添加浓度为 1 0 0、1 5 0、2 0 0、2 5 0和 30 0 mg/kg。试验期为 80 d,期间每隔 2 0 d采血一次 ,检测血清铜、血清铁和血清锌的含量。分析结果显示 :高铜饲料可明显提高血清铜含量 ,降低血清锌含量 ,但血清铁无显著性变化。第 2 0 d高铜各组平均血清铜比对照组提高 1 7.7% ( P<0 .0 5 ) ,第 40 d提高 2 0 .2 % ( P<0 .0 5 ) ,第 60 d提高 8.6% ( P>0 .0 5 ) ,第 80 d提高 31 .5 % ( P<0 .0 1 ) ,30 0 mg/kg高铜组与对照组比较差异显著 ( P<0 .0 5 )。血清锌第 2 0 d和 40 d,高铜各组平均比对照组降低 1 1 .6%和 1 0 .3%。     

发展壮大农村集体经济的对策和建议

针对近年来农村集体经济面临的新矛盾和新问题,我们必须大力加强村级领导班子队伍建设,为发展集体经济提供可靠的组织保证;进一步解放思想,更新观念,开阔思路,选准发展壮大集体经济的新路子。     

乙酸和β－羟丁酸对体外培养牛肝细胞脂代谢部分关键酶表达的影响

本研究以体外原代培养的奶牛肝细胞为模型,添加不同浓度的乙酸（AcOH）和p羟丁酸（BHBA）,探讨其对奶牛肝细胞脂肪酸代谢关键酶基因表达的影响。添加不同浓度乙酸和β－羟丁酸,培养24h后,提取细胞总RNA。应用实时荧光定量PCR方法,检测脂代谢关键酶长链脂酰辅酶A合成酶1（ACSLl）、柠檬酸合成酶（CS）和乙酰辅酶A羧化酶α（ACCα）mRNA丰度的变化。结果显示,适当浓度的AcOH能够促进肝细胞脂肪酸活化及氧化途径关键酶ACSLl和CS的转录,而高浓度AcOH能够抑制脂肪酸从头合成途径关键酶ACCα的转录;高浓度BHBA能够抑制肝细胞ACSLl、CS和ACCα的转录。说明血液中适当浓度的AcOH能够促进肝脏脂肪酸氧化并抑制脂肪酸从头合成,高浓度BHBA能够抑制肝脏脂氧化和合成,影响乳脂前体物的供应,进而影响乳脂合成。     

黄曲霉毒素B1间接竞争化学发光酶免疫分析方法的建立

本试验建立了一种用于检测玉米中黄曲霉毒素B1的间接竞争化学发光酶免疫分析方法.以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢-对碘苯酚作为发光体系,通过对包被抗原、检测抗体和酶标二抗浓度的优化建立其标准曲线.所建方法的线性范围为0.31～20 μg/L,相关系数R2=0.992 7,灵敏度为0.09μg/L,处理内和处理间变异系数分别小于9.79％和13.08％,样品加标回收率为70.3％～100.85％.采用所建立的方法对10份玉米样品进行检测,检测结果与进口ELISA试剂盒的相关系数为0.831.结果表明本研究所建的方法可用于实际样品的检测.     

神经肽Y对犊牛肝细胞PC mRNA丰度及其活性的影响

取单层培养72 h生长良好的犊牛肝细胞,采用单因素重复试验,分别添加0、50、100、200、500、1000 pg/ml的羊体外合成神经肽Y（neuropeptide Y,NPY）,每个处理3个重复（每重复2孔）,再培养12 h后分别提取RNA和制备细胞上清液。应用荧光定量PCR方法检测外源NPY 对肝细胞糖异生关键酶丙酮酸羧化酶（pyruvate carboxylase,PC）基因表达的影响,同时用比色法检测其对肝细胞PC活性的影响。结果表明,一定浓度的NPY显著促进了肝细胞PC mRNA表达,增强了PC活性。