基因Ⅶ型新城疫病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据基因ⅤⅡ型新城疫病毒F基因裂解位点特征设计一对引物和TaqMan探针,建立一种敏感、特异、重复性良好的基因ⅤⅡ型毒株荧光定量RT-PCR鉴别检测方法。以体外转录法制备的cRNA标准品为标准阳性模板,构建标准曲线,并进行各项指标的检测。结果表明,建立的方法特异性良好,最低可检测到102拷贝·μL-1的模板RNA,敏感性比普通RT-PCR高100倍。本试验建立了基因ⅤⅡ型新城疫病毒荧光定量RT-PCR检测方法,且该方法能够鉴别检测常规方法不能区分的新城疫病毒基因ⅤⅡ型强毒株,表明本研究建立的方法可用于此种基因型毒株的快速鉴别检测。     

鹅副粘病毒F蛋白基因的克隆和序列分析

鹅副粘病毒分离株 YG97经 1 0日龄鸡胚增殖后纯化 ,提取病毒基因组 RNA,采用 RT-PCR一次性扩增出与预期设计的 1 .7kb大小相符的特异性条带。将扩增产物提纯后克隆入 p GEMR -T载体 ,经转化、筛选及酶切鉴定后 ,初步获得了含鹅副粘病毒 F基因的阳性克隆 ,并进行了序列测定。序列分析表明 :扩增的 F基因片段的长度为 1 695bp,共编码553个氨基酸 ,F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为 1 1 2 R-R-Q-K-R-F1 1 7,与 NDV的强毒株特征相符 ,同时也与鹅副粘病毒分离株致病性试验结果相符。同源性分析表明 :与国内标准强毒株 F48E9的核苷酸同源性为 86%,与国内外部分发表的其他 NDV毒株的核苷酸同源性在 84 %～ 89%之间 ,说明该毒株相对于经典的 NDV在 F基因上已发生了较大的变异     

东部沿海某县活禽市场禽流感感染状况调查

为了解东部沿海某县活禽交易市场的禽流感感染状况,分析相关风险因素,从而采取合适的干预措施减低其流行率,进行了4次连续横断面研究。结果发现:该县活禽市场的H7亚型流感流行率较高,为16.667%~50.000%;H5亚型流感流行率为0~33.333%;H9亚型禽流感流行率为0~16.667%。不同市场、不同摊位数、不同类型样品间的病毒阳性率差异较大。对时间因素和不同类型病原进行分析,结果发现该县活禽市场各时间点的流行情况差异不显著。本次调查表明,该县活禽市场存在多种病原,提示应加强生物安全措施。     

禽腺病毒江苏分离株的细胞培养特性

为进一步研究的生物学特性,应用鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚肾细胞(CEK)培养禽腺病毒江苏分离株,进行培养特性、血凝特性、理化特性、超薄切片观察和PCR检测。实验结果表明,CEF感染病毒后没有出现病变。CEK感染病毒后则表现出很强的聚集性并形成细胞团,有的成束状,最后脱落;Reed-Muench方法测得其TCID50为每0．1mL 10^-5.4。CEK核内存在大量70～80nm、呈典型的晶格状排列的腺病毒颗粒。     

鹅副粘病毒毒力特性的研究

新城疫病毒毒力的判定标准是根据国际上规定的３项指标,即最小致死量致死鸡胚平均死亡时间（ＭＤＴ）,１日龄雏鸡脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄非免疫雏鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）等加以评价。将分离到的１１株鹅副粘病毒中选取了其中３株,即ＨＧ９７Ｃ５,ＹＧ９７Ｆ１１,ＹＧ９８．２Ｃ４,按照新城疫病毒毒力判定的标准方法进行了一系列致病性试验。结果为：３株鹅副粘病毒的ＭＤＴ分别为５６．７、５２．０、５     

2016—2019年我国I类新城疫病原学监测与遗传进化分析

为掌握我国I类新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）的分布及分子演化特征,2016—2019年,随机从国内23个省（自治区、直辖市）998个采样点,采集家禽口咽/泄殖腔双拭子样本、野鸟粪便样本和环境样本共45 458份,通过病毒分离和RT-PCR鉴定,共分离到I类NDV 558株。从时间分布看,2016—2019年I类NDV分离率分别为0.95%、0.89%、1.88%和1.37%,有增高趋势;从地理分布看,我国16个省（自治区、直辖市）分离到I类NDV,主要集中于华东、西南和西北地区;从场点分布看,活禽批发市场和农贸市场的I类NDV阳性率明显高于养殖场和屠宰场;从宿主分布看,I类NDV主要来源于鸡和鸭,少量来自鹅、鸽和环境样本;从基因型分布看,558株I类NDV属于2个基因亚型,其中1.1.2亚型为近年来我国流行的主要基因亚型。研究表明,我国I类NDV污染面广,宿主范围广泛,且存在2种基因亚型。研究提示,应加强I类NDV的免疫、监测,同时加强饲养管理,提高家禽抵抗力,降低病毒基因变异致毒力增强的风险。本研究为我国科学防控新城疫提供了参考数据。     

禽副黏病毒4型荧光RT-PCR检测方法的建立

本研究根据GenBank发表的禽副黏病毒4型（APMV-4）基因组序列,在保守区域分别设计了特异性RT-PCR引物和荧光探针,初步建立了可用于检测APMV-4的荧光RT-PCR方法。特异性试验表明本方法特异性强,与新城疫病毒（NDV）、禽流感病毒（AIV）、传染性支气管炎病毒（IBV）、减蛋综合征病毒（EDSV）等没有交叉反应。灵敏度试验表明本方法的检测下限为1EID50,比常规RT-PCR的敏感度高100倍左右。本研究所建立的荧光RT-PCR方法具有快速、准确、灵敏等优点,可用于APMV-4样品的检测。     

兽医生物制品中常用灭活剂和冻干保护剂研究进展

微生物灭活和冻干是兽医生物制品制备过程中的常用技术,其对生物制品的抗原含量、核酸含量、免疫原性、稳定性和保存期影响较大.了解不同灭活和冻干技术的原理和适用性,对优化生物制品制备工艺,提高制品质量均有重要意义.常用的灭活剂有β-丙内酯、甲醛、烷化剂、Trizol试剂等,其中使用最多的是甲醛,但其存在破坏免疫原性、有致癌风...     

中等毒力新城疫病毒ND03-026株全基因组遗传特性分析

从2003年临床发病鸡群当中分离到1株NDV,经致病指数测定为中等毒力。通过RT-PCR技术扩增了其F基因主要功能区片段,并构建了遗传进化树,发现其在分类地位上属于基因Ⅱ型,与我国现用的疫苗株LaSota处于不同的亚群,且裂解位点的组成为典型强毒株序列。对其全基因组序列进行测定,结果已登陆GenBank,登录号为DQ060053。此分离株基因组由15 186个核苷酸组成,编码6种结构蛋白,顺序为3-′NP-P-M-F-HN-L-5′。通过对其6个编码区进行遗传进化与核苷酸和氨基酸同源性分析,结合致病性结果发现其与Roakin毒株的遗传关系最近。