禽流感病毒同义NP蛋白的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

为建立通用型禽流感病毒(AIV)快速检测方法,本研究将合成的同义NP (ConsNP)基因克隆于pET30a中,利用大肠杆菌系统进行原核表达,以纯化重组ConsNP蛋白作为包被抗原,建立了检测AIVNP抗体的间接ConsNP-ELISA方法,并优化了反应条件.结果表明:抗原包被量为1μg/孔;封闭剂为5％脱脂乳;一抗血清稀释度为1∶200; HRP标记的兔抗鸡IgG(酶标二抗)稀释度为1∶20 000;阴阳性临界值为:OD49nm值＞0.239.该间接ELISA方法与其他亚型AIV阳性血清均呈阳性反应,与新城疫病毒,马力克病病毒,禽传染性囊病病毒阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性和敏感性.本研究为进一步研制通用型的禽流感ConsNP-ELISA检测试剂盒奠定了基础.     

SYBR GreenⅠ荧光RT—PCR方法检测禽流感病毒

为建立检测禽流感病毒（AIV）的SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR方法，根据AIV的M基因保守区的核苷酸序列设计引物。用4株不同亚型的AIV感染MDCK细胞，收集感染6、12、24、48、72h的病毒。另外采取169份鸡的泄殖腔拭子和咽喉拭子。对上述样品的M基因进行检测，试图建立快速检测AIV的SYBR GreenⅠ荧光RT—PCR方法，并与普通RT—PCR方法和传统的病毒滴定方法进行比较。结果表明：此次建立的检测AIV的SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR方法能检测到感染MDCK细胞后72h的AIV，对169份泄殖腔拭子和咽喉拭子中的AIV检出率为5．33％（9／169），而普通RT—PCR方法检出率为6．51％（11／169），病毒滴定检出率为5．62（9／160）。对其他病毒（NDV、IBDV、IBV、VA）则未检测到，且整个检测过程只需4h，表明该方法特异、准确、快速。     

禽流感病毒H5HA、H7HA基因共表达核酸疫苗质粒的构建及其在体外的表达

为了获得既能对 H5亚型又能对 H7亚型 AIV攻击产生保护的核酸疫苗 ,设计构建了含有双顺反子的真核表达载体 ,用限制性内切酶从 PCIH7HA载体上切得 AIV H7HA基因的c DNA,此 c DNA含有 CMV启动子和 Poly(A)终止序列 ,使用 DNA 连接酶引入载体PCIH5HA中 ,最后获得双顺反子真核表达载体PCI-H5HA-H7HA,其中 H5HA和 H7HA基因都带有自己的 CMV启动子和 Poly(A)终止序列。选用 2 93 -T真核表达细胞系 ,用脂质体转染法导入细胞进行瞬时表达 ,转染后 48h用荧光标记的兔抗鸡 Ig G进行间接免疫荧光试验。结果表明双顺反子真核表达载体构建正确 ,且在真核表达细胞系中 H5HA和 H7HA基因都能获得表达 ,且 H5HA 基因的表达效果优于H7HA。这为进一步的动物免疫试验和疫苗效价检测试验奠定了基础     

广东省甜玉米/大豆间作模式的效益分析

过田间试验, 研究了甜玉米/大豆间作对甜玉米产量、主要农艺指标、养分利用率和光能利用率的影响。结果表明, 甜玉米/大豆间作模式的土地当量比大于1(1.07), 说明甜玉米/大豆间作具有一定的产量优势;与单作相比, 间作甜玉米千粒重提高17.88%, 差异显著; 甜玉米/大豆间作群体经济效益提高24.08%, 养分利用率提高54.09%, 两指标的差异达到极显著水平; 生长后期, 间作对甜玉米光能利用体现出一定的正效应, 播后55 d间作甜玉米光能利用率较单作增加28.44%。甜玉米/大豆间作不仅可改善作物群体结构, 提高自然资源利用率, 而且可减少化肥施用量, 具有显著的经济和环境效益。     

重离子12C6+治疗小鼠移植性肿瘤S180的试验研究

从实验肿瘤学、肿瘤病理学等角度对碳离子治疗小鼠移植性肿瘤S180进行了研究，结果表明，在有氧和急性缺氧情况下碳离子可有效治疗小鼠移植性肿瘤，碳粒子照射后主要引起肿瘤组织的坏死变化。     

不同亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的生长特性

禽流感（avian influenza，AI）是由正粘病毒科A型流感病毒（avian influenza virus，AIV）引起的禽类传染病。高致病力禽流感（HPAI）可引起禽类100％死亡，在世界范围内多次暴发，2004年年初HPAI再次在包括我国在内的一些亚洲国家暴发流行，但得到了很好的控制，7月份在泰国和我国的安徽省HPAI又有发生；低致病力禽流感（LPAI）一般不致鸡只死亡，但可以导致鸡产蛋量下降，同样制约着养禽业的发展，所以研究快速有效的诊断方法已刻不容缓。而且许多学者对MDCK细胞用于制作人流感疫苗作了大量研究。     

禽流感病毒N1和N2亚型神经氨酸酶RT-PCR鉴别方法的建立

针对家禽中流行较为广泛、危害相对大的禽流感病毒(AIV)N1、N2亚型神经氨酸酶基因设计了2对引物，建立了一种RT—PCR鉴别方法，其目的片段大小分别为358bp、377bp。经对A／goose／Guangdong／1／96(H5N1)、A／Turkey／England／N28／73(H5N2)、A／African starling／983／79(H7N1)和A／Turkey／Wiscosin／1／66(H9N2)病毒株的鸡胚尿囊液样品进行扩增，扩增片段的大小与预期大小完全相符。经对国内不同地区分离的16株AIV N1亚型和21株AIV N2亚型用RT-PCR方法检测，阳性检出率分别为87．5％(14／16)和95．2%(20／21)；对50份样品进行盲检，准确率为98％(49／50)。     

Re-8株H5亚型禽流感灭活疫苗对野鸟源H5N8流感病毒的免疫保护性研究

为评估当前应用的Re-8株种毒相关禽流感灭活疫苗对野鸟源H5N8流感病毒的免疫预防效果,本研究将重组禽流感病毒(AIV)H5亚型Re-8株灭活疫苗(H5N1亚型,Re-8株)和重组AIV(H5+H7)灭活疫苗(H5N1Re-8株+H7N9 H7 Re-1株)分别以0.3 m L/只的剂量接种3周龄SPF鸡,免疫3周时进行HI抗体检测和攻毒试验。结果显示,上述2种疫苗免疫的SPF鸡血清中针对H5亚型Re-8株抗原的HI抗体均在8 log2以上,以105EID50的剂量、鼻腔感染途径攻击野鸟源H5N8病毒BHG/QH/2/16和BHG/Tibet/3/16后,所有免疫组鸡在14 d观察期内均全部健活,不排毒,而对照组鸡在攻毒后4 d内全部发病、死亡、排毒。现地免疫重组AIV H5亚型三价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株+Re-8株)的商品蛋鸡直接进行HI抗体检测和攻毒试验,结果显示,免疫蛋鸡血清中针对Re-8株抗原的HI抗体平均滴度为8.3 log2,以相同攻毒方式和剂量分别攻击2株H5N8病毒后,免疫鸡也获得完全免疫保护,不发病、不死亡、不排毒。本研究结果表明,含有重组AIV H5 Re-8株抗原的灭活疫苗可有效防控野鸟源H5N8流感病毒,为我国及其他国家H5N8亚型禽流感免疫防控提供了科学依据。     

中国传统文化元素在现代园林景观设计中的应用

经过一段很长的时间之后,我国的文化逐渐地发展成了带有中国特色的传统文化体系。传统文化的元素不但使现在时代的文化研究的框架变得不再单一,而且还带动了现代园林景观的新的活力和生机。本文是把现代园林景观设计作为一个研究的对象,主要阐述了中国传统的文化元素在现代园林景观的设计中的应用技巧,然后还提出了一些创新应用方面的建议。     

高通量测序一株天鹅源H5N8亚型流感病毒遗传演化分析

为研究一株天鹅源H5N8亚型禽流感病毒(AIV)的遗传演化规律,本研究对2016年从山西省疾控中心送检天鹅样品中分离到的一株H5N8亚型流感病毒(A/swan/Shanxi/6/2016)的全基因组序列进行高通量测序及遗传演化分析。结果显示,分离的病毒为Clade 2.3.4.4分支高致病禽流感病毒(HPAIV);BLAST分析显示该分离株的NP基因与H3N8亚型AIV的NP基因具有较高同源性,而其它基因节段则分别与来自其它国家的H5N8亚型AIV的相应基因节段同源性较高,进一步选取与各基因节段核苷酸同源性较高的病毒株作参考序列构建其系统进化树,推测该分离株为一株重组病毒株。特殊氨基酸位点分析显示,其具有典型的禽型受体结合位点和典型的人型受体结合位点。并且M1蛋白、NS1蛋白和PB2蛋白具有H5N1亚型AIV对鼠致病性增强的分子标志,提示该株野鸟源流感病毒可能具备感染哺乳动物的能力。本研究对H5N8亚型AIV的综合防控具有一定的指导意义。