天祝白牦牛胚脸成纤维细胞分离培养与鉴定

为了研究牦牛胚胎成纤维细胞分离培养及鉴定方法,试验采取60日龄白牦牛胚胎,用组织块法分离纯化、传代培养,用免疫组织化学方法进行鉴定.结果表明:用组织块培养的成纤维细胞呈梭形,属典型成纤维细胞,免疫组织化学染色有95%以上细胞中间丝波形蛋白呈棕色着染(阳性).说明所培养的细胞为比较纯净的成纤维细胞.     

西安市宝鸡市新生荷斯坦小牛BVD/MD血清学调查

牛病毒性腹泻/黏膜病（bovine viral diarrhea/mucosal disease,BVD/MD）是由牛病毒性腹泻病毒（BVDV）引起的牛的一种以黏膜发炎、糜烂、坏死和腹泻为特征的疾病.自1946年Olafson等首次报道以来,本病在世界各国都有比较普遍的发生和存在,呈世界性分布,给养牛业造成巨大的经济损失.本病在国内某些地区感染也比较普遍,根据近年我国的疫病普查资料,已有15个省（市、自治区） 查出本病抗体或分离出病毒,感染动物包括牛、羊、猪、骆驼、鹿等,动物感染BVDV后可表现胃肠道黏膜损伤,因免疫抑制而引发继发性感染、白细胞与血小板减少、流产及牛的持续性感染等.封闭式牛群中呈暴发式,犊牛急性病例达25%,病死率为90%～100%.已成为牛最重要的传染病之一。     

脑心肌炎病毒VP3蛋白抑制I型干扰素信号通路促进病毒体外增殖的研究

天然免疫是抵抗病原微生物感染的第一道防线，为探究病毒蛋白在脑心肌炎病毒感染引起的天然免疫应答过程中的作用机制以及对病毒体外复制的影响，本研究应用分子生物学技术构建结构蛋白VP3的表达载体p CMV-Myc-VP3，转染HEK293细胞后，使其在细胞内过表达；感染病毒后，通过实时荧光定量PCR和TCID50分别检测病毒的基因组拷贝数和病毒滴度，以此验证VP3蛋白表达对EMCV体外增殖的影响；另通过荧光定量PCR检测VP3过表达对EMCV引起的IFN-β和信号通路相关因子m RNA转录水平的影响。结果表明，VP3蛋白可促进EMCV在HEK293细胞内的增殖，初步探索发现VP3蛋白可显著抑制IFN-β的表达。WesternBlot检测发现体外表达VP3后，MAVS蛋白的表达明显减少，但对MDA5表达无影响。试验数据初步表明，VP3蛋白可以通过抑制MAVS的表达拮抗I型IFN信号通路的活化，进而促进病毒增殖。     

兰州大尾羊肾和睾丸组织细胞的分离培养和鉴定

兰州大尾羊是中国濒临灭绝的物种，通过体细胞培养和长期保存，在细胞水平上保存珍贵的种质资源。采用胰蛋白酶消化分离并培养原代肾细胞和睾丸细胞，并通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞并用液氮保存，细胞复苏后进行活力、形态、生长特性、微生物污染和染色体等检查，保存兰州大尾羊26个个体的肾细胞和9个个体睾丸细胞，保存细胞生长良好，均呈成纤维型，平均复苏活力为98.6%和95.2%，生长曲线均呈“S”型，最大增殖密度分别为3.15×10⁵ mL^-1 和2.92×10⁵ mL^-1，倍增时间分别为29.3 h和30.8 h，细菌、真菌、病毒和支原体检查均为阴性，染色体为2n=54，二倍体占88%和90%，说明成功分离培养并保存兰州大尾羊肾和睾丸组织细胞。