布鲁菌基因缺失活疫苗（M5-90Δ26株）临床效果评估

为评估布鲁菌疫苗（M5-90Δ26株）冻干活疫苗的安全性和有效性,选取内蒙古7个规模羊场通过免前检测评估,分别筛选A组（阳性羊群）、B组（阴性羊群）、C组（流产严重的羊群）、D组（怀孕羊群）以皮下注射免疫方式进行接种M5-90Δ26株布病疫苗,并在接种后14、21、28、35、60、120及150 d分别采集血清。用虎红平板凝集试验对A、B、C、D组抗体阳性率、阳性羊群免后治愈率、流产羊群怀孕率进行统计,同时在接种疫苗后24～48 h内观察和记录免疫羊的健康状况。结果表明：接种后24～48 h内,免疫羊只未见不良反应;A组阳性羊群接种M5-90Δ26疫苗后120 d转阴率能达到38.8%;B组阴性羊群免疫后150 d转阴率能达到91.71%;C组流产严重的羊群免疫前流产率达85%以上,使用布病M5-90Δ26疫苗半年后,羊群怀孕率达到100%,减少因布鲁菌病（简称布病）引起的流产,同时也增加了养殖户的经济收入;通过对D组怀孕羊群产下的羔羊进行检测发现,羔羊1～2月母源抗体为40%～50%,3月龄后母源抗体基本消失。从布病M5-90Δ26疫苗抗体转阴率发现,B组150 d转阴率大于A组;...     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及三价灭活疫苗免疫效力分析

副猪嗜血杆菌是猪上呼吸道早期定植菌也是格拉泽病的病原体,给猪场带来较严重的经济损失。为了调查副猪嗜血杆菌血清型的流行情况,采用细菌分离培养、玻板凝集法及PCR方法,从广东、广西、山东、江苏、江西45个规模化猪场送检的疑似样品中共分离鉴定了34株副猪嗜血杆菌,其中6株(17. 65%)血清4型、9株(26. 47%)血清5型、8株(23. 53%)血清12型、4株(11. 76%)血清13型以及7株(20. 59%)未定型菌株。为了有效地防控副猪嗜血杆菌病的流行,以4、5、12血清型优势流行血清型制备3价灭活苗,用仔猪免疫/攻毒试验评价3价灭活疫苗免疫保护力。动物实验表明,该疫苗对副猪嗜血杆菌4型、5型和12型具有较好的免疫保护能力。     

牛病毒性腹泻病毒鉴定及分型RT-PCR检测方法的建立

旨在建立一种特异性检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的RT-PCR方法,并且可以实现在同一体系中对BVDV进行分型。根据GenBank中公布的BVDV基因组序列,针对高度保守的5′UTR区域分别设计鉴定及分型引物,建立牛病毒性腹泻病毒鉴定及分型RT-PCR检测方法。应用鉴定RT-PCR检测方法可从BVDV阳性毒株中扩增出288bp的特异性片段;而分型RT-PCR检测方法可在同一体系中从BVDV1型和2型毒株中扩增出大小分别为316bp和110bp的特异性片段,但对猪瘟病毒、牛副流感3型病毒及牛传染性鼻气管炎病毒等均为阴性,最低可检测出的病毒量分别为1TCID50/mL和10TCID50/mL。临床试验证明,建立的鉴定及分型RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,具有很高的实用价值,为进一步开展流行病学调查、病毒分离等提供可靠的技术手段。     

牛传染性鼻气管炎病毒部分糖蛋白的研究进展

牛传染性鼻气管炎又名牛疱疹病毒Ⅰ型感染症,是一种急性、热性、接触性传染病,该病能给养牛业造成重大经济损失.该病毒是双股DNA有囊膜的病毒,病毒囊膜糖蛋白对病毒的吸附、侵入和细胞间扩散是必需的,可刺激机体产生中和抗体.囊膜糖蛋白的研究不仅能了解病毒分子生物学的结构和功能,而且对该病的诊断和预防也具有重要意义.笔者就gB蛋白和gE蛋白的结构和分子生物学特性作一综述,并对其进行了展望.     

酸马奶中一株具有高效抑菌活性的乳酸菌的分离与鉴定

乳酸菌作为益生菌对人体健康十分有益,近年来关于益生菌的研究及应用发展较快。为了开发优质乳酸菌资源,试验采用常规的细菌分离鉴定方法,从酸马奶中分离了46株乳酸杆菌和24株乳酸球菌,对抑菌活性较强和生长较快的菌株进行生理生化初步鉴定,并在分子水平上进行保守基因16S rRNA和gyrB基因鉴定。结果表明:分离到的XM-38菌株具有较强的抑菌活性(可抑制大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、单增李斯特菌、枯草芽孢杆菌),XM-48菌株具有生长优势但没有明显的抑菌活性;结合生理生化和分子水平序列聚类分析,发现XM-38为干酪乳杆菌,XM-48为一株新的乳酸菌菌株。     

布鲁氏菌eryA基因的克隆、原核表达及生物信息学分析

为分析羊种布鲁氏菌Rev.I株的基因结构、功能及作为诊断抗原的可能性,从Rev.I株基因组中扩增eryA基因片段,构建重组质粒pET-30a-eryA并进行原核表达、Western-blot检测,同时对该基因进行生物信息学分析。结果显示:本试验成功克隆并表达了eryA基因;经Western-blot检测发现,该基因编码蛋白可与阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性;生物信息学分析显示,该蛋白没有跨膜区结构,无信号肽,二级结构中α-螺旋比重最大;抗原表位分析显示:该蛋白含有较多的抗原决定簇。因此,推测eryA蛋白有望作为布鲁氏菌的免疫诊断抗原,这为进一步探索布鲁氏菌基因工程疫苗的研制及iELISA诊断试剂盒的建立奠定了基础。     

禽呼肠孤病毒C-98分离株M1基因的克隆及序列分析

参考GenBank发表的禽呼肠孤病毒M1基因序列设计2对引物（M1-1、M1-2）。应用RT-PCR扩增禽呼肠孤病毒内蒙古分离株C-98的M1基因序列。将纯化的目的基因片断与PMD19-T载体连接并转化DH5α感受态细胞，将经鉴定为阳性的重组菌送生物工程公司测序。结果表明,ARVC-98株M1基因片段长2283bp，具有完整的开放性阅读框架，编码732个氨基酸残基的μ1蛋白。ARVC-98分离株M1基因与ARV参考毒株M1的核苷酸同源性为89．1％～99．7％，与哺乳动物M1基因序列同源性较低，约为28％。     

鸡传染性喉气管炎病毒的分离与鉴定

采用鸡胚传代方法从内蒙古地区两个发病鸡场分离到两株传染性喉气管炎病毒(分别命名为ILTV-NM98a、ILTV-NM98b株),进行了系统的常规生物学特性和部分分子生物学特性鉴定。结果表明,两个分离株对乙醚、氯仿、热均敏感。电镜下可见病毒粒子近似球形,有囊膜,大小在150~300nm之间。两分离株均能被标准阳性血清中和。接种60日龄抗体阴性鸡的发病率分别为100％和80％,死亡率分别为26.7％和6.7％。以两个分离株及参考株的DNA为模板,gB-1、gB-2为引物,以PCR方法扩增出gB基因片段,片段大小完全一致。扩增产物经Pst Ⅰ、Bg1Ⅱ、HindⅢ内切酶酶切后的酶切图谱与参考株完全一致。     

鸡沙门氏菌外膜蛋白亚单位疫苗的研究——Ⅱ油乳剂型(OE)亚单位疫苗的研究

用十二烷酰肌氨酸法提取鸡沙门氏菌外膜蛋白，作为抗原，制备油乳剂型（Oil Emulsion OE)亚单位疫苗。该亚单位疫苗为油包水（W/O）型，稳定性良好，安全可靠。对3周龄雏鸡用该疫苗肌注接种，6周龄攻毒，结果表明，接种800ugOMP/只油乳剂型亚单位疫苗的雏鸡对鸡白痢沙门氏菌或鼠伤寒沙门氏菌的攻击具有显著的免疫保护力。     

布鲁菌PCR检测方法的建立及其应用

本文根据已发表布鲁菌BCSP31基因序列,设计1对引物,以布鲁菌19号苗基因组DNA作为模板,建立诊断牛布鲁菌病的PCR方法,并对方法的特异性、敏感性及适用性进行验证.结果显示,PCR能扩增布鲁菌BCSP31基因特定序列.该方法对布鲁菌的最小检出量为9pg,对葡萄球菌26001株、大肠杆菌O78等7种参照菌株的核酸扩增结果均为阴性.建立的PCR方法具有快速简便、特异性强、敏感性高等特点.