布鲁氏菌内蒙古分离株omp31基因的克隆与序列分析

对三株布鲁氏菌内蒙古分离株的omp31基因进行克隆与序列分析.参照GenBank中布鲁氏菌的omp31基因序列,设计一对特异性引物,用PCR方法扩增布鲁氏菌omp31基因,对PCR产物进行克隆、测序,将测定序列拼接后与GenBank中获得的参考毒株omp31基因序列进行了比较.结果显示,三株布鲁氏菌分离株的omp31基因开放阅读框核苷酸序列同源性均为100.0%;与Brucella ceti B14/94、Brucella neotomae 5K33、Brucella suis 1330三个参考毒株omp31基因核苷酸序列同源性最高,为100.0%;与Brucella canis RM6/66、Brucella melitensis 183、Brucella melitensis 16M三个参考毒株omp31基因核苷酸序列同源性为99.9%;与Brucella melitensis Rev1参考毒株omp31基因核苷酸序列同源性为99.6%;与Brucella ovis ATCC 25840参考毒株omp31基因核苷酸序列同源性最低,为98.8%.     

禽呼肠孤病毒C-98分离株S3基因的克隆及序列分析

参考GenBank中禽呼肠孤病毒S3基因序列设计一对引物,以禽呼肠孤病毒内蒙古分离株(C-98)基因组RNA为模板,应用RT-PCR方法获得病毒的S3基因,并克隆到pMD19-T载体后测序。应用计算机软件将所测定序列与参考毒株ARV 176、ARV S1133、ARV 138的S3基因序列进行比较,核苷酸同源性分别为99.8%,99.6%,87.7%,推导其氨基酸同源性分别为99.5%,98.9%,94.8%。应用PHD程序和DNAStar软件,对S3基因所编码的σB蛋白结构进行预测,结果表明,σB蛋白为结构紧密的球状蛋白分子。     

禽呼肠孤病毒C-98分离株L1基因的克隆与序列分析

参考禽呼肠孤病毒S1133株（GenBank）L1基因序列设计3对特异性引物,采用RT-PCR方法对禽呼肠孤病毒内蒙古分离株C-98的L1基因进行了克隆和序列测定。结果表明：获得的C-98 L1基因全长3959 bp,其中包括21 bp的5’非编码区和56 bp的3’非编码区,阅读框位于5’端第22位核苷酸与3’端第3903位核苷酸之间。将C-98株与国内外禽呼肠孤病毒群和哺乳动物呼肠孤病毒群的不同分离株进行序列比较,结果显示：C-98与台湾地区分离株919和美国分离株1733、2408、S1133亲缘关系最近,其核苷酸同源性分别为99.8%、99.7%、99.7%、99.4%;与哺乳动物呼肠孤病毒L3基因核苷酸及其编码的氨基酸同源性较低,为43%～45%。     

内蒙古地区牛病毒性腹泻－粘膜病流行病学调查

采用微量细胞中和试验，对呼和浩特市、包头市、巴盟和伊盟地区部分牛场及旗县进行了牛病毒性腹泻－粘膜病血清抗体检测。共测２１６份血清，阳性１３５份，阳性率６２．５％，个别牛场阳性率高达１００％，证明内蒙古西部地区普遍存在本病。     

一种塞内卡病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种塞内卡病毒实时荧光定量PCR方法,研究针对塞内卡病毒3C基因保守区域设计了一对引物和探针,将3C基因克隆到pCR-4 TOPO载体中,以重组质粒为标准品,通过优化PCR反应条件,建立了一种检测SVA的实时荧光定量PCR方法。结果表明,该检测方法的敏感性达到2.5×10 copies/μL,灵敏度高于普通PCR;与其他相关病毒及细菌均不发生交叉反应,批内和批间试验重复性的变异系数(CV)均小于4%,具有良好的稳定性。研究建立的一种塞内卡病毒实时荧光定量PCR方法可以检测SVA的定性和定量,对SVA快速诊断检测具有重要意义。     

牦牛传染性鼻气管炎流行病学调查

巴州牦牛俗称天山耗牛,原产于西藏高原,后由西藏引进新疆与当地品种杂交而来.它以肉用为主,属肉、乳、毛兼用的原始牛种.主要分布在新疆的巴音布鲁克草原、巩乃斯林场、和静县、和硕县等海拔2 400～3 000 m的高寒草原上.为了摸清牛传染性鼻气管炎(IBR)在天山牦牛群中的流行,为检疫、防疫部门掌握疫情动态和制定可行的防制措施提供依据,对此进行了血清学(ELISA)检测,结果如下.     

鸡产蛋下降综合征病毒内蒙分离株的生物学特性研究

对鸡产蛋下降综合征病毒内蒙古地区分离株进行了生物学特性测定和血清学鉴定,结果表明,Ｂ４、Ｎ３株与１２７株均能抵抗乙醚、氯仿和胰蛋白酶,而在对酸、碱、温度及甲醛的稳定性测定中,Ｎ３株ＥＤＳ７６病毒对这些因素抵抗力强于Ｂ４株和１２７株,而Ｂ４株和１２７株ＥＤＳ７６病毒对这些因素的抵抗力基本相同,说明不同ＥＤＳ７６病毒株间理化特性上存在有差异。血清学试验结果表明,Ｂ４、Ｎ３株与１２７株ＥＤＳ７６病毒的血清学关系非常相近。     

鸡传染性法氏囊病诊断与防制的研究

鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由双RNA病毒科、禽双RNA病毒属传染性法氏囊病毒引起幼鸡的一种急性、高度接触性、     

内蒙古地区牛传染性鼻气管炎血清学调查

牛传染性鼻气管炎(Infectious Bovine Rhinotracheitis,IBR)是由牛疱疹病毒Ⅰ型(Bovine Herpesvirus-1,BHV-Ⅰ)引起的家养和野生牛的一种急性、热性、接触性传染病。临床表现形式多样,但以呼吸道症状为主,伴有结膜炎、流产、乳腺炎,有时诱发小牛脑炎等。急性IBRV呼吸道感染还可继发细菌性肺炎。此     

牛传染性鼻气管炎病毒gE基因SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

目的 建立1种特异、灵敏、高效的检测IBRV gE基因的荧光定量PCR方法,并为鉴别IBRV野毒株和gE基因缺失疫苗株的感染提供技术手段.方法 根据IBRV gE基因保守序列,设计一对引物,建立荧光定量PCR反应体系和反应条件,利用10倍梯度稀释病毒DNA进行荧光定量PCR扩增,以检测本试验建立的荧光定量PCR的灵敏度.用IBRV、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、MDBK细胞、牛血清等进行特异性检测.用模拟样品进行临床应用试验.结果 本试验建立的荧光定量PCR方法,其灵敏度约为70 DNA拷贝/μL,除了IBRV从其他病毒和样品未扩增出曲线,临床模拟样品检测结果为0.03TCID50.结论 本试验建立的荧光定量PCR方法具有特异性强、灵敏性高、快速,低污染等优点,因此临床上可以用于IBRV的检测和病原学调查.